高效液相色谱法测定回春如意胶囊中芦丁含量

黄余龙，何瑞荣，陈 奕，黄妙婵

(广东省东莞市人民医院，广东 东莞 523018)

回春如意胶囊由鹿茸、熟地黄、狗肾、锁阳、羊肾、菟丝子、山药、何首乌、槐米等组方，临床上用于治疗虚乏力、肾虚耳鸣、腰膝酸痛等症。为控制产品质量，笔者采用高效液相色谱法测定了制剂中芦丁的含量，报道如下。

1 仪器与试药

Dionex P680型高效液相色谱仪，ASL-100型全自动进样器，DAD紫外检测器;HN1006型超声仪;Sartorius BP211 D型电子天平。芦丁对照品(中国药品生物制品检定所，批号为100080-200306);回春如意胶囊(澳门泳江制药厂，批号为070701，20070101，20070102，20070103);甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为双蒸水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[1]

色谱柱:Supelco C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇-1%冰醋酸(32∶68);流速:1.0 mL/min;检测波长:257 nm;进样量:10 μL。理论板数按芦丁峰计算应不低于2 000。

2.2 溶液制备

精密称取芦丁对照品适量，用甲醇制成质量浓度为0.1 g/L的对照品溶液。取装量差异项下的供试品粉未0.5 g，精密称定，精密加入甲醇20 mL，称定质量，置超声仪(功率500 W，频率50 kHz)中超声处理30 min，冷却至室温，用甲醇补足减失的质量，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得供试品溶液。以相同的处方比例，按样品工艺制备不含槐米药材的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10 μL，注入色谱仪，记录色谱图。结果表明，阴性样品对测定无干扰(图1)。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密称取芦丁对照品适量，加甲醇制成0.104 8 g/L 的溶液。分别精密吸取 2，4，6，8，10 μL，注入色谱仪，记录峰面积，以进样质量浓度为横坐标、色谱峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=26.522X-0.65，r=0.999 9(n=5)。结果表明，芦丁质量浓度在0.209 6～1.048 g/L范围内与峰面积线性关系良好。

加样回收试验:取同一批(批号为070701)供试品6份，各约0.5 g，精密称定，分别加入芦丁对照品溶液适量，按供试品溶液的制备方法制备溶液，进样测定含量，计算回收率。结果见表1。

重复性试验:精密称取批号为070701的供试品1份，依法制备供试品溶液，重复进样测定。结果的 RSD为1.70%(n=6)，表明方法重复性良好。

表1 芦丁加样回收试验结果(n=6)

稳定性试验:取批号为070701的供试品，依法制备成供试品溶液，分别于 0，1，3，5，8 h时进样测定。结果的 RSD为 1.77%(n=5)，表明供试品溶液在8 h内稳定。

2.4 样品含量测定

取不同批号的供试品，依法制备供试品溶液，进样测定含量。结果批号为20070101，20070102，20070103的供试品中芦丁含量分别为 0.099 6，0.102 8，0.100 5 mg/粒。

3 讨论

曾比较了75%甲醇、水、甲醇加热回流提取或超声提取的效果，结果甲醇超声提取30 min的效果最好，杂质较少且提取较完全。流动相为甲醇-磷酸(42∶58)时，分离效果不太好，改为甲醇-1%冰醋酸(32∶68)后，峰形、分离度、保留时间均较好，故本试验以甲醇-1%冰醋酸为流动相。取批号为070701的供试品试验，考察流动相甲醇-1%冰醋酸的体积比分别为32∶68和35∶65，色谱柱分别为Supelco C18柱和Thermo C18柱，柱温为25℃和30℃时的RSD值。结果 RSD值分别为0.25%，0.1%及0.94%，表明结果均不受影响。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:276.