FT-IR法定性鉴别熊胆粉等常见动物胆类药材

袁丹，金凤，于山川，潘英妮，宋爱华,袁园

(1.沈阳药科大学中药学院，辽宁 沈阳 110015；2.武警四川总队医院，四川 乐山 614000)

*袁丹，E-mail： yuandan_kampo@163.com

FT-IR法定性鉴别熊胆粉等常见动物胆类药材

袁丹1*，金凤1，于山川1，潘英妮1，宋爱华1,袁园2

(1.沈阳药科大学中药学院，辽宁 沈阳 110015；2.武警四川总队医院，四川 乐山 614000)

目的建立熊胆粉与猪胆、牛胆、羊胆的快速定性鉴别方法。方法采用FT-IR法测定熊胆粉、牛胆、猪胆和羊胆IR光谱，分析常见动物胆类药材的IR鉴别特征。结果熊胆粉IR光谱特征为：1 655cm-1和1 545cm-1有酰胺基(-CO-NH-)双峰，1 216cm-1和1 048cm-1为-SO3H双强峰，且T 1 216cm-1/2 930cm-1约为1.0；牛胆、猪胆和羊胆等动物胆类药材IR光谱不具备或同时具备以上3个特征。结论FT-IR法定性鉴别熊胆粉与牛胆、猪胆和羊胆等其他动物胆类药材具有操作简单、分析时间短和鉴别特征明显等优点。

动物胆类药材；FT-IR法；定性鉴别

熊胆粉为黑熊SelenaretosthibetanusCuvie经胆囊引流胆汁的干燥品，具有清热，平肝，明目功效。现代研究表明：引流熊胆粉主要成分和药理作用等与天然熊胆类似，主要成分以牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)为主，同时含牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)、牛磺胆酸(TCA)、牛磺去氧胆酸(TDCA)、UDCA、CDCA和CA等游离胆汁酸[1,2]。卫生部熊胆粉质量标准[3]中，采用薄层色谱法定性鉴别熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸。检查规定：不得检出猪去氧胆酸、糖和异性有机物等。采用高效液相色谱法测定牛磺熊去氧胆酸含量不得少于23.0%。然而，由于熊胆粉市场价格昂贵，药材市场上常有以牛、猪、羊胆汁干燥加工成粉混充熊胆粉出售或猪、羊胆粉混充牛胆粉出售等现象。薄层色谱和高效液相色谱等定性方法操作比较繁琐，分析时间较长，且需要相应胆酸类成分对照品进行鉴别试验。傅立叶变换红外光谱仪(FT-IR)通常用于化学物质的结构鉴定，具有分辨能力高、扫描时间极快、分析灵敏度高等优点，为此，本研究建立了FI-IR法快速定性鉴别熊胆粉与牛、羊、猪胆汁粉的方法。

1 仪器和试药

瑞士BrukerIFS-55型傅里叶变换红外光谱仪，日本东京理化器械株式会社FD-5N型台式冻结干燥机。

牛磺熊去氧胆酸和胆酸钠对照品购自中国药品生物制品检定所(纯度大于98.5%，批号110816-200305，078-8910)。熊胆粉购自沈阳同仁堂药店；牛胆粉(样品1和2)、猪胆粉和羊胆粉为自制品，由新鲜牛胆、猪胆及羊胆(购自沈阳南塔农贸大市场)分别剪开胆囊膜取出胆汁后，经冷冻干燥制得冻干粉。以上药材经沈阳药科大学中药学院江泽荣教授鉴定为正品。

2 红外光谱测定方法

2.1压片

分别取熊胆粉、牛胆粉、猪胆粉、羊胆粉各约0.5～1.0mg，于玛瑙乳钵中磨细，加干燥的溴化钾细粉(过200目筛)约200mg，继续研磨混匀。将磨好的物料加到压片模具(Φ13mm)中，铺匀，合上模具，置油压机上先抽气约2min后(除去粉末中的湿气和空气)，边抽气边加压至150～180kg·cm-2，压制2～5min，取出压成透明片状的物料，装入样品架待测。

另取熊胆粉与猪胆粉(1∶1)的混合品各约1.0mg，按上述方法压片。

另取牛磺熊去氧胆酸和胆酸钠对照品各约0.5mg，按上述方法压片。

2.2红外光谱测绘

将空白溴化钾片进行背景空白测定后，再把上述制备的7个样品片置于光路中，选择适当光学参数及扫描次数，在4000～400cm-1间绘制各自的红外光谱。

3 结果

中药的红外光谱是其各组分混合物红外光谱的叠加，样品中主要成分的特征吸收峰通常作为药材的鉴别依据。不同动物胆粉样品及牛磺熊去氧胆酸和胆酸钠对照品IR光谱如图1所示。

A：牛磺熊去氧胆酸；B：熊胆；C：胆酸钠；D1和D2：牛胆1和2；E：猪胆；F：羊胆；G：猪胆与熊胆混合品图1 熊胆粉及其混淆品的红外光谱

熊胆粉主要成分为熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸与牛磺酸的结合体。熊胆粉IR图谱(图1B)显示与牛磺熊去氧胆酸对照品(图1A)类似特征：1655cm-1和1545cm-1双峰为酰胺基吸收峰，1216cm-1和1048cm-1双强峰，为磺酸基(-SO3H)吸收峰-SO3H。此外，1216cm-1磺酸基吸收峰透光度与熊胆粉中熊去氧胆酸或鹅去氧胆酸与牛磺酸的结合比例有关，而它与2930cm-1的C-H伸缩振动透光度比值(T1216cm-1/2930cm-1)接近1.0。

牛胆粉主要成分为胆酸、去氧胆酸和鹅去氧胆酸及它们与牛磺酸和甘氨酸的结合体[4]。其IR图谱(图1的D1和D2)显示了与熊胆粉类似特征：1655cm-1和1545cm-1双峰(酰胺基)，1216cm-1和1048cm-1双强峰(磺酸基)。牛胆粉IR图谱1000～900cm-1间显示了与胆酸钠对照品IR图谱(图1C)相似的3个尖锐小峰，为胆酸的-C-O-H面外弯曲振动特征吸收峰，而熊胆粉IR图谱中无此特征。此外，牛胆粉两个样品D1和D2的T1216cm-1/2930cm-1分别为1.0和0.6，据文献[5]报道，不同产地牛胆中胆酸类成分与牛磺酸结合比率不同，因此本研究结果与文献一致。

猪胆粉主要成分为猪去氧胆酸与甘氨酸的结合体[6]。猪胆粉IR图谱(图1E)没有熊胆粉主要IR特征，也没有牛胆粉IR在1000～900cm-1间的3个尖锐小峰。

羊胆粉主要成分为胆酸与甘氨酸的结合体[7]，其IR图谱(图1F)没有熊胆粉上述3个主要特征，但显示了牛胆粉和胆酸钠IR在1000～900cm-1的3个尖锐小峰。

本研究还测定了熊胆粉与猪胆粉(1∶1)混合品IR图谱，结果表明，混合品IR图谱(图1G)与熊胆粉IR图谱明显不同：1655cm-1和1545cm-1酰胺基双峰变为一个宽峰，T1216cm-1/2930cm-1明显降低。

根据测定结果，各动物胆粉样品主要特征吸收峰总结见表1。

表1 各动物胆红外光谱主要特征峰

4 讨论

本研究采用FI-IR法可快速准确地定性鉴别熊胆粉与牛胆粉、猪胆粉和羊胆粉等不同动物胆类药材及其混合品。有文献报道采用TLC法和HPLC法等鉴别熊胆粉与牛胆、猪胆和羊胆等其他动物胆类药材[5,8]，TLC方法虽然简单易行，但需要对照品和分析样品的前处理。HPLC法样品前处理繁琐，分析时间长，也需要对照品，分析成本高。与二者比较，本研究采用FT-IR法优点在于：样品不需前处理，可直接打片测定，分析时间短，牛磺熊去氧胆酸和胆酸钠的IR光谱可查阅Satler红外标准图谱进行比较，故不需要对照品，分析成本低。

[1] 谢培山,梁广华,颜玉贞.熊胆的检验与质量考察[J].药物分析杂志,1981,1(3)：137.

[2] 于淑贤,高颖.天然与人工熊胆粉的药效学实验研究[J].吉林中医药,2005,25(3)：55-56.

[3] 卫生部.熊胆粉质量标准[S].WS3-09(B-09)-96(Z).1996.

[4] 张启明.牛胆粉的化学研究[J].药物生物技术,1997,4(1)：58-60.

[5] 横田洋一,江尻千鶴子.高速クロマトグラブ法による市販動物胆の抱合胆汁酸の分析[J].富山県薬事研究所年報,1991,18：88-96.

[6] 游元元,万德光.动物胆汁药用研究进展[J].贵阳中医学院学报,2007,29(4)：58-61.

[7] 鞠爱华,苟雅书,苏秀兰等.蒙药牛胆粉与羊胆粉中胆酸类成分的分析测定[J].光谱学与光谱分析,2008,28(3)：645-647.

[8] 张贇华,刘建忠,彭霞,等.HPLC法比较熊胆粉及猪胆粉、牛胆粉、羊胆粉和鸡胆粉中胆汁酸类成分[J].药物分析杂志,2009,29(3)：487-490.

[9] 王永金，杨泽民.红外光谱鉴定熊胆的研究[J].沈阳药学院学报，1989，6(3)：157.

FI-IRSpectroscopyinIdentificationofBearBilesandOtherAnimalBiles

Yuan Dan1, Jin Feng1, Yu Shanchuan1, Pan Yingni1, Song Aihua1, Yuan Yuan2

(1.SchoolofTriditionalChineseMatericaMedica，ShenyangPharmaceuticalUniversity,ShenyangLiaoning110015,China;2.SichuanCorpsHospitalofChinesePeople′sArmPoliceForce,Leshan,614000,China)

Objective: To establish a rapid method for the identification of bear bile powder and other animal biles.MethodsThe IR spectrum of bile bear powder, ox-bile powder, pig bile powder and goat bile powder were determined by Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FI-IR) spectroscopy, and their spectral characteristics were elucidated.ResultsThe IR spectral characteristics were shown including double absorption at1655and1545cm-1due to amide group, double strong absorption at1216and1048cm-1due to sulfonic group, and the transmittance ratio of the absorption at1210cm-1to that at1048cm-1was near to one. However, the mentioned above characteristics were not shown in the IR spectrum of other animal biles such as ox-bile powder, pig bile powder and goat bile powder.ConclusionThe FI-IR spectroscopic methods are simple, rapid and reliable, can be used for qualitative identification of bile bear powder and other animal biles.

Animal bile; Fourier Transform Infrared Spectroscopy; Qualitative identification

2009-07-20)