柠鸡儿叶中总黄酮的提取工艺优选

焦怀慧

（山西省晋中市药品检验所，山西 晋中 030600）

柠鸡儿为豆科锦鸡儿属植物柠鸡儿（Caragana microphylla Lam.）的根，收载于《认药白晶鉴》，别名糜卜、小叶金雀花等，为高1 m～2 m的落叶灌木，分布于山西、陕西、内蒙古、新疆、甘肃、宁夏等地，是我国北方自然条件恶劣地区绿化和水土保持的重要植被［1］。本品味甘、微辛、性微温，有祛风止痛、祛痰止咳之功［2-3］。目前已从根中分离出5种生物碱、4种黄酮以及皂苷、内酯和酚类等成分。本品不仅用于抗炎、镇痛、降压，还发现具有抗肿瘤的作用。因此本文通过正交试验对柠鸡儿黄酮类化合物的提取工艺进行了研究，现报道如下。

1 实验材料

柠鸡儿叶采集于山西省农科院试验地，为人工栽培。索氏提取回流装置；BS110S电子天平（德国赛多利斯）；紫外可见分光光度计（上海精密仪器厂）；大孔吸附树脂；芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100802200306）；试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 标准曲线的制备

精密称取120℃干燥恒重的芦丁标准样品0.025 0 g，用70%的乙醇溶解后移至100 mL容量瓶中定容。精密吸取芦丁标准溶液0 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL、6.0 mL， 分别置于 25 mL容量瓶中，各加水至6 mL。加5%的亚硝酸钠溶液1.0 mL，放置6 min，加10%的硝酸铝溶液1.0 mL，放置6 min，加4%的氢氧化钠溶液10 mL，用70%的乙醇溶液稀释至刻度，放置15 min。照分光光度法，在420 nm～600 nm波长范围内测定吸收度。结果在波长510 nm处均具有明显吸收，故选择510 nm波长为测定波长。以吸收度（Y）对溶液浓度（X）进行回归分析，得回归方程：Y=9.625X+0.047 5，r=0.999 9。

2.2 提取工艺的正交设计

根据提取工艺选定乙醇浓度（A）、提取时间（B）、液料比（C）和浸提温度（D）作为考察因素，各取3个水平，以提取液中总黄酮的量作为考察指标，选用L9（34）正交表进行试验，结果见表1。取100 g柠鸡儿，加水浸泡后，加热提取规定的时间和次数，400目铁丝筛过滤，得提取液。精密量取3 mL提取液，稀释10倍，再精密量取3 mL稀释液，置25 mL量瓶中，照“2.1标准曲线的制备”项下的方法，自“加水至6 mL”起依法测定吸收度，从回归方程中计算提取液中总黄酮的量（mg），作直观分析与方差分析，结果见表2、表3。

表1 柠鸡儿叶总黄酮提取因素水平表

2.3 总黄酮提取工艺优选结果

总黄酮提取工艺中液料比为主要影响因素，乙醇浓度、提取时间次之，浸提温度影响最小，各因素对柠鸡儿叶总黄酮提取效果影响的大小顺序是C>A>B>D，最佳的提取方案是A2B2C3D2。

表2 柠鸡儿叶总黄酮提取正交试验设计及结果分析

表3 柠鸡儿叶总黄酮提取正交试验方差分析

3 结 论

我们采用亚硝酸钠-硝酸铝比色法测定总黄酮的量，即用芦丁为对照品来测定总黄酮的量，并采用总黄酮的量作为指标来考察总黄酮的提取工艺。在验证试验中，按照最佳提取工艺，提取1 000 g柠鸡儿叶，最后得总黄酮为87.626 g，比正交试验设计中9个试验结果都大，表明此工艺是合理、可行的。柠鸡儿叶总黄酮提取工艺的优选对柠鸡儿资源的开发利用、黄酮类化学成分的提取分离提供了基础性的研究。

［1］张礼萍，鞠美华，胡昌奇.金雀根中的异黄酮类成分［J］.中草药，1996，27（3）：134.

［2］刘霞，赵淑春，程宏，等.山楂黄酮类成分的分析测定［J］.吉林农业大学学报，1997，19（3）：47-49.

［3］王明龙，李修禄，柴逸峰.黄酮类化合物高效液相色谱法分析的进展［J］.西北药学杂志，1998，8（9）：138-142.