不同居属地半夏核苷类有效成分的比较研究

2010-09-13戴小斌谈献和王康才

中国医药导报 2010年31期

戴小斌，谈献和，吴皓，王康才，张瑜

(1.南京中医药大学药学院，江苏南京 210046；2.南京农业大学，江苏南京 210000)

半夏为天南星科植物半夏Pinellia ternata（Thunb.）Breit.的干燥块茎，是我国传统的大宗药材，其性温味辛，有毒，具有燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结之功能[1]，是历代医家治疗疾病的要药。半夏块茎的质量是半夏药材品质及质量控制研究的关键，半夏块茎为植物的贮藏器官，含多种药效成分，目前评价半夏质量尚未有统一的成分指标[2]，但以鸟苷和总生物碱作为半夏评价指标成分已被广泛应用[3-7]。张科卫等[8]在测定不同居群半夏药材中鸟苷含量时得出，利用超声水提，采用高效液相色谱法（HPLC）测定半夏药材中的核苷含量（以鸟苷计），该法简便、快速、准确、重现性好，可作为半夏药材中核苷含量的检测。本课题采用该法测定半夏核苷类成分含量，比较不同居群之间的差异，为选育半夏优良品种提供依据。本课题测定半夏总核苷类成分时以鸟苷计。

1 仪器与试药

BP211D电子分析天平（德国Sartorious公司），H66025T超声清洗机（无锡超声电子设备厂），TDL-5离心机（centrifuge公司），数显恒温水浴锅（上海申胜生物技术有限公司），石英亚沸高纯水蒸馏器（江苏金城国胜实验仪器厂），Waters 2690高效液相色谱仪，996PDA二极管矩阵检测器，Millinnium 32色谱工作站，色谱柱 ACE5 AQ（150 mm×4.6 mm，5 μm）。尿嘧啶、黄嘌呤、尿嘧啶核苷、次黄嘌呤核苷、鸟嘌呤核苷对照品均购自中国药品生物制品检定所。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

精密称取尿嘧啶、黄嘌呤、尿嘧啶核苷、次黄嘌呤核苷、鸟嘌呤核苷对照品各 6.07、3.32、8.72、3.28、10.0 mg于 100 ml量瓶中，加蒸馏水定容，即为混合对照品储备液。采用逐级稀释法一次取混合对照品储备液 1、5、10、15、20、25 ml至 100 ml量瓶中，加水至刻度，即以此为 1、2、3、4、5、6 号混合对照品溶液。以鸟苷计，各混合对照品溶液中鸟苷浓度分别为1、5、10、15、20、25 g/ml。

2.2 半夏样品

共收集到11批样品（表1），分别来自四川、山东、山西、江苏、湖北、江西等六省的不同地区的半夏原药材，经我校药植教研室谈献和教授鉴定为天南星科植物三叶半夏Pinellia ternata（Thunb.）Breit.的干燥块茎。将其在60℃烘干，打粉，过4号筛，即得本品粉末，贴上标签，做好记号，备用。

2.3 供试品溶液制备

取本品粉末约1 g，精密称定，置离心管中，加入10 ml蒸馏水，超声处理（功率 500 W，频率 40 kHz）30 min，离心（3 000 r/min），将上层水液倒入蒸发皿中，如此超声、离心重复3次，合并上层水液，置水浴锅上蒸发浓缩，浓缩液转移至10 ml量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，即得。每个样品平行制备3份供试品溶液。

2.4 系统适应性试验

色谱条件的选择：以乙腈-水系统为流动相进行色谱分析，流动相为乙腈-水（0.1∶99.9），25 min 后以高浓度有机溶剂洗脱；测定波长：综合五种化合物的紫外光谱，将其测定波长确定在 254 nm；柱温：30℃；流速：0.8 ml/min。

2.5 方法学考察

2.5.1 线性关系考察取上述各不同鸟苷浓度的混合对照品溶液，每个浓度进样2次，记录鸟苷对应的保留时间处的峰面积。以对照品浓度对平均峰面积值进行回归，得到回归方程为 A=5.730 2×107C-52 961（r=0.999 4），可见鸟苷在 0.928～24.734 g/ml范围内线性关系良好，见图1。

2.5.2 精密度试验取4号混合对照品溶液连续进样6次，以鸟苷为指标进行精密度考察试验，得出RSD=0.07%，符合要求。

2.5.3 稳定性试验取上述半夏供试品溶液，隔2 h测1次，共测6次。结果表明，供试液中鸟苷在10 h内稳定，RSD为1.35%，符合要求。

2.5.4 重复性试验取重庆半夏样品粉末，平行处理6份，依法测定鸟苷含量，得出鸟苷含量RSD为2.40%，重复性良好。

2.5.5 回收率试验精密称取重庆半夏粉末共6份，各0.5 g，精密称定，置50 ml具塞三角瓶中，分别加入对照品溶液稀释液1 ml，再分别加入水至10 ml，与供试品溶液同法提取检测。计算鸟苷的回收率为102.74%，RSD为2.91%，符合要求。

2.6 不同居群半夏中核苷的含量测定（以鸟苷计）

取上述供试品溶液进样，每份进样1次，进样量20 μl。取峰面积计算鸟苷含量，对照品溶液随行对照。在检测波长254 nm下，得出半夏对照品溶液和供试品溶液（以重庆半夏为例）的 HPLC图，分别以图 2、3。图谱中 peak1、peak2、peak3、peak4、peak5分别代表尿嘧啶、黄嘌呤、尿嘧啶核苷、次黄嘌呤核苷、鸟嘌呤核苷的保留值。图3表明重庆半夏中5种核苷类成分均含有，而计算时则以鸟嘌呤核苷计。