蒽酮-硫酸法测定参芪注射液中糖含量△

孙博航，张伟，龙志敏，李楠，吴立军，高慧媛*

(1.沈阳药科大学中药学院，辽宁 沈阳 110016；2.中国医科大学附属第一医院药剂科，辽宁 沈阳 110001)

辽宁省教育厅科学研究项目(20060879)

*高慧媛，E-mail：gaohuiyuan1997@yahoo.com.cn

蒽酮-硫酸法测定参芪注射液中糖含量△

孙博航1，张伟2，龙志敏1，李楠1，吴立军1，高慧媛1*

(1.沈阳药科大学中药学院，辽宁 沈阳110016；2.中国医科大学附属第一医院药剂科，辽宁 沈阳110001)

目的对参芪注射液中糖含量进行测定，提供可行的糖检测方法。方法采用蒽酮-硫酸法,以葡萄糖为对照品，测定总糖的含量。结果葡萄糖的浓度0.02～0.2mg·mL-1(r=0.9996)线性关系良好，平均回收率分别为93.1%(RSD=1.4%)(n=6)。5批供试品测定，折合原药材总糖平均含量参芪为0.45g·g-1，黄芪为0.19g·g-1，党参为0.69g·g-1，参芪注射液为22.5mg·mL-1。结论本研究建立的方法可用于参芪注射液糖含量的测定，并为质量控制提供参考依据。

参芪注射液；蒽酮-硫酸法；糖含量

参芪注射液采用我国传统的补气药物党参、黄芪为主要原料,经高新技术提取有效成分,精制而成的纯中药大输液,具有益气扶正的功效,与化疗药物合用有助于提高疗效,保护血象，可以改善患者免疫功能、气虚症状及生存质量,对抗癌药物有显著的增效减毒作用。本文采用蒽酮-浓硫酸法[1]对参芪注射液中总糖含量进行测定，为其质量控制研究提供一定参考。

1 仪器与试药

UV-1700紫外分光光度计(日本岛津公司)，离心机(北京医用离心机厂)。D-无水葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所，批号110833-200302，供含量测定用)，硫酸，蒽酮，重蒸水，其他试剂均为分析纯。黄芪、党参样品分别购于同仁堂药店，经沈阳药科大学孙启时教授鉴定为正品。

2 方法与结果

2.1对照品母液及对照品溶液的制备

精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品0.025 0g，置25mL量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释到刻度，摇匀，即得对照品母液(1.0mg·mL-1)。

精密量取对照品母液1mL，定溶至10mL容量瓶中，即得对照品溶液(0.1mg·mL-1)。

2.2供试品溶液的制备

按参芪注射液制备方法[2]，取黄芪、党参粉末各约2.5g，以及参芪5g(黄芪、党参粉末各约2.5g)精密称定，置煎煮器中，加水适量，煎煮2次，第1次为2h，第2次为1.5h，合并煎煮液，过滤，滤液浓缩至约1mL，然后加入乙醇至含醇量为60%，静置24h，过滤，回收乙醇后，再加乙醇至含醇量为70%，静置24h，过滤，回收乙醇，又加入乙醇至含醇量为80%，静置24h，过滤，回收乙醇至无醇味，加蒸馏水至8mL，加入0.1g活性碳，100℃加热30min，过滤，滤液中加入1%滤纸浆。冷存12h，过滤，用NaOH溶液调pH至7，将溶液转移至250mL量瓶中，加水稀释至刻度，从中吸取1mL定容至100mL，即得。

2.3蒽酮-硫酸溶液的配制

称取蒽酮50mg，置于锥形瓶中，加蒸馏水25mL溶解，然后加入硫酸75mL，即得。临用新配。

2.4检测波长的确定

对照品与供试品的蒽酮-硫酸溶液均在624nm处出现最大吸收，因此选择该波长作为含量测定的检测波长。

2.5测定法

取无水葡萄糖对照品约0.025g、黄芪、党参粉末各约2.5g，以及参芪5g(黄芪、党参粉末各约2.5g)，精密称定，并按照2.1和2.2项下制备对照品和供试品溶液。分别精密吸取对照品、供试品溶液1mL置于10mL具塞试管中，加入4mL蒽酮-硫酸溶液，摇匀，用蒸馏水定容至10mL。置沸水浴中加热15min，取出，放入冰浴中冷却15min，以相应的试剂为空白，在624nm处测定吸光度。并使用外标一点法计算含量。

2.6标准曲线绘制

精密量取对照品母液(1.0mg·mL-1)1，3，5，8，10mL，分别置于50mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，配置成0.02，0.06，0.1，0.16，0.2mg·mL-1的葡萄糖对照品溶液。按照2.5项下,自“置10mL具塞试管中”起，依法测定吸光度。以吸光度为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制标准曲线。吸光度Y与质量浓度X(mg·mL-1)的回归方程为：Y=6.182 5X+0.002 7,r=0.999 6。葡萄糖对照品溶液浓度在0.02～0.2mg·mL-1线性关系良好。

2.7精密度试验

精密量取对照品溶液，照2.5项下，自“置10mL具塞试管中”起，依法测定吸光度。重复测定5次，记录吸光度值，计算仪器精密度RSD=0.3%。

2.8重复性试验

取黄芪、党参粉末各约2.5g，以及参芪5g(黄芪、党参粉末各约2.5g),平行称取5份，精密称定，照2.2项下方法制备供试品溶液，照2.5项下进行显色和测定，记录吸光度值。经计算，折合原药材，黄芪平均糖含量为0.19g·g-1，RSD=2.0%。党参平均糖含量为0.69g·g-1，RSD=1.8%，参芪平均糖含量为0.45g·g-1(参芪注射液22.5mg·mL-1)，RSD=2.3%。表明该法重复性良好。

2.9稳定性试验

精密量取黄芪、党参和参芪供试品溶液，在0，10，15，20，25，30min内进行测定，照2.5项下进行显色和测定，记录吸光度值并计算含量，其RSD分别为2.1%，1.9%，1.8%，表明供试品溶液在30min内稳定。

2.10回收率试验

称取已知含量(0.45g·g-1)的参芪粉末约2.5g，共6份，精密称定，加入葡萄糖对照品适量，照2.2项下方法制备供试品溶液，照2.5项下进行显色和测定，记录吸光度值，计算回收率，结果见表1。

2.11样品测定

取黄芪、党参粉末各约2.5g，以及参芪5g(黄芪、党参粉末各约2.5g)精密称定，照2.2项下方法制备样品溶液，精密量取对照品溶液,照2.5项下进行显色和测定，显色后测定吸光度值，计算含量，结果见表2。

表1 参芪粉中糖加样回收率试验

表2 参芪注射液中糖含量测定 /g·g-1

注：(1)n=5；(2)*折合参芪注射液中总糖含量为22.5mg·mL-1

3 结论与讨论

蒽酮-硫酸溶液的显色原理是多糖在浓硫酸的作用下，水解成单糖分子，并迅速脱水生成糖醛，然后糖醛与蒽酮缩合成糖醛衍生物，呈蓝绿色。另外，在使用硫酸-蒽酮显色剂时，由于蒽酮见光易分解，因此，所用试剂必须现用现配。

作者首次建立了参芪注射液中糖含量测定方法，并考察了参芪注射液制备方法的可行性。测定结果表明单煎黄芪、党参测得的糖含量大致等于合煎的糖含量。折合原药材中参芪总糖的含量为0.45g·g-1，参芪注射液中总糖含量为22.5mg·mL-1。测定结果可为参芪注射液的质量控制提供科学依据。

[1] 骆苏芳，彭树灵，刘国章，等.蒽酮硫酸法测定益元口服液中总多糖的含量[J].广东药学院学报，2007，23(1)：3-5.

[2] 文瑞良，郭振良，刘月亮.参芪注射液的研制[J].中药材，1996，19(1)：35-36.

TheSugarContentAnalysisofCodonopsis-AstragalusRootInjectionwithAnthrone-sulfuricAcidMethod

Sun Bohang1, Zhang Wei2, Long Zhimin1, Li Nan1, Wu Lijun1, Gao Huiyuan1

(1.SchoolofTraditionalChineseMateriaMedica,ShenyangPharmaceuticalUniversity,ShenyangLiaoning110016,China;2.TheFirstHospitalofChinaMedicalUniversity,ShenyangLiaoning110001,China)

Objective: To establish a method to analysis the sugar content in the Codonopsis-Astragalus root injection.MethodsPerform the analysis with anthrone-sulfuric acid method using glucose as the standard sample.ResultsThere were good linear relation between the0.02mg and0.2mg·mL-1(r=0.9996)of glucose and the average recoveries was93.1%(RSD=1.4%)(n=6). The average sugar contents in the astragalus, codonopsis, astragalus-codonopsis and injection were0.19g·g-1,0.69g·g-1,0.45g·g-1and22.5mg·mL-1respectively.ConclusionThis research gives a useful method for the analysis of the sugar content in the Codonopsis-Astragalus root injection.

Codonopsis-Astragalus root injection; Anthrone-sulfuric acid method; Sugar content

2009-09-03)