肾细胞癌患者T淋巴细胞亚群动态分析

叶兴龙,宋玉国

(北华大学附属医院泌尿外科,吉林吉林132011)

肾细胞癌具有症状隐匿、难以早期发现、易转移等特点,对人类健康构成极大威胁。抗肿瘤免疫以细胞免疫为主,所以T淋巴细胞的作用尤为重要。T淋巴细胞亚群的相对比例与病人的免疫功能状态及病情进展密切相关[1]。T细胞膜表面分子是T细胞识别抗原和与其他免疫细胞相互作用的物质基础,主要是白细胞分化抗原(CD)等各种膜表面分子。有文献报道[2],恶性肿瘤病人T淋巴细胞存在一定的变化特征,其中CD4+/CD8+的比值是反应机体免疫功能紊乱的敏感指标。本文对确诊的肾癌病例在治疗前,治疗过程中进行T淋巴细胞亚群动态分析,以期阐明在不同临床阶段T淋巴细胞亚群的变化特征。

1 材料与方法

1.1 对象 2007年11月至2008年11月在北华大学附属医院泌尿外科住院,并经病理检查确诊的肾细胞癌病例21例,男17例,女4例,年龄37-71岁,平均58岁。所有病例均为我院初诊病例,治疗前均未应用化疗、放疗和其他对免疫功能有影响的药物。正常对照组20例,为我院体检中心正常体检者,年龄21-55岁,均 37岁。

1.2 主要仪器设备 美国Beckman Coulter公司EPLCS-XL型流式细胞仪。

1.3 主要试剂 三色荧光标记的T淋巴细胞亚群荧光抗体,CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PEcy5。同型阴性对照IgG1FITC/IgG1-PE/IgG1-PEcy5,以及甲酸溶血剂均购于 Beckman Coulter公司。Beckman Coulter公司甲酸溶血剂。

1.4 实验方法

①对研究病例及对照组用EDTAK2抗凝真空管采血2 ml。

②针对每一个标本,取2支流式细胞仪专用试管,分别标记为测定管和对照管。测定管中加入T淋巴细胞亚群检测荧光抗体20 μ l,加入全血100 μ l;在对照管中加入同型阴性对照20 μ l,加入同一人份全血100 μ l,混匀;两试管同时放于室温避光标记30 min。

③溶血:在每管中加入溶血剂甲,振荡7秒后立即加入溶血剂乙,振荡混均。

④洗涤细胞:在溶血后,加入4 ml PBS,混匀,1 000 rpm离心5 min,弃上清,加入 1 ml PBS,混匀,待上机检测。

⑤流式细胞仪检测:用同型阴性对照调节流式细胞仪电压,使该细胞群充满整个3区但不能超过界线到1、2、4区,如图1所示。调节电压后,将测定管放于流式细胞仪样品架上进行检测。

2 结果

2.1 用同型阴性对照管调节流式细胞仪电压,结果见图1,细胞充满整个3区,1、2、4区没有细胞或极少量细胞。测定管检测结果见图2和图3。在图2或图3中,1区细胞数与2区细胞数之和为CD3总数;在图2中2区为CD4+T细胞百分数,在图3中,2区为CD8+T细胞百分数。

图1 3区为同型阴性对照

图2 2区为CD4+T细胞

图3 2区为CD8+T细胞

2.2 肾细胞癌患者手术治疗前与正常对照组T淋巴细胞亚群检测结果比较,检测结果见表1。

表1 肾细胞癌组术前与正常对照组T淋巴细胞亚群检测结果(±s,%)

表1 肾细胞癌组术前与正常对照组T淋巴细胞亚群检测结果(±s,%)

组别 n CD3 CD4 CD8 CD4/CD8肾细胞癌 21 59.84±4.56 27.67±3.16 28.78±3.56 0.97±0.18正常 20 67.66±4.02 38.47±4.12 23.7±3.12 1.43±0.13 P＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01

表2 21例肾细胞癌手术前后T淋巴细胞亚群检测结果比较(±s,%)

表2 21例肾细胞癌手术前后T淋巴细胞亚群检测结果比较(±s,%)

组别 n CD3 CD4 CD8 CD4/CD8手术前 21 59.84±4.56 27.67±3.16 28.78±3.56 0.97±0.18手术后 21 65.43±3.72 36.47±4.01 27.34±3.12 1.23±0.22 P＜0.01 ＜0.01 ＞0.05 ＜0.01

3 讨论

在肾恶性肿瘤中,肾细胞癌即肾癌约占85%左右[3],是最常见的肾实质恶性肿瘤。肿瘤的发生发展及其预后与机体的免疫监视及免疫清除功能障碍密切相关。肾细胞癌的治疗以外科手术治疗为主,术后配合免疫治疗取得了令人满意的结果。在抗肿瘤免疫中,细胞免疫尤其是T淋巴细胞的作用更为重要。T淋巴细胞参与机体的抗肿瘤免疫应答,T淋巴细胞亚群的数量是反映机体免疫功能的重要指标。

一些研究结果证实[4,5],T淋巴细胞中各亚群的相对比例与更能反映患者的免疫,可以估测病情的进展情况。有关文献还报道[6]在膀胱癌等泌尿系肿瘤癌组织周围有淋巴细胞侵润的患者预后相对较好。这种细胞主要是CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞。本文应用流式细胞术对我院收治的21例肾细胞癌患者的外周血T淋巴细胞亚群进行了动态监测与分析,在手术治疗前与20例正常对照组对比分析了T淋巴细胞亚群百分率的变化特征,结果可见肾细胞癌患者CD3+T淋巴细胞和CD4+T淋巴细胞显著于正常对照组(P＜0.01),切CD4/CD8比值也低于对照组,而CD8+T淋巴细胞相对高于正常对照组,尚于正常参考值的上线。此结果与文献[2]报道一致。该结果说明肾细胞癌患者体内存在细胞功能紊乱,不能有效地清除癌细胞肿瘤的发生。21例肾细胞癌患者手术后也进行T淋巴细胞亚群检测,并与术前进行了对照分析,结果CD3+T淋巴细胞和CD4+T淋巴细胞较术前明显升高,CD4/CD8比值也升高,而CD8改变不明显。此结果与Schwaab[7]报道的结果相近。手术虽然不能清除体内的所有癌细胞,却能有效地去除瘤负荷,使机体的免疫功能得以恢复,表现为T淋巴细胞亚群中CD3+T淋巴细胞和CD4+T淋巴细胞升高,CD4/CD8比值倒置现象得以逆转。随着对这些病例进行动态监测T淋巴细胞亚群,可能会得出T淋巴细胞亚群的变化特征与患者预后的相互关系。

[1]Kahan A,Picar F,Amalities of T lymphocyte subsets in systemic sclerosis demonstrated with anti-CD45 RA and anti-CD29 monoclonal antibodies[J].Ann rheum Dis,1991,50(6):354.

[2]Vanden Hove LE,VanGool SW,VanPopel H phenotype cytokine production and cytolytic capacity of fresh(uncultured)tumour-infiltrating T lymphocytes in human renal cell carcinoma[J].Clin Exp Immunology,1997,109(3):501.

[3]吴阶平,顾方六,郭应禄,等.吴阶平泌尿外科学[M].2004.

[4]De wolf F,Spijikerman I,Schellekens PT,et,al.AIDS prognosis based on HIV-1 RAN,CD4+T cell count and function:markers with reciprocal predictive value over time after seroconversion aids[J].Cytometry,1997,11(15):1799.

[5]Molica S,Levato D,Dattlo A,et al.Clinico-prognostic relevance of quantitative immunophenotyping in B cell chronic lymphocytic leukemia with emphasison the expression of CD20 antigen and surface immunoglobulins[J].EUR J Haematol,1998,60(1):47.

[6]Soygur T,Beduk Y,Yaman O,Yilmaz E,et al:Analysis of the peripheral blood lympacyte subsets in patients with bladder carcinoma[J].Urology,1999,53(1):88.

[7]Schwaab Thomas,Heaney John A,Schned Alan R,et al.A randomizer phaseⅡtrial comparing two different sequence combinations of autologous va-ccine and human recombinant interferon(gamma)and human recombinant in-terferon(alpha)2b therapy in patients with metastatic renal cell carcinoma:clinical outcome and analysis of immunological parameters[J].J Urol,2000,163(4):1322.