气相色谱法测定锯叶棕片中β-谷甾醇含量

北京市朝阳区药品检验所（100101） 许佳 岳福艺

中国药品生物制品检定所（100050） 孙磊

锯叶棕片系锯叶棕（沙巴棕）Serenoa repens（Bartram） Small成熟的干燥果实提取物制成的天然植物制剂，主治前列腺增生，β-谷甾醇是其有效成分之一。本试验在参考β-谷甾醇相关测定文献[1～3]的基础上，优化建立了GC含量测定方法，为该制剂的质控提供了参考。

1 仪器与试药

Agilent7890A气相色谱仪（FID检测器），β-谷甾醇对照品（中国药品生物制品检定所），甲醇、二氯甲烷、氢氧化钾（分析纯，北京化工厂），实验用水为Milli-Q系统制备。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 DB-5毛细管柱（30m×0.25mm×0.25µm）；程序升温，初始温度120℃保持2分钟，以30℃·min-1速率升至300℃，保持12分钟；分流比10：1；进样口温度280℃；检测器温度300℃。β-谷甾醇的理论板数为70000，与相邻成分分离度大于1.5。对照品、供试品及溶剂色谱图见附图。

附表 加样回收率结果

2.2 对照品溶液 精密称取β -谷甾醇对照品19.68mg，置10mL量瓶中，加二氯甲烷至刻度，摇匀。

2.3 供试品溶液 取供试品细粉2g置100ml圆底烧瓶中，精密称定，加入13%的甲醇制氢氧化钾溶液20ml（13g 氢氧化钾溶于20ml水中，加甲醇稀释至100ml），回流2小时。放冷，将提取液转移至150ml分液漏斗中，用水30ml洗涤圆底烧瓶，合并洗涤液。提取液用乙醚萃取3次，每次30ml，合并乙醚液。用水洗涤乙醚液3次，每次30ml。乙醚液蒸干，残渣加二氯甲烷溶解并转移至5ml量瓶中。

2.4 线性及范围 精密量取对照品溶液0.2ml、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml分别置10ml量瓶中，加二氯甲烷至刻度，摇匀。精密量取上述溶液各1µl注入气相色谱仪，以进样量（µg）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：y=471.2x-2.5，相关系数r=0.9996，线性范围0.03936µg～0.3936µg。

2.5 精密度 照2.3项下方法制备供试品溶液1份，连续进样6次，β-谷甾醇峰面积RSD为1.62%。

附图 气相色谱图

2.6 稳定性 照2.3项下方法制备供试品溶液1份，在10h内分别进样，β-谷甾醇峰面积RSD为2.83%。

2.7 重复性 照2.3项下方法制备供试品溶液6份，测定，β-谷甾醇含量RSD为2.61%。

2.8 回收率 取供试品细粉1 g，精密称定，置100ml圆底烧瓶中，加入浓度为0.491mg·ml-1的β-谷甾醇对照品溶液1ml，挥干，后续照2.3项下方法操作，结果见附表。

2.9 供试品测定 按上法测定5批供试品，β-谷甾醇含量分别为0.035%、0.034%、0.039%、0.039%和0.038%。

3 讨论

3.1 β-谷甾醇的常用含测方法有薄层扫描法、高效液相色谱法和气相色谱法。其中，薄层扫描法准确度和重现性稍差；高效液相色谱法往往需要使用蒸发光散射检测器才有更好的灵敏度；本试验采用了较简便准确的气相色谱法。

此外，气相色谱法测定β-谷甾醇多进行衍生化，本试验结果表明，不衍生也有较好的灵敏度且方法简单、重现性良好。

3.2 由于β-谷甾醇在二氯甲烷溶解度好，故作为提取溶剂。前处理方法曾试验简单的超声提取方法，但由于本品β-谷甾醇含量低且辅料干扰严重，导致无法准确定量。因此，最终采用了碱液皂化再经乙醚萃取、浓缩的前处理方法。