HPLC法测定养心氏片中葛根素的含量

杨雪萍，袁红英，孙 昕，张志国

养心氏片为卫生部颁标准第十六册101页收载的品种，是黄芩、党参、葛根、丹参等十余种中药的复方制剂，具有扶正固本，益气活血，行脉镇痛等功效，用于气虚血瘀型冠心病、心绞痛，心肌梗死及合并高血脂、高血糖等症见有上述证候者，临床疗效确切。原标准中未对含量测定指标及方法进行规定，为提高药品质量，保证临床疗效，对该制剂中葛根素的含量测定进行研究。

1 仪器、试剂与样品

岛津LC-2010高效液相色谱仪，超声清洗器 （TCQ-250），葛根素对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用0752-200209），甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，养心氏片（青岛国风集团）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及检测方法 C18色谱柱（4.6×150 mm，5 μm），流动相甲醇-水（24∶76），流速为 1.0 ml/min，检测波长 250 nm。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 称取葛根素对照品适量，精密称定，加50%甲醇使溶解，制成0.1 mg/ml的溶液，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品内容物研细，取1 g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，称定重量，超声（100 W，50 kHz）处理 30 min，放冷，再称定重量，以50%甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液以微孔滤膜（0.45 μm）滤过，作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例制备不含葛根的阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制备，即得。

分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各20 μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图。阴性对照品溶液在葛根素峰位处无干扰，见图1。

图1 养心氏片HPLC图

2.3 线性关系考察 精密称定80℃干燥至恒重的葛根素对照品适量，加甲醇溶解制成0.452 mg/ml的葛根素对照品溶液。分别精密移取 2、4、6、8、10 ml于 25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，各精密吸取20 μl注入液相色谱仪中，测定，测得峰面积、回归方程，对峰面积积分值与进样量进行直线回归处理，得回归方程：Y=5 036 718.48X＋74 325.40，回归系数r=0.999 9。结果表明，进样量在0.723 2～3.616 μg与峰面积积分值之间的线性关系良好。

2.4 精密度试验 精密吸取葛根素对照品溶液 （0.069 mg/ml）20 μl，连续进样5次，测得5次峰面积积分值的RSD=0.173%，表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验 取供试品溶液，分别于配制后0、4、8、12、24 h进行测定，所得葛根素峰面积的RSD=0.419%，结果表明，供试样品在24 h内稳定。

2.6 重现性试验 取同一批样品5份，精密称定，分别按照上述溶液制备方法及色谱条件进行制备，并进行测定，计算葛根素含量的RSD=0.975%，结果表明，该方法重复性良好。

2.7 加样回收试验 取已知葛根素含量的样品5份约0.5 g（含葛根素为3.91 mg/g），精密称定，分别精密加入葛根素对照品溶液（0.075 mg/ml）各 25 ml，再精密加 50%甲醇 25 ml，按上述供试品溶液的制备方法及色谱条件进行制备并测定，计算回收率，结果见表1。

表1 加样回收情况

2.8 样品含量测定 本别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μl，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以外标法计算含量，结果3批样品中葛根素的含量分别为 2.35、2.51、1.93 mg/片。

3 讨 论

本品为黄芪、党参、丹参、葛根等药材的复方制剂，原标准无含量测定方法。分析处方，黄芪为方中要药，黄芪甲苷为其主要活性成分，因此试验中欲选择黄芪甲苷作为含量测定指标。参考有关文献[1，2]对样品中的黄芪甲苷的含量分别采用薄层扫描法及HPLC－ELSD法进行测定，结果显示薄层扫描法测定比较繁琐，样品需要经过反复处理，试验误差较大；HPLC－ELSD法测定色谱峰基线较高，干扰严重，分离不好，经调整流动相比例仍不能达到基线分离。故放弃选择黄芪甲苷作为含量测定指标。

葛根为方中要药，其主要活性成分为以葛根素为代表的黄酮类成分，药理研究及临床应用表明，葛根在治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、高血压等方面疗效确切[3]，且葛根素的高效液相测定方法已较成熟，样品制备方法简便，故选择葛根素作为含量测定的指标性成分。

[1]张春辉，吴爱英，杨晓云.薄层扫描法测定养心氏片中黄芪甲苷的含量[J]. 中国医院药学杂志，2002，22(2)：91.

[2]孙忠敏.HPLC－ELSD法测定养心氏片中黄芪甲苷的含量[J].海峡药学，2005，17（4）：75.

[3]阴 健，郭力弓.中药现代研究与临床应用[M].北京:学苑出版社，1993.