五加参归芪精质量标准研究

李春实，韩映晨，姜茁松

（1.吉林省食品药品检验所，吉林 长春 130033；2.吉林省延边州食品药品检验所，吉林 延吉 133000）

五加参归芪精质量标准研究

李春实1*，韩映晨2，姜茁松1

（1.吉林省食品药品检验所，吉林 长春 130033；2.吉林省延边州食品药品检验所，吉林 延吉 133000）

目的：建立五加参归芪精质量标准。方法：采用薄层色谱法对制剂中的刺五加、黄芪进行鉴别，采用高效液相色谱法对制剂中刺五加进行定量测定。结果：薄层色谱清晰，分离效果好，阴性无干扰；紫丁香苷在0.020 12～0.201 2μg与峰面积呈良好的线性关系，Y＝2 991 491.4X－10 253.3，（r＝1.000 0），平均回收率为99.7%，RSD＝1.4%。结论：本方法可靠、有效、专属性强，可用于该制剂的质量控制。

五加参归芪精；TLC；刺五加；黄芪；质量标准

五加参归芪精是由刺五加、黄芪、当归3味中药组成，具有扶正固本，补气固表，补血养血等功效。用于久病衰弱，失眠自汗，腰膝酸软，气短心悸［1］。本品收载于 《卫生部药品标准·中药成方制剂》第二册，原标准中没有鉴别方法与含量测定方法。为有效控制其质量，对该产品的质量标准进行了研究，用薄层色谱法对制剂中的刺五加、黄芪进行定性鉴别，对刺五加中紫丁香苷的含量采用高效液相色谱法进行测定。

1 仪器与试药

日本岛津LC-2010C高效液相色谱仪；紫丁香苷对照品（批号111574-200201）、异秦皮啶对照品（批号0837-200203）、黄芪对照药材均购自中国药品生物制品检验所。乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

五加参归芪精（修正药业集团通化市制药有限公司，批号20060301，20060302，20060303；抚松县中药责任有限公司，批号20060902）。

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别

2.1.1 刺五加的鉴别 取本品25mL，置分液漏斗中，用三氯甲烷提取2次，每次20mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取异秦皮啶对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（9∶4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰，见图1。

2.1.2 黄芪的鉴别 取本品10mL，加水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次10mL，合并正丁醇液，加正丁醇饱和的氨试液洗涤2次，每次10mL，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪对照药材2g，加甲醇20mL，加热回流1h，滤过，滤液蒸干，残渣加水10mL溶解，同法制成对照药材溶液。再取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取供试品溶液5μL、对照药材溶液与对照品溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶7∶2）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，见图2。

2.2 紫丁香苷的含量测定

2.2.1 色谱条件 采用 Agilent-HC C18（4.6mm×250mm，5μm）；乙腈-水（5∶95）；流速：0.8mL·min－1；柱温：30℃；检测波长：265nm；理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于4 000。

2.2.2 对照品溶液的制备 取紫丁香苷对照品适量，精密称定，加水制成每1mL含20μg的溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备 取本品10mL，加三氯甲烷20mL萃取，弃去三氯甲烷液，取水层滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 阴性对照溶液的制备 按处方比例取相当于5mL中所含群药适量（无刺五加），按工艺制备阴性对照样品，再按2.2.3项下制备方法制备阴性对照溶液。量取5μL注入液相色谱仪，结果阴性对照无干扰，见图1。

图1 五加参归芪精中刺五加TLC图

图2 五加参归芪精中黄芪TLC图

2.2.5 系统适应性试验 分别精密量取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各5μL，注入液相色谱仪，记录峰面积，按外标法以峰面积计算，即得。HPLC图见图3～5。

图3 紫丁香苷对照品HPLC图

图4 五加参归芪精供试品HPLC图

图5 缺刺五加的阴性对照HPLC图

2.2.6 标准曲线的绘制 取紫丁香苷对照品适量，精密称定，加水制成每1mL含20.12μg的溶液，分别精密吸取1，3，5，7，10μL测定，以对照品进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y＝2 991 491.4X－10 253.3（r＝1.000 0），紫丁香苷在0.020 12～0.201 2μg与峰面积呈良好的线性关系。

2.2.7 精密度试验 取紫丁香苷对照品溶液，照上述色谱条件，连续进样6次，每次5μL，记录峰面积，计算RSD＝1.8%。

2.2.8 稳定性试验 取供试品溶液，按上述色谱条件测定，分别于0，4，10，15，24h进样5次，每次5μL，记录峰面积，计算RSD＝2.1%，说明紫丁香苷的含量比较稳定。

2.2.9 重复性试验 取本品（批号20060301），照上述供试品溶液制备方法，分别配制6份供试品溶液进行测定，计算含量，其平均含量为0.018mg·mL－1，RSD＝2.0%。

2.2.10 加样回收试验 精密量取本品（批号20060301）5mL与对照品溶液（0.020 12mg·mL－1）5mL，依法测定，结果见表1。

表1 紫丁香苷加样回收率试验

2.2.11 样品含量测定 按上述方法测定4批样品中的紫丁香苷含量，每批平行测定2份，结果见表2。

表2 样品中紫丁香苷含量测定mg／粒

3 讨论

本试验增加了刺五加、黄芪的薄层鉴别。所建立的方法斑点清晰，耐用性好，重现性好。曾考察过当归（水煎）的薄层鉴别方法，但没有找到合适的方法。在含量测定项下，预试验中曾采用 《中国药典》2005年版一部刺五加药材项下流动相［2］，但分离效果不好。采用本试验的色谱条件分离效果好，而且灵敏度高，调节信噪比约为3，测得的最低检出限为1.006ng；调节信噪比约为10，测得的定量限为3.018ng，而且对不同品牌的色谱柱耐用性良好。本实验采取的方法可靠、有效、专属性强，可用于该制剂的质量控制。

［1］卫生部.卫生部药品标准·中药成方制剂（第二册）［S］.1990：34.

［2］国家药典委员会.中国药典（一部）［S］.北京：化学工业出版社，2005：143.

Quality Standard for Wujiashenguiqi Oral Liquid

Li Chunshi1，Han Yingchen2，Jiang Zhuosong1
（1.Jilin Provicial Institute for Food and Drug Control，Changchun Jilin130033，China；2.Jilin Provicial Yanbian Institute for Food and Drug Control，Yanji Jilin133000，China）

Objective：To set up the quality standard for Wujiashenguiqi oral liquid.Methods：Acanthopanax and membranous milkvetch in preparation were identified by TLC.The content of acanthopanax in the Wujiashenguiqi Oral liquid was determined by HPLC.Results：The spot on the thin layer plate was clear and the negative control was no disturbed.The linear range of syringoside was 0.020 12～0.201 2μg.The average recovery was 99.7%with RSD of 1.4%.Conclusion：The method is reliable，accurate and specific，It can be used for quality control of Wujiashenguiqi Oral liquid.

Wujiashenguiqi Oral liquid；TLC；Acanthopanax；Membranous milkvetch；Quality standard

*李春实，E-mail：piaozhe0007＠yahoo.com.cn

2010-02-05）