蜂胶中总黄酮的含量测定

李彩霞，班桂荣，董 玉

(1.内蒙古医学院附属人民医院药剂科，内蒙古 呼和浩特 010020; 2.内蒙古锡林郭勒盟白旗医院，内蒙古锡林郭勒 013800; 3.内蒙古医学院药学院，内蒙古 呼和浩特 010059)

蜂胶(propolis)是蜜蜂采集植物芽孢和树脂，并混入蜂蜡等自身分泌物而形成的一种棕色黏性固体物质，其中含蜂胶(55%)、蜂蜡(30%)、花粉和芳香油(15%)及少量杂质[1]。目前蜂胶产品多为蜂胶的醇提取物，其醇提取物中的黄酮类、酚类具有生理和药理活性。临床证明，黄酮和酚类具有抗菌、抗癌、促进组织再生和提高肌体免疫力等功效[2-3]。现代药理研究表明，蜂胶具有抗病毒、抗菌消炎、抗肿瘤、抗氧化、调血脂、调节机体免疫功能等多种生物活性作用[4]，在药品、保健品及化妆品等方面具有广阔的应用前景。蜂胶总黄酮的含量已成为判定蜂胶产品质量的标志性物质之一。笔者以芦丁为对照品[5-6]，采用紫外分光光度法测定蜂胶醇提物中总黄酮含量，现报道如下。

1 仪器与试药

752N型紫外分光光度计，电子分析天平。蜂胶(市购);芦丁对照品(中国药品生物制品检定所);95%乙醇(市购)，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

精密称取芦丁对照品适量，加无水甲醇制备成200 μg/mL的对照品溶液。称取蜂胶原药材150 g，加95%乙醇1 500 mL，加热回流2 h，滤过，残渣再加热回流2 h，合并滤液，回收溶剂;精密吸取上述溶液1.0 mL，置10 mL量瓶中，加95%乙醇稀释至刻度;再从此液中精密吸取10 mL，稀释至25 mL，即得供试品溶液。

2.2 测定波长选择

采用Al(NO3)3-NaNO2-NaOH显色法[7-8]，精密吸取芦丁对照品溶液2 mL，蜂胶供试品溶液1 mL，蜂胶胶囊供试品溶液5 mL，分别加入5%NaNO21.0 mL，放置6 min，然后加入10%Al(NO3)31.0 mL，混匀，放置 6 min，再加入 10%NaOH 10 mL，用水稀释至25 mL，放置15 min。在200～800 nm波长范围内扫描测定吸收光谱。用上述方法显色后，芦丁对照品、样品的最大吸收波长基本一致，均在525～530 nm范围内，且重现性好。故选择在528 nm波长处测定蜂胶中总黄酮含量。

2.3 方法学考察

线性关系考察:精密吸取芦丁对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，置25 mL量瓶中，分别加入NaNO21.0 mL，放置6 min，然后加入10%Al(NO3)31.0 mL，混匀，放置6 min，再加入10%NaOH 10 mL，用水稀释至25 mL，放置15 min。在528 nm波长处测定其吸光度。以芦丁对照品质量浓度(μg/mL)为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线，并进行线性回归，得回归方程 Y=8.312 4X+0.021 7，r=0.9996(n=5)。结果表明，芦丁质量浓度在 7.952～39.76 μg/mL范围内与吸光度呈良好的线性关系。

精密度试验:精密吸取蜂胶醇提物供试品溶液1.0 mL，蜂胶胶囊供试品溶液5.0 mL，依法连续6次测定吸光度。结果的 RSD分别为2.18%和1.63%(n=6)，表明该方法精密度良好。

稳定性试验:精密吸取蜂胶醇提物供试品溶液1.0 mL和胶囊供试品溶液 5.0 mL，分别于配置溶液后 0，5，10，15，25，30 min 时依法测定吸光度。结果 RSD分别为2.95%和2.89%(n=6)，表明蜂胶醇提物和胶囊供试品溶液分别在25 min和30 min内稳定。

重复性试验:精密吸取蜂胶醇提物供试品溶液1.0 mL，共6份，依法测定吸光度，代入标准曲线计算含量。结果平均含量为76.63μg，RSD=1.73%(n=6)，表明该方法重复性良好。

加样回收试验:精密吸取蜂胶醇提物供试品溶液0.5mL各6份，置25 mL量瓶中，分别加入质量浓度为38.20 μg/mL的芦丁对照品溶液1 mL，然后加95%乙醇稀释至刻度。依法测定吸光度，从标准曲线上读出芦丁的含量，并计算回收率。结果见表1。

表1 芦丁加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

精密吸取蜂胶醇提物样品各1.0 mL，置10 mL量瓶中，均用95%乙醇稀释至刻度;再从此样品溶液中吸取10 mL，稀释至25 mL，各3份。依法测定其吸光度，并计算样品中的总黄酮含量，结果蜂胶醇提取物中总黄酮平均含量为11.619%，RSD=0.53%(n=3)。

3 讨论

天然蜂胶中绝大部分有效成分能很好地溶于乙醇溶液，本试验用95%乙醇通过加热回流提取蜂胶，所得制剂在室温下有效成分的溶解性不会有明显的改变。

芦丁的甲醇溶液与蜂胶的乙醇溶液在525～530 nm波长处有共同的最大吸收峰，且溶液质量浓度与吸光度具有良好的线性关系，故以528 nm波长测定蜂胶中总黄酮含量的方法可行。以芦丁为对照品，采用紫外分光光度法测定蜂胶醇提取物中总黄酮含量，其操作简便，结果准确，精密度、重现性好，可以作为蜂胶质量检测的一种方法。

[1]王殆节.蜂产品学[M].北京:北京农业出版社，1994:5.

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[7]黄永林，赵志国，文永新.不同部位艾那香中总黄酮的含量测定[J].广西植物，2006，26(4):453-455.

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