三七胶囊灭菌方法优选

葛孝忠，吴朝倩，王汉波，赵风杰，张跃平

(浙江普洛康裕制药有限公司，浙江金华322118)

三七胶囊灭菌方法优选

葛孝忠，吴朝倩，王汉波，赵风杰，张跃平

(浙江普洛康裕制药有限公司，浙江金华322118)

目的筛选三七胶囊生产中三七生药粉的最优灭菌方法。方法比较干热灭菌、紫外线灭菌、热压蒸气灭菌、钴辐照灭菌4种方法，考察灭菌前后含量、细菌、霉菌总数变化。结果选用钴辐照对三七生药粉灭菌最合适。结论采用6;0 kGy的60Co-γ射线辐照灭菌最佳。

三七胶囊;三七;生药粉;灭菌方法;钴辐照灭菌;60Co-γ射线

三七为五加科植物三七Panax notoginseng(BurK)F;H;Chen的干燥根，目前已成为临床上常用的急、慢性软组织扭挫伤类非处方药。三七胶囊是由三七粉碎后直接灌装而成。由于三七药材不可避免地带有微生物，以生药粉(以下简称三七粉)入药，仅靠对三七药材水洗、加热灭菌和胶囊填充工序半无菌操作等措施，无法清除微生物，在实际生产过程中三七粉微生物限度极易超过2005年版《中国药典(一部)》的规定。因此，需要对三七粉进行合适的灭菌处理，以保证三七胶囊的药品质量。笔者比较了4种灭菌方法灭菌前后三七粉有效成分含量、细菌及霉菌总数变化情况，现报道如下。

1 仪器与试药

CT-C1型热风循环烘箱(常州市第二干燥设备厂);30 W紫外线光管;XGL;DFF-15B型机动门粉类灭菌干燥机(山东新华医疗器械股份有限公司);MG15型真空干燥箱(江苏常熟市医药化工设备总厂)，钴-60灭菌;LC-10ATVP高效液相色谱仪(日本岛津)。三七皂苷R1对照品(批号为110745-200415)、人参皂苷Rg1对照品(批号为110703-200424)、人参皂苷Rb1对照品(批号为110704-200318)，均由中国药品生物制品检定所提供;三七(批号分别为060301，060302，060303，云南文山产);所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 药材处理

取三七药材，洗净，置热风循环烘箱80℃烘干，粉碎，过100目筛，分成5份，其中1份不灭菌作为对照，其余4份分别采用干热、紫外照射、热压蒸气、辐射灭菌方式处理，共取3批药材进行重复试验(批号分别为060301，060302，060303)。

2．2 灭菌方法

干热灭菌法:用CT-C1型热风循环烘箱，在干燥温度100℃、物料厚度20 mm的条件下，干燥10 h。

紫外照射灭菌法:用30 W紫外线光管，使灯管距离物料30 cm，物料厚度10 mm，照射3 h。

热压蒸气灭菌法:用机动门粉类灭菌干燥机，温度控制在115℃，物料厚度15 mm，灭菌20 min后置真空干燥箱65℃干燥。

辐照灭菌法:将药材分装于聚乙烯塑料袋，送农业科学院作物与核技术利用研究所辐照中心，进行剂量分别为2;0，6;0，10;0 kGy的钴-60辐照，以未辐照三七粉作为对照。

2．3 灭菌效果检查

在灭菌当天检测细菌活菌总数和霉菌活菌总数，细菌用营养琼脂培养基，霉菌用玫瑰红钠琼脂培养基，细菌、霉菌活菌总数的测定均用平板菌落计数法。供试液的配制方法为:取供试品10 g，置100 mL量瓶中，加无菌的pH为7;0的氯化钠-蛋白胨缓冲液至100 mL，摇匀。照微生物限度检查法2005年版《中国药典(一部)》附录ⅩⅢC的平皿法检查。结果见表1及表2。

表1 常规方法灭菌前后效果比较

表2 辐照灭菌前后三七粉微生物及性状变化情况

2.4 有效成分含量测定

2;4;1 检测方法［1］

含量指标确定:结合目前对三七质量研究的总体状况，参照2005年版《中国药典(一部)》三七药材质量标准，检测人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1含量的变化情况。

色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按表3进行梯度洗脱;检测波长为203 nm。理论板数按三七皂苷R1峰计算不低于4 000。

表3 流动相梯度洗脱表

溶液制备:精密称取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rg1对照品和人参皂苷Rb1对照品适量，加甲醇制成每1 mL含三七皂苷R1 0;1 mg、人参皂苷Rg10;4 mg、人参皂苷Rb10;4 mg的混合溶液，即得对照品溶液。分别取两种药材粉末0;6 g，精密称定，研细，具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定质量，放置过夜，置80℃水浴上保持微沸2 h，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

测定法:分别精密吸取对照品溶液和两种供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，依法测定，即得。

2;4;2 检测结果

结果见表4和表5。

表4 热压蒸气灭菌前后三七中活性成分含量比较(%)

表5 辐照灭菌前后三七中活性成分含量比较(%)

2．5 稳定性考察

三七胶囊生产工艺中，在三七粉处理时增加了60Co-γ射线6;0 kGy辐照灭菌，以减少细菌和霉菌总数，重点考察6个月加速试验和长期留样试验中各因素的变化情况。试验结果表明:室温下3批样品自然放置24个月，与0月样品比较各项指标均符合规定。

3 讨论

干热灭菌和紫外灭菌的灭菌效果均不理想，不能将微生物量杀灭至规定限度内。热压蒸气灭菌对三七粉的灭菌效果较理想，但灭菌时三七粉水分增加，药粉结块，须经再干燥、粉碎而会增加二次污染几率，且药粉颜色明显加深，变至棕黄色，不符合三七胶囊质量标准性状要求。热压蒸气灭菌后三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1含量均明显下降，与黄朋纳等［2］的研究结果相符，说明不宜采用热压蒸气灭菌法对三七进行处理。

卫生部在1997年5月下发了通知(卫药发［1997］第38号)，将三七作为允许钴辐照药材的品种之一。辐照前后三七粉含菌量大幅度下降，细菌存活量随辐照剂量的增加而减少，6;0 kGy的辐照量可使三七粉微生物数降低到2005年版《中国药典(一部)》标准范围内，并不会引起有效成分的明显变化。故在三七胶囊生产工艺中增加三七生药粉用6;0 kGy剂量的60Co-γ射线辐照灭菌是合适的。

关于三七用60Co-γ射线辐照灭菌对三七药理药效的影响，李耀维等［3］进行了详尽的研究，结果表明，10;0 kGy及以下剂量的γ射线辐照不影响三七的止血作用。

［1］国家药典委员会;中华人民共和国药典(一部)［M］;北京:化学工业出版社，2005:10-11;

［2］黄朋纳，潘育方;高压蒸汽灭菌对三七中有效成份的影响［J］;科技资讯，2006，12:254;

［3］李耀维，张素梅，车轩;γ射线辐照灭菌对三七止血抗炎作用的影响［J］;长治医学院学报，1995，9(4):285-287;

TQ461;R282．4

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1006-4931(2010)23-0021-02

2010-01-06;

2010-05-27)