薏苡仁中酯类化学物质组提取工艺研究

巩晓杰，孟宪生，包永睿，郭小瑞

（辽宁中医药大学药学院，辽宁大连 116600）

薏苡仁，另名苡仁、米仁，为禾本科植物薏苡（coix lacryma-jobi L.）的干燥成熟种仁，其性甘味淡凉，具有利水渗湿、健脾止泻、除痹、排脓、解毒散结的功效[1]。《本草纲目》称其为上品养心药。薏苡仁含蛋白质 14.70%～19.80%， 脂肪 6.23%～15.27%， 淀粉 53.00%～60.00%，少量维生素 B1和丰富的人体必需的矿物元素，营养价值堪称禾本科植物之首，民间常将其作为滋补食品食用。薏苡仁中主要活性成分为三酰甘油[2-3]，提取方法主要有水煎煮、醇提[4]、CO2超临界流体萃取法[5]等。其中，CO2超临界流体萃取法成本较高，而回流提取法设备简便，使用广泛。本实验选取回流提取法，分别对提取部位、溶剂、粒度进行考察，再采用L9（34）正交试验法，以薏苡仁中酯类化学物质组（以甘油三油酸酯含量计）的含量为指标应用高效液相色谱法进行分析，同时结合出膏率考察最佳提取工艺，优选出薏苡仁中酯类化学物质组的最佳提取工艺。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC-10A高效液相色谱仪（日本岛津）；SEDERE SEDEX75蒸发光散射检测器 （法国SEDERE公司）；XWK-Ⅲ无油无音空气泵 （天津市分析仪器厂）；ACCULAB ALC-11C.4型电子天平（德国赛多利斯集团）；HHS型恒温水浴锅（上海博讯）。

1.2 试药

乙腈、二氯甲烷、甲醇（色谱纯，美国TEDIA公司）；丙酮（分析纯，天津市凯信化学工业有限公司）；标准品甘油三油酸酯（批号：111692-200501，中国药品生物制品检定所）；薏苡仁药材购于超市。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

流动相的筛选与确立：甘油三油酸酯的含量测定是在《中国药典》的方法基础上建立的，但是在检测中为了使对照品峰达到基线分离且有适宜的保留时间，考察了乙腈-二氯甲烷的多个比例后，将流动相比例调整为乙腈-二氯甲烷（60∶40）。本实验均以薏苡仁中酯类化学物质组的含量（以甘油三油酸酯含量计）为指标进行测定。色谱条件：色谱柱为迪马C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-二氯甲烷（60∶40）；流速：1 ml/min；柱温：25℃；ELSD 参数：漂移管温度为 35℃。

2.2 单因素试验

2.2.1 提取部位考察 将薏苡仁分为种壳、种皮、种仁三部分，分别精密称取4 g，各加20 ml丙酮，60℃回流提取 1 h，过滤，滤液定容至10 ml。分别吸取上述三种供试品溶液10 μl，应用高效液相色谱法进行测定，结果见表1。

2.2.2 提取溶剂的考察 根据溶剂毒性、极性等因素选取乙醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷4种溶剂进行平行提取。精密称取1 g薏苡仁粉末4份，分别加上述有机溶剂10 ml，分3次室温浸提，每次30 min，合并提取液，定容至10 ml。分别吸取上述4种供试品液20 μl，应用高效液相色谱法进行测定，结果见表2。

表1 薏苡仁提取部位考察

表2 薏苡仁提取溶剂考察

2.2.3 粒度考察 薏苡仁药材粉碎过20、60、100目，分别精密称取10 g，2倍量丙酮回流提取2次，每次1 h，定容至50 ml。分别吸取上述4种供试品液10 μl，应用高效液相色谱法进行测定，结果见表3。

表3 薏苡仁提取粒度考察

2.3 正交试验设计

2.3.1 正交试验因素、水平的确定 以溶剂用量，提取时间，提取次数为考察因素，每个因素选择三个水平，按正交试验L9（34）设计正交试验因素水平表，见表4。

表4 正交试验因素水平

2.3.2 试验方法 精密称取薏苡仁细粉20 g，按正交试验安排进行，用丙酮回流提取，过滤，滤液定容至50 ml，取定容后的供试液10 μl，应用高效液相色谱法进行测定。精密吸取上述正交试验的1～9号样品液各25 ml置于干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，置于105℃的烘箱中至恒重，精密称量，计算出膏率，结果见表5、6。

表5 正交试验结果

表6 方差分析

2.4 薏苡仁化学物质组分析

2.4.1 色谱条件 C18柱（美国Agilent公司，4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-二氯甲烷（60∶40）；流速：1 ml/min；柱温：25℃；ELSD参数：漂移管温度为35℃。

2.4.2 对照品溶液制备 精密称取甘油三油酸酯对照品适量，加流动相制成每毫升含0.14 mg的溶液，即得。

2.4.3 供试品溶液制备 薏苡仁药材过40目筛，加3倍量丙酮，60℃回流提取3次，每次30min，合并提取液，过滤，回收溶剂，减压干燥至无溶剂，即得薏苡仁化学物质组。取薏苡仁化学物质组，加适量流动相混匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.4.4 系统使用性试验 取对照品溶液5 μl，供试品溶液10 μl，以薏苡仁中酯类化学物质组的含量为指标，以甘油三油酸酯含量计，色谱图见图1，经试验和查阅相关文献[6]，化学物质组中各成分见表7。

表7 薏苡仁酯类化学物质组

3 讨论

实验结果表明，种仁中薏苡仁酯类化学物质组含量最多；丙酮提取有效物质组的含量高于乙酸乙酯、乙醇、乙酸乙酯和二氯甲烷；粉碎粒度越小，提取率越高。

直观分析可知，各因素对综合评分影响大小排序为C＞A＞D＞B，最佳工艺为A2B1C1。所以薏苡仁中活性成分的最佳提取工艺为：6倍量丙酮回流提取1次，每次30 min。

薏苡仁具有降压、降血糖和抗感染镇痛作用，近年又发现有抗肿瘤、免疫调节、抗病毒的作用。现代药理研究表明，薏苡仁中的薏苡仁油具有抗肿瘤的作用，其抗肿瘤的活性成分为酯类化学物质组。本文对薏苡仁中抗肿瘤活性成分的提取方法进行考察，确定了最佳工艺，为工业生产提供了基础，同时也为薏苡仁抗肿瘤活性成分的进一步分离筛选提供了资料和依据。

本文采用薏苡仁中酯类化学物质组的含量对提取方法进行评价，参与评价的化学物质较多，能更加有效、客观、全面地反映提取参数。计算方法：以甘油三油酸酯计，以其峰面积的自然对数值为纵坐标，以进样量的自然对数值为横坐标进行线性回归，对化学物质组中10个峰的峰面积进行累加，计算得到的含量即为薏苡仁中酯类化学物质组的总含量。

本文经试验和查阅文献，确定了薏苡仁酯类化学物质组成分。经比较，本实验与相关文献[6]均采用高效液相色谱法、C18色谱柱（美国 Agilent公司，4.6 mm×250 mm，5 μm）、流速为1 ml/min，柱温为25℃，只是在流动相比例筛选时，选取了乙腈-二氯甲烷（60∶40）使组分中各峰基本达到基线分离的同时又有适宜的保留时间，但组分中各峰的流出顺序一致，所以确定了组分中10个化合物的分子式。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部.北京∶化学工业出版社,2010∶353-354.

[2]邹耀洪.薏苡仁挥发性成份的分析[J].分析化学,1995,23(1)∶93-96.

[3]陈勇,陈碧莲,何云珍,等.高效液相色谱法测定薏苡仁中甘油三油酸酯的含量[J].中国现代应用药学杂志,2005,22(3)∶246-247.

[4]何东平,宋光森,雷达,等.用乙醇溶剂提取薏苡仁油的研制报告[J].武汉食品工业学院学报,1995,4∶10-12.

[5]唐明,邵伟,熊泽.超临界二氧化碳萃取薏苡仁油的研究[J].现代食品科技,2006,22(4)∶101-103.

[6]向智敏,祝明,陈碧莲,等.HPLC-MS分析薏苡仁油中的甘油三酯成分[J].中国中药杂志,2005,30(18)∶1436-1437.