抗凝血酶Ⅲ对家兔静脉血栓形成的实验研究

陈秋生，梁泽华，何 康

（广东医学院生理科学实验室，广东湛江 524023）

正常情况下，机体凝血与抗凝系统处于动态平衡，在病理条件下，当凝血与抗凝系统功能异常时，可导致血液高凝，甚至导致血栓形成。血栓可发生于许多疾病中，如血栓发生在动脉，导致供血的重要器官或组织严重缺血，如不及时诊治，常危及生命。病理性过程中血栓的形成通常是由组织因子途径启动，然后通过内在的途径放大，最终导致凝血酶的产生，使纤维蛋白原水解为纤维蛋白，纤维蛋白交联在一起，形成血栓。抗凝血酶Ⅲ（antithrombin-Ⅲ，AT-Ⅲ）是主要的生理性血浆抗凝物质，其对凝血酶的灭活能力占所有抗凝蛋白的70%～80%，除凝血酶外，还能抑制凝血因子Ⅹa、Ⅸa、Ⅺa、Ⅻa以及纤溶酶、胰蛋白酶、激肽释放酶等，从而发挥抗凝作用。本文旨在探讨国产AT-Ⅲ对家兔静脉血栓形成的预防作用。

1 材料与方法

1.1 材料

AT-Ⅲ（华兰生物工程有限公司，250 U/瓶、500 U/瓶冻干剂型），抗凝剂（0.109 mmol/L枸橼酸钠，分析纯，广州化学试剂厂），电子天平（上海天平仪器厂），自动血凝仪（thromboscreen 400c-plus，美国），家兔（实验级，体重 2.5 kg 左右，由广东医学院实验动物中心提供）。

1.2 方法

AT-Ⅲ 冻 干 剂 用 注 射 用 水 溶 解 到 62.5、125.0、250.0、500.0 U/6 ml，置 37℃水浴箱孵育 30 min。 50只家兔随机分为5组，每组10只。以戊巴比妥钠麻醉，于正中切开腹壁，分离下腔静脉，在肾静脉下结扎静脉，然后缝合腹壁。结扎腔静脉前15 min，于耳缘静脉注射不同浓度的AT-Ⅲ（按5 ml/kg体重给药）；对照组注射同体积的生理盐水。8 h后重新开腹，在髂内静脉汇合处用手术缝线结扎下腔静脉，紧靠结扎线外侧剪下血管，迅速固定于木板上，剪开，让未凝血液自然流出。若有血栓形成，用尺测量血栓长度，用吸水纸吸干，于电子天平上称量血栓湿重，称量完后将血栓置于37℃烤箱烤24 h，然后称量血栓干重。

1.3 统计学分析

2 结果

在下腔静脉结扎后8 h，对照组各动物下腔静脉内见明显血栓形成。与生理盐水对照组相比，小剂量AT-Ⅲ（62.5 U/kg）对血栓的形成未见明显的抑制作用，但随着AT-Ⅲ浓度的增大，血栓的长度逐渐缩短，血栓湿重和干重逐渐减轻。结果见表1。

3 讨论

抗凝血酶是体内重要的天然抗凝蛋白，属于丝氨酸蛋白酶抑制物家族成员，抗凝血酶通过与凝血酶结合形成凝血酶-抗凝血酶（TAT）复合物，从而灭活凝血酶。此外，它还具有较强的抑制因子Ⅹa、Ⅸa活性的作用，对因子Ⅺa、Ⅶa纤溶酶及激肽释放酶的活性也有一定的抑制作用[1-2]，广谱的抗凝活性使其成为体内的一种重要凝血系统调节剂。除此之外，抗凝血酶还具有抗感染活性，通过细胞信号传导通路，改变细胞的生化特性及对炎症细胞刺激因子的反应，包括下调促炎、促凝因子，如 IL-1、IL-6、TNF、TF、ADP；并上调抗凝因子，如前列环素（PGI2）或CD39/ATP去氧核糖核酸酶，从而发挥抗感染作用。AT-Ⅲ对FⅩa与凝血酶的灭活作用十分重要，它可以直接抑制凝血酶，也可与凝血酶形成复合物抑制多种凝血因子的活性。AT-Ⅲ在肝素的协同作用下与凝血酶形成复合物，这样内源性或外源性凝血机制都可被AT-Ⅲ阻断，当血液中的AT-Ⅲ含量减少时，只外加肝素不能阻断凝血过程。

表1 AT-Ⅲ对静脉血栓形成的抑制作用（±s）Tab.1 The inhibitory effect of AT-Ⅲ on venous thrombosis(±s)

表1 AT-Ⅲ对静脉血栓形成的抑制作用（±s）Tab.1 The inhibitory effect of AT-Ⅲ on venous thrombosis(±s)

与生理盐水对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01Compared with normal sodium control group,*P＜0.05,**P＜0.01

生理盐水对照组AT-Ⅲ不同剂量组62.5 U/kg 125.0 U/kg 250.0 U/kg 500.0 U/kg组别 血栓长度（mm） 血栓湿重（mg）9.20±1.3139.65±4.78血栓干重（mg）9.77±1.36 9.12±1.20 6.90±1.35*4.20±0.98**3.79±0.83**38.71±5.12 29.37±3.11**17.64±4.65**13.58±5.34**9.65±1.23 7.89±1.69*4.12±1.28**3.10±1.01**

静脉血液凝固系统是一个动态平衡的过程，即血凝和纤溶的平衡。抗凝血酶缺乏是发生静脉血栓与肺栓塞的常见原因之一[3]；但是在临床上静脉血栓形成大多是后天获得性的，血液停滞是其最常见的获得性原因[4]。AT-Ⅲ在生理性凝血以及控制凝血过程中起着重要的作用。当血浆中AT-Ⅲ活性＜70%时，血栓形成的危险性就会增加，凝血功能亢进会消耗AT-Ⅲ，加之内皮细胞受损，凝血因子合成减少，所以AT-Ⅲ活性下降与消耗及合成减少有关。AT-Ⅲ缺乏，约有60%发生血栓栓塞症，主要为静脉血栓形成，发病部位多在下肢深部静脉，其次为髂静脉、肠系膜静脉[5-7]。有实验证实，补充AT-Ⅲ可有效减少脑梗死区的范围及改善预后[8]。

本研究显示，大剂量的AT-Ⅲ对静脉血栓的形成具有抑制作用，剂量与效应之间呈明显的线性关系，临床上应用AT-Ⅲ可用于预防深静脉血栓形成。

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