不同粉碎粒度对甘草中有效成分含量的影响

李德成，刘庆燕，陈 田，周保腾，赵军军

（山西生物应用职业技术学院，山西 太原 030031）

甘草含有甘草酸、甘草次酸及甘草苷等有效成分，具有补中益气、祛痰止咳、清热解毒的作用。据作者统计，《中国药典》2005年版收载含有甘草的成方制剂有182个，其中丸剂49.5%，散剂6.6%。王玉蓉等［1］提出，药物经超微粉碎后可使细胞破壁，粉体比表面积增大，具有良好的溶解性、化学活性和生物活性，有助于提高中药有效物质的溶出和吸收，提高生物利用度。作者用HPLC法对不同粉碎粒度下甘草中甘草酸、甘草次酸、甘草苷的含量进行了测定，拟了解不同粉碎粒度对甘草中有效成分含量的影响，以便指导该剂型生产过程中对甘草的合理应用。

1 实验材料

LC-2010AHT高效液相色谱仪（日本岛津公司）；LC-solution色谱工作站（日本岛津公司）；贝利粉体机（济南倍力粉体技术工程有限公司）；电子分析天平BP211D（80508605）；KQ-500B 型超声波清洗机（昆山超声仪器有限公司）；PHS-3C型实验室pH计 （上海今迈仪器仪表有限公司）。甘草苷、甘草酸铵、甘草次酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号分别为111610-200604、110731-200614、110723-200612）。所用试剂除甲醇、乙腈为色谱纯，其他为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

2.1.1 甘草酸色谱条件［2］色谱柱（Diamonsil C18）；用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.2 mol/L 醋酸铵溶液-冰醋酸（67∶32∶1）为流动相，紫外检测波长为250 nm，柱温：室温。理论板数按甘草苷峰计算应不低于3 000。

2.1.2 甘草苷色谱条件［2］色谱柱（Diamonsil C18）；以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.5%冰醋酸（1∶4）为流动相，紫外检测波长为 276 nm，柱温：室温。理论板数按甘草苷峰计算应不低于4 000。

2.1.3 甘草次酸色谱条件［3］色谱柱（Diamonsil C18）；用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水（调磷酸pH为3.7）=80∶20为流动相，紫外检测波长为250 nm，柱温：室温。理论板数按甘草苷峰计算应不低于3 000。

2.2 对照品溶液的制备

对照品储备溶液的制备：分别精密称取对照品甘草苷 5 mg［2］、甘草次酸 7 mg［3］、甘草酸铵盐 10 mg［2］。甘草苷、甘草次酸用甲醇溶解并分别定容为100 mL、25 mL，甘草酸铵盐用流动相溶解并定容为100 mL。

2.3 样品溶液的制备

取山西浑源黄芪开发有限公司栽培的甘草饮片与野生甘草饮片，用贝利粉体机对其分别粉碎，过筛，得100目粉、200目粉、300目粉，备用。

2.3.1 甘草酸供试品溶液的制备［2］取样品粉末约0.3 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加流动相约45 mL，超声处理（功率 250 W，频率 20 kHz）30 min，取出，放冷，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3.2 甘草苷供试品溶液的制备［2］取样品粉末约0.2 g，置25 mL具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇溶液10 mL，称定重量，超声处理（功率300 W，频率25 kHz）30 min，取出，再称重，用70%乙醇补足减失的重量，滤过。精密量取续滤液5 mL，置100 mL量瓶中，用20%乙腈稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3.3 甘草次酸供试品溶液的制备［4］取样品粉末约2 g，精密称定，置100 mL量瓶中，加 80%甲醇（1%氨水）溶液定容到100 mL，超声处理（功率250 W，频率 20 kHz）15 min，取出，放冷，过滤后供进样用。

2.4 线性关系的考察

精密吸取甘草苷对照品液0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL 于 10 mL 容量瓶中，甲醇定容，摇匀；再精密吸取甘草酸铵盐对照品液0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL 于 10 mL容量瓶中，流动相定容，摇匀；精密吸取甘草次酸对照品液 0.4 mL、0.8 mL、1.2 mL、1.6 mL、2.0 mL、2.4 mL于5 mL量瓶中，甲醇定容，摇匀。按上述色谱条件进样20 μL，进行线性分析，以峰面积对进样浓度进行线性回归，得回归方程、相关系数及线性范围分别为：Y=24 954X+7 653，r=0.999 4， 线性范围 2.5 μg/mL～25 μg/mL （甘草苷）；Y=23 649X+24 576，r=0.999 6，线性范围 5 μg/mL～30 μg/mL（甘草酸）；Y=1 843 481X-5 771，r=0.999 9， 线性范围 112.0 μg/mL～268.8 μg/mL（甘草次酸）。

2.5 精密度试验

精密吸取同一供试品溶液，重复进样5次，按上述色谱条件测定，记录峰面积。求得甘草苷、甘草酸和甘草次酸的RSD分别为0.97%、0.89%和1.08%。

2.6 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液，分别放置0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h 进样， 按上述色谱条件测定峰面积，求得甘草苷、甘草酸和甘草次酸的RSD分别为1.14%、1.05%和1.21%，表明样品溶液在12 h内稳定。

2.7 重复性试验

制备同一批号供试品溶液5份，按上述色谱条件分别测定甘草苷、甘草酸和甘草次酸含量，求得甘草苷、甘草酸和甘草次酸的RSD分别为1.28%、1.07%和1.17%。

2.8 回收率试验

精密吸取同一供试品溶液各5份，分别精密加入同一浓度同一体积的甘草苷、甘草酸铵盐和甘草次酸对照品溶液，混匀，进样，按上述方法测定甘草苷、甘草酸和甘草次酸的含量。求得甘草苷、甘草酸和甘草次酸平均回收率分别为99.4%、100.8%和98.7%；RSD值分别为1.17%、1.22%和1.05% 。表明本实验所确定的HPLC法进行甘草苷、甘草酸、甘草次酸的含量分析，准确度较高。

2.9 样品的含量测定

分别取栽培的甘草饮片与野生甘草饮片粉末，按“2.3”法制备供试品溶液，按“2.1”色谱条件分别测定甘草苷、甘草酸、甘草次酸的峰面积，并计算其含量。结果见表1。

表1 不同甘草样品中甘草苷、甘草酸、甘草次酸的含量

3 结 论

结果表明，野生甘草的药物成分溶出度是栽培品的1倍左右，证明野生甘草的成分含量明显高于栽培品。建议制药企业在生产过程中可以根据甘草的来源酌情处理其在成品处方中的用量，以稳定其含量，提高药物疗效。

对甘草粉碎粒度的研究表明，粉碎有利于提高甘草中有效成分的溶出，但粉碎粒度对甘草中甘草苷等成分的溶出影响不大。本次实验结果较蔡翠芳等［5］报道的栽培甘草与野生甘草饮片（中粉）中的甘草苷、甘草酸含量明显提高，而与李志猛等［6］报道的超微粉碎后甘草酸的溶出显著提高不一致。近年来，有关中药超微粉碎研究报道较多，基本上形成两种观点，一种是超微粉碎能提高有效成分的溶出［7-10］，另一种是中药粉碎粒径对有效成分的提取率没有明显影响［11-12］，这可能是超微粉碎后粒径减小，其表面能增加的原因。因此，根据本实验结果，建议在含甘草的丸剂和散剂中，甘草粉碎粒度以100目为宜，既可以达到该剂型要求，又可以降低生产成本。

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