双波长HPLC法同时测定复方水杨酸甲酯软膏中盐酸麻黄碱和水杨酸甲酯的含量Δ

时正媛，曾蔚欣，杨 丽，贝 雷，孙路路#（.首都医科大学附属北京世纪坛医院药剂科，北京 00038；.北京市食品药品监督管理局，北京 00038）

复方水杨酸甲酯软膏为常用的医院制剂，可用于外伤消肿、肌肉疼痛及冻疮等的治疗，其主要成分为盐酸麻黄碱和水杨酸甲酯。目前，盐酸麻黄碱和水杨酸甲酯含量测定的方法主要有荧光分析法[1]、毛细管气相色谱法[2-3]及高效液相色谱（HPLC）法[4-7]。为此，笔者参考了相关文献[1-7]，建立了双波长HPLC法同时测定复方水杨酸甲酯软膏中盐酸麻黄碱和水杨酸甲酯的含量，以为有效控制复方水杨酸甲酯软膏的质量提供参考。

1 材料

1260型HPLC仪，包括四元泵、标准型自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器（美国安捷伦公司）；AG285型电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

盐酸麻黄碱、水杨酸甲酯对照品（中国食品药品检定研究院，批号：171241-201007、110707-201011，纯度：99.7%、99.4%）；复方水杨酸甲酯软膏（首都医科大学附属北京世纪坛医院制剂室自制，批号：20140525、20140526、20140528，规格：20 g/支，每100 g软膏含盐酸麻黄碱2.5 g、水杨酸甲酯7.08 g）；甲醇、乙腈均为色谱纯，磷酸、三乙胺均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：磷酸三乙胺溶液（流动相A，取磷酸1 ml，用纯化水溶解并稀释至1 000 ml，加三乙胺1 ml混匀）-乙腈（流动相B），梯度洗脱程序见表1；柱温：室温；流速：1.0 ml/min；进样量：20 μl；检测波长：盐酸麻黄碱为207 nm，水杨酸甲酯为304 nm。

表1 梯度洗脱程序Tab 1 Gradient elution program

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 取盐酸麻黄碱、水杨酸甲酯对照品适量，精密称定，加无水乙醇溶解并稀释，制成每1 ml约含盐酸麻黄碱500 μg、水杨酸甲酯1.416 mg的混合贮备液；精密量取混合贮备液适量，加无水乙醇溶解并稀释，制成每1 ml约含盐酸麻黄碱50 μg、水杨酸甲酯0.141 6 mg的混合溶液，即得对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液 精密量取复方水杨酸甲酯0.2 g，置于100 ml量瓶中，加无水乙醇适量，于40～50 ℃水浴加热，缓慢振摇至溶解，放冷至室温，加入无水乙醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液 按复方水杨酸甲酯软膏处方比例制备不含盐酸麻黄碱、水杨酸甲酯的阴性样品，并按“2.2.2”项下方法制备，即得阴性对照溶液。

2.3 系统适用性试验

取“2.2”项下对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定，色谱见图1。结果显示，盐酸麻黄碱、水杨酸甲酯保留时间处样品中的辅料与溶剂无干扰，分离度为103.32，理论板数分别为30 579.36、599 948.01。

图1 高效液相色谱图A.对照品溶液（波长为207 nm）；B.对照品溶液（波长为304 nm）；C.阴性对照溶液（波长为207 nm）；D.阴性对照溶液（波长为304 nm）；E.供试品溶液（波长为207 nm）；F.供试品溶液（波长为304 nm）；1.盐酸麻黄碱；2.水杨酸甲酯Fig 1 HPLC chromatogramsA.control solution（at 207 nm）；B.control solution（at 304 nm）；C.negative control solution（at 207 nm）；D.negative control solution（at 304 nm）；E.test sample solution（at 207 nm）；F.test sample solution（at 304 nm）；1.ephedrine hydrochloride；2.methyl salic-ylate

2.4 线性关系考察

精密量取“2.2.1”项下混合贮备液1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、30.0 ml，分别置于100 ml量瓶中，加无水乙醇定容至刻度，摇匀，制成系列浓度的对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定。以质量浓度（x，μg/ml）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，得盐酸麻黄酮、水杨酸甲酯的回归方程分别为y＝24.19x+71.36（r＝0.999 9），y＝30.12x+37.02（r＝0.999 8）。表明盐酸麻黄碱、水杨酸甲酸质量浓度分别在5.0～150.0、0.014 16～0.424 8 μg/ml范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

2.5 精密度试验

取“2.2.1”项下对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样6次。结果，盐酸麻黄碱、水杨酸甲酯峰面积的RSD分别为0.92%、0.63%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

取样品（批号：20140526）适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别放置于0、2、4、6、8 h时进样测定。结果，盐酸麻黄碱、水杨酸甲酯峰面积的RSD分别为1.20%、0.96%，表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。

2.7 重复性试验

取样品（批号：20140526）适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样6次。结果，盐酸麻黄碱、水杨酸甲酯峰面积的RSD分别为1.36%、0.99%，表明该方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

取样品（批号：20140526）0.2 g，按其所含盐酸麻黄碱和水杨酸甲酯量的80%、100%和120%，精密加入一定量的盐酸麻黄碱、水杨酸甲酯对照品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样并计算加样回收率，结果详见表2。

表2 加样回收率试验结果（n＝3）Tab 2 Results of recovery tests（n＝3）

2.9 样品含量测定

取3批样品适量，按“2.2”项下方法制备供试品溶液、对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，结果见表3。

表3 样品含量测定结果（n＝3，%）Tab 3 Results of content determination of samples（n＝3，%）

3 讨论

复方水杨酸甲酯软膏中盐酸麻黄碱和水杨酸甲酯的紫外吸收特征不同：盐酸麻黄碱在207 nm波长处有最大吸收，水杨酸甲酯在207、304 nm波长处均有最大吸收，但在207 nm波长处水杨酸甲酯的保留时间有干扰，不适合用于复方水杨酸甲酯软膏中水杨酸甲酯的含量测定。因此，为了同时测定复方水杨酸甲酯软膏中两种组分的含量，故选择盐酸麻黄碱的检测波长为207 nm、水杨酸甲酯的检测波长为304 nm。

乳膏基质中含有凡士林和司盘80，为了不影响测定且保护色谱柱，需将其进行处理。本研究采用40～50 ℃水浴加热使基质溶解，放冷后过滤，取续滤液作为供试品溶液，提取效果较好。

综上所述，该方法操作简便、准确、重复性好，可用于复方水杨酸甲酯软膏的质量控制。

[1]周晓霞，魏永巨.荧光分析法测定中药透骨香中水杨酸甲酯的含量[J].河北师范大学学报，2013，37（1）：82.

[2]薛磊冰，赵佳丽，邹燕，等.毛细管气相色谱法同时测定麝香镇痛膏中樟脑、水杨酸甲酯的含量[J].药物分析杂志，2013，33（9）：1 607.

[3]邢俊波，曹红，胡丹，等.毛细管气相色谱法测定伤湿止痛膏中水杨酸甲酯的含量[J].解放军药学学报，2010，26（1）：54.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典：二部[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：777-778.

[5]李冬梅，刘永利，赵艳普，等.HPLC同时测定止嗽定喘丸中的盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱[J].华西药学杂志，2012，27（4）：436.

[6]徐建白，唐云，庞东颖，等.HPLC法测定活络酊中水杨酸甲酯[J].中草药，2011，42（10）：2 026.

[7]王林丽，陈亮，付若秋，等.HPLC法测定抗病毒口服液中盐酸麻黄碱的含量[J].中国药房，2007，18（15）：1 166.