高效液相色谱-蒸发光散射检测器测定复方黄芪益气口服液中黄芪甲苷的含量
2010-09-20周铁梅刘永江张红兵翟晓茹李永东
张 燕，周铁梅，刘永江，张红兵，翟晓茹，李永东
（中国辐射防护研究院 太原华卫药业有限公司，山西 太原 030006）
复方黄芪益气口服液由黄芪、大枣、党参、甘草等中药制成，具有补脾益气的功能。黄芪是君药，其主要成分为黄芪甲苷，控制黄芪的质量，即可控制本品的质量。有关黄芪甲苷的分析方法有薄层-紫外分光光度法、薄层扫描法等，但大部分是测定生药及其制剂中的黄芪甲苷，用于测定中药口服液报道较少。复方黄芪益气口服液为液体制剂，药物吸收快，作用迅速，且易于分剂量，服用方便，用于气血两虚引起的体倦乏力，神疲，面白，心悸气短，失眠健忘等症。为了更好地控制成品的质量，我们在原标准的基础上，对复方黄芪益气口服液中黄芪甲苷的质量标准进行了详细的研究，增加了高效液相色谱-蒸发光散射检测器测定黄芪甲苷的含量，并进行了方法学考查，现报道如下。
1 实验材料
1.1 实验仪器
Agilent 1100型高效液相色谱仪，PL-ELS2100型蒸发光散射检测仪（英国）。
1.2 药品与试剂
黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号：110781-200512；规格：20 mg），复方黄芪益气口服液样品（太原华卫药业有限公司生产，批号09112401；规格10 mL/支），实验中所用试剂水为注射用水，乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
Agilent 1100 可编程紫外检测器（VWD）；HypersilODS C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱；10 μL 样品定量环。 流动相为乙腈－水（32∶68），流速为1.0 mL/min，柱温30℃；蒸发光散射检测器检测参数：雾化温度70℃，气化温度50℃，流速1.2 mL/min。理论板数按黄芪甲苷峰计应不低于3 000。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液 取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含1 mg的对照品溶液，摇匀，即得。
2.2.2 供试品溶液 精密量取本品10 mL，用水饱和的正丁醇振摇提取 5 次（15 mL、15 mL、15 mL、10 mL、10 mL），合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，15 mL/次；弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加水5 mL使溶解，放冷；通过D101型大孔树脂柱（内径1.5 cm，长 12 cm），以水 50 mL洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30 mL洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇100 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至2 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2.2.3 阴性（缺黄芪）对照溶液 取缺黄芪的阴性样品约10 mL，精密称定，按供试品溶液制备项下的方法操作，得阴性对照液。
2.3 专属性考察实验
按上述仪器和实验条件，将供试品溶液、阴性对照溶液、黄芪甲苷对照品溶液分别注入液相色谱仪测定。结果供试品色谱图中有与对照品相同的保留时间，且基线平稳、分离度好，而阴性对照在此保留时间无色谱峰。
2.4 标准曲线的制备
精密吸取对照品溶液 （浓度为1.001 mg/mL）2 μL，4 μL，6 μL，8 μL，10 μL，分别注入液相色谱仪，依照上述色谱条件测定峰面积，以峰面积的自然对数值为纵坐标，黄芪甲苷进样量的自然对数值为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y＝2.484 0X＋9.147 3，r＝0.999 4。 结果表明， 黄芪甲苷在 2.002 μg～10.01 μg范围内线性关系良好。结果见表1。
2.5 重复性试验
取09112401批号样品，精密量取本品10 mL，照供试品溶液制备项下的方法制备供试品溶液，用同一份供试品溶液，精密吸取供试品溶液10 μL，按含量测定方法，连续进样6次，以黄芪甲苷的峰面积计算，结果RSD＝0.16%。表明本方法重复性较好。结果见表2。
表1 线性关系考察
表2 重复性试验
2.6 稳定性实验
精密量取本品10 mL（批号：09112401），照供试品溶液制备项下的方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液 10 μL， 分别于 0 h，2 h，4 h，6 h，8 h 注入液相色谱仪中，分别测定黄芪甲苷的峰面积，结果RSD＝0.96%，表明供试品溶液在8 h内稳定。结果见表3。
表3 稳定性试验
2.7 加样回收率实验
取已知含量的样品（0.059 8 mg/mL）7份，精密量取5 mL，每份分别精密加入对照品溶液（含黄芪甲苷1.001 mg/mL）0.3 mL，照供试品溶液制备项下的方法制备供试品溶液，照黄芪甲苷含量测定法分别测定黄芪甲苷的含量，并计算回收率，结果黄芪甲苷的平均回收率为99.2%，RSD为0.35%，表明本法具有良好的回收率。结果见表4。
表4 加样回收率试验
2.8 含量测定
分别精密吸取对照品溶液5 μL，10 μL和供试品溶液10 μL，注入高效液相色谱仪，照上述色谱条件测定，以外标两点法对数方程计算含量，即得。结果见表5。
国家药品监督管理局标准WS-5620-（B-0620）-2002规定本品每毫升含黄芪甲苷（C41H68O14）不得少于0.020 mg，表中8批样品黄芪甲苷的含量均高于0.020 mg/mL。
表5 复方黄芪益气口服液中黄芪甲苷含量
3 讨 论
目前，复方黄芪益气口服液黄芪甲苷测定方法采用薄层扫描法，误差较大，操作时间长。本实验采用蒸发光散射检测仪（ELSD）作为检测手段，利用HPLC法测定复方黄芪益气口服液中黄芪甲苷的含量，实验操作简便，精密度高，准确度高，是控制黄芪甲苷含量一种较好的分析方法。
