《中药制剂分析》气相色谱法含量测定的实验教学改进※

王术玲 曾元儿 张 迪 谢佳颖 广州中医药大学中药学院（510006）

《中药制剂分析》气相色谱法含量测定的实验教学改进※

王术玲 曾元儿 张 迪 谢佳颖 广州中医药大学中药学院（510006）

目的 建立适合教学用的气相色谱法测定中药制剂中有效组分含量的学生实验。方法 采用SE-30弹性交联石英毛细管柱，FID检测器，以水杨酸甲酯为内标物，测定十滴水中樟脑的含量。结果 气化室温度为230℃；柱温为120℃保持5min，以10℃/min升至160℃，保持2min；检测室温度为250℃。结论 本文建立的方法经济、简便、准确，可作为实验教学用。

中药制剂分析；气相色谱；实验教学；十滴水；樟脑

有部分中药以挥发性物质为主要药效成分，如冰片、薄荷等，对于含有挥发油及其他挥发性有效组分的中药制剂，往往需采用气相色谱法测定其含量。因此中药制剂分析的实验教学中一般都会开设气相色谱法测定某制剂中某成分的含量，但由于气相色谱法稳定性和重复性较差，学生实验用的气相色谱仪器精确度不高，加之所用色谱柱一般是低极性的（如SE-30），对成分的选择性差，分离度不好，因此选择合适的中药制剂才能保证好的教学效果。本教学小组多年来一直致力于此方面的教学改革[1]，先后尝试过牛黄解毒片中冰片的测定、六味地黄丸中丹皮酚的测定，效果均不理想。经过多次预试验，本文认为开设十滴水中樟脑的含量测定较为适宜。因为2010版《中国药典》收载十滴水中樟脑的含量测定使用PEG-20M毛细管柱[2]，而我院现有学生实验用毛细管柱为SE-30，使用药典条件不能很好地实现成分分离，因此需要通过实验重新建立新的色谱条件。

1 仪器与材料

气相色谱仪GC9800（上海科创），N2000色谱工作站（浙大智达），FID检测器。樟脑对照品（中国药品生物制品检定所，批号：747-200005）；桉油精对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0788-9202）；十滴水样品（广西广明制药，批号100101、100302、100501）；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：SE-30石英毛细管柱（30m×0.53mm，0.5µm）；气化室温度：230℃；FID检测器温度：250℃；载气：N2（流量为0.05MPa）；进样量：1µl；定量方法：内标法。实验中考察了两种内标物：内标物为水杨酸甲酯时，柱温为120℃保持5min，以10℃/min升至160℃，保持2min；内标物为环己酮时，柱温为80℃保持3min，以5℃/min升至90℃，再以20℃/min升至150℃，保持5min[4]。

在上述两种色谱条件下，十滴水样品中樟脑、桉油精及内标物的色谱峰与样品中其他成分色谱峰均达到基线分离，见图1、图2。由图可知，水杨酸甲酯的保留时间在樟脑和桉油精之后，与樟脑保留时间相近；环己酮的保留时间在樟脑和桉油精之前，与樟脑相离较远。因此，本文选择水杨酸甲酯为内标物。

图1 水杨酸甲酯为内标的气相色谱图

图2 环己酮为内标的气相色谱图

2.2 溶液配制

2.2.1 内标溶液 取水杨酸甲酯适量，精密称定，加70%乙醇制成每1ml含40mg的溶液，作为内标溶液。

2.2.2 对照品溶液 取樟脑对照品约250mg，精密称定，置10ml量瓶中，加70%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 供试品溶液 取十滴水10支混匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml，加70%乙醇至刻度，摇匀，即得。

2.3 线性范围 精密移取对照品溶液0.2ml、0.5ml、1ml、2ml、3ml置10ml量瓶中，各瓶精密加入1ml内标溶液，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀。分别吸取1µl，注入气相色谱仪。以樟脑与内标物的峰面积之比为纵坐标Y，樟脑浓度为横坐标X，得Y = 0.5212X + 0.0245，r＞0.999，线性范围0.5019 mg/ml～7.5285mg/ml。

2.4 校正因子测定 精密吸取2.3项下的第三份对照品溶液（含樟脑2.5095mg/ml、水杨酸甲酯4.0916mg/ml）1µl，注入气相色谱仪，按上述色谱条件测定，连续测定5次，计算樟脑的校正因子f，结果为：f = 0.5987， RSD=1.8%。

2.5 重复性试验 取同一批样品（广西广明制药，批号100101）5份，按2.2.3项方法制备供试品溶液，进样1µl，测得樟脑含量为27.74mg/ml，RSD=1.8%（n=5）。结果表明重复性良好。

2.6 稳定性试验 取重复性试验项下的同一份供试品溶液，于制备后的0，2，4，6，8h分别进样1µl，计算樟脑与内标物的峰面积之比，RSD=1.2%。表明待测成分在8小时内稳定。

2.7 回收率实验 精密量取5份己知含量的同一批样品（广西广明制药，批号100101）0.5ml，分别置10ml量瓶中，精密加入对照品溶液0.5ml，精密加入内标溶液1ml，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀，按样品测定方法测定。结果回收率为96.7%，RSD=2.0%。

2.8 样品测定 取3批样品，按2.2.3项方法制备供试品溶液分别吸取1µl，注入气相色谱仪，按上述色谱条件测定樟脑的含量，结果见表1。

表1 十滴水中樟脑的含量 （n=2，mg/ml）

3 讨论

我院《中药制剂分析》开设了6个实验，4个验证性实验，1个综合性实验，1个设计性实验[4]。设计性实验要求学生掌握含量测定的方法学考察，实验成本较高，尤其是加样回收率试验需要大量对照品。本着不影响教学效果同时降低学生实验成本的原则，我们选择气相色谱法测定十滴水中樟脑的含量做为设计性实验[5]。十滴水一盒1.5元，共10支，可供20组学生用，并且其中的樟脑含量大，易于检测，樟脑对照品比较便宜。我们用文中所述方法检测市面买来的分析纯的樟脑化学合成品（250g，30元），以面积归一化法计算，纯度达到98%以上，且在本文所建线性范围内进样，未见到杂峰，因此可考虑做为实验教学用对照品，特别是用做回收率试验可解决实验成本问题。

文中所述色谱条件采用了程序升温，可以同时检测到桉油精和樟脑两个成分的色谱峰。我们也做过试验，在正文所述仪器条件下设置柱温为130℃或140℃，樟脑和水杨酸甲酯均达到基线分离，保留时间均在10min左右，相差约1min，完全满足含量测定要求。因此在教学过程中可根据实际需要，灵活设置柱温，可采用恒温（130℃或140℃），也可采用正文所述的程序升温。

[1] 王术玲,曾元儿.中药制剂分析教学中开展讨论课初探[J].药学教育,2007, 23(5):45-47.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典·2010年版.一部[S].北京:中国医药科技出版社,2010:421-422.

[3] 卢华,张国宏,蒋受军,等.气相色谱法测定十滴水中樟脑和桉油精含量的研究[J].中成药,2008,30(7):997-999.

[4] 崔永霞,谢彩侠,白雁.“中药制剂分析"实验教学模式的改革[J].实验室研究与探索,2009,28(10):106-107,135.

[5] 王翰华,夏苗芬,姚彤炜,等.高职基于工作过程导向的中药制剂分析课程设计[J].中国高等医学教育,2010,(3):118-119.

Reform of Experimental Teaching on Gas Chromatography Determination in the Course of Analysis of Chinese Medicinal Preparations

Wang Shuling，Zhang Di, Xie Jiaying （School of Pharmaceutical Sciences，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，China）

Object To establish a method to determine effective components in chinese medicinal preparations by gas chromatography for experimental teaching. Methods SE-30 capillary collumn and flame ionization detector were used to determine camphor in shidi water with methyl salicylate as the internal standard substance. Results The temperature of injector and detector was 230℃ and 250℃ respectively. The initial temperature of the column was set at 120℃, held for 5 min, then raised to 160℃ at 10℃/min, and held at 160℃for 2 min. Conclusion This method is economical, convinient and precise and can be used for experimental teaching.

Analysis of Chinese Medicinal Preparations；Gas chromatography；Experimental Teaching；Shidi Water；Camphor

10.3969/j.issn.1672-2779.2010.23.034

1672-2779（2010）-23-0043-02

广州中医药大学成人教育基金 [No：JJYJ0915]

2010-09-10）