四川南江金银花中绿原酸含量的测定

但春，林之蔚，雷泞菲，严雪峰，郭程飞，庄贺

（成都理工大学材料与化学化工学院，四川成都610059）

四川南江金银花中绿原酸含量的测定

但春，林之蔚，雷泞菲*，严雪峰，郭程飞，庄贺

（成都理工大学材料与化学化工学院，四川成都610059）

利用超声波提取法提取四川南江金银花、山东平邑金银花及山东鲁峰金银花中绿原酸，并用高效液相色谱法进行含量测定，同时测定南江越冬期金银花茎和叶中绿原酸的含量。结果表明：南江金银花花蕾中绿原酸含量比山东平邑和鲁峰金银花中的绿原酸高,达到6.2348%；南江金银花在越冬期的叶中绿原酸含量也较高，达到4.5251%，非常具有开发应用前景。

金银花；绿原酸；高效液相色谱法

Abstract:Study on the chlorogenic acid content of flos lonicerae,which come from Nanjiang,Sichuan;Pingyi,Shandong and Lufeng,shandong,after extracted by the ultrasonic method.And the leaves and branch of Nanjiang flos lonicerae which were collected during winter were also measured.The content of chlorogenic acid was determined by HPLC.The results showed the chlorogenic acid content of 6.2348%from the flower of Nanjiang was fairly higher than Pingyi and Lufeng,and it was also high in leaves of Nanjiang flos lonicerae,which was 4.5251%.

Key words：Flos lonicerae;Chlorogenic acid;HPLC

金银花作为常用大宗中药材，药用价值高，在国内外久负盛名。其花叶根均可入药，含30多种人体所需的元素，主要成分为多种绿原酸类化合物及木犀草苷。具有广谱抗菌,抗病毒及抗真菌的作用，主要用于清热解毒、凉散风热，用于痛肿疗疮，喉痹丹毒，热血毒痢，风热感冒等疾病的治疗，能降低血液中胆固醇含量，加强机体防御机能[1]。金银花除具有较高的药用价值外，其食用价值也很大。金银花中除含有绿原酸和黄酮类化合物外，还含有丰富的氨基酸和可溶性糖，常见的忍冬酒、银花茶、银花可乐、银花糖果和银仙牙膏等有很好的清热解暑和保健作用，颇受消费者青睐。随着国际市场的开放和种植的规范化，金银花及其保健制品的需求量将大大增加，其市场潜力巨大[2-3]。

尽管金银花市场空间很大，但目前（截至2010年）我国内地金银花仍然以原料花交易为主，产业化的开发还没有形成规模。对金银花的开发流程、生产加工还不尽人意，缺乏龙头企业带动。茎、叶及加工副产品在医药、保健品、日用品及保健饮料等方面还未充分利用，严重制约了金银花的综合利用，在金银花的一个生长年中，4月～5月为花期，其余大量的生长期均是以枝蔓生长为主，每年被修剪的茎、叶是花产量的3倍以上，大量的茎和叶被浪费掉，本文以四川南江等产地的金银花为材料，测定其花中绿原酸含量，同时测定越冬期（冬至前后）的金银花叶和茎中绿原酸含量，以期为金银花的综合利用提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

四川南江金银花的花、茎和叶、市售山东平邑金银花及山东鲁峰金银花。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱：AichromBond-AQ C18柱（4.6 mm×250 mm×5 μm）；流动相：甲醇-0.4%冰醋酸溶液；采用线性梯度洗脱程序：20%~30%甲醇（0 min~15 min），30%~70%甲醇（16 min~40 min）；流速：0.5 mL/min；进样量：10 μL；柱温：室温；检测波长：327 nm。

1.2.2 标准溶液的制备

精密称取对照品绿原酸5.000 mg，以80%的甲醇溶解，并定容至5 mL棕色容量瓶中，得1.000 mg/mL的绿原酸标准溶液；储存于冰箱（4℃）备用。

1.2.3 样品溶液的制备

精确称取金银花细粉0.300 g，置50 mL具塞三角瓶中，加入40 mL 80%的乙醇，超声（400 Hz）提取2次，每次30 min，收集合并滤液，45℃真空浓缩至浸膏。加入80%的甲醇适量，定容至50 mL的容量瓶中，用0.45 μm微孔滤膜过滤，冰箱冷藏避光，备用。

1.3 方法学考察

1.3.1 线性关系的考察

精密吸取对照品溶液 1.5、3、6、9、12、15、18 μL，按“1.2.1”的色谱条件测定绿原酸的峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，得绿原酸的标准曲线方程Y=40.013 X-1.346（r=0.9999），在0.78 μg/mL~9.36 μg/mL范围内线性关系良好。

1.3.2 精密度的考察

取绿原酸标准品溶液，连续进样6次，绿原酸的保留时间的RSD=0.766%,绿原酸的峰面积的RSD=1.174%，表明该仪器的精密度良好。

1.3.3 方法的稳定性考察

取南江金银花的花，按样品溶液制备方法制样，制得的样品溶液在室温下放置 0、3、6、9、12、15 h 后检测。结果表明，绿原酸的保留时间的RSD=0.725%，峰面积的RSD=2.362%，表明该样品的稳定性良好。

1.3.4 方法的重现性考察

取南江金银花的花5份，按样品溶液制备方法制样，结果表明，绿原酸的保留时间的RSD=0.336%，峰面积的RSD=1.120%，结果表明该方法的重现性良好。

1.3.5 加样回收率试验

准确称量5份南江金银花的花，重量为0.3067、0.2974、0.2945、0.3094、0.3002 g，准确加入一定量绿原酸标准品，按样品溶液制备方法制样，结果见表1。测定结果平均回收率为99.96%，RSD为4.00%。

表1 样品中绿原酸回收率测定结果Table 1 Add-sample recoveries of methods

2 结果与讨论

以不同品种金银花为研究对象，按照不同部位分别制样，按样品溶液制备方法制样，在“1.2.1”的色谱条件下测定，记录其峰面积，计算绿原酸的含量，结果见图1和表2。

表2 不同产地金银花中绿原酸含量比较Table 2 contrast of Chlorogenic Acid concentration in Honeysuckle %

从图1和表2看出，不同产地的金银花样品中绿原酸含量差别较大：南江金银花的花蕾中绿原酸含量最高，达到6.2348%。分析原因其一可能与其生产地气候、土壤相关，因为金银花生长的气候、土壤、管理、光照、采摘时间等因素的不同，决定了不同产地的金银花中绿原酸含量的差别[4]，南江金银花的花和叶中绿原酸含量均很高，这与南江的气候地理条件密切相关，南江县平均海拔1100 m,平均日气温16.3℃，立体气候和小气候明显，光照充足，生态环境优异，非常适合金银花生长。其次绿原酸含量与其加工炮制工艺相关，本次所取的南江金银花是通过酶法处理干燥而成，而市场上购买的山东金银花是通过自然干燥加工而成，可能在干燥过程中绿原酸氧化酶分解了部分绿原酸所致。

金银花不同器官部位的绿原酸含量差异较大。南江金银花的花蕾中绿原酸含量最高，叶中绿原酸含量其次，茎中绿原酸含量很低，仅有0.3047%。冬至时期的南江金银花叶中绿原酸含量很高，达到4.5251%，比山东平邑金银花的花蕾中含量还高出25.6%。在金银花的一个生长年中，仅被修剪的茎、叶是花产量的3倍以上，金银花叶在市面上价格比花蕾低得多，大量的叶和茎均被废弃，其资源利用率仅为20%。

作为药食兼用的金银花在生产中主要取自于金银花的花，大量的叶作为废弃物丢掉，尤其在越冬期的叶中绿原酸含量非常高。此外，研究表明金银花叶中的黄酮类物质含量是花的2.78倍，而黄酮类化合物同样具有较强的抑菌、抗菌作用[5]。因此很有必要对金银花茎、叶及加工副产品在医药、保健品、日用品及保健饮料等方面的应用进行深度开发、综合利用，提高其附加值。

3 结论

四川南江金银花与山东平邑金银花及山东鲁峰金银花中绿原酸含量比较表明：南江金银花中绿原酸含量比山东平邑和鲁峰金银花中的绿原酸高，为6.2348%；南江金银花在越冬期的叶中绿原酸含量较高，达到4.5251%，茎中含量较低，仅0.3047%。

[1]国家药典委员会.中国药典，I部[S].北京：化学工业出版社，2000：177

[2]阎巧娟，韩鲁佳，江正强.金银花中绿原酸提取纯化工艺的优化[J].中国农业大学学报,2002，7(2):22-26

[3]罗磊，郭晓园.金银花中绿原酸的研究进展[J].工艺探讨，2008(8)：60-63

[4]包卫华.不同产地加工的金银花中绿原酸含量的研究比较[J].时珍国医国药,2008,18(7):1075-1076

[5]杨敏丽.不同品种的金银花及金银花的不同部位中绿原酸含量的比较研究[J].分析测试学报,2006,25(11):122-124

Study on the Content of Chlorogenic Acid from Honeysuckle（Flos lonicerae）

DAN Chun，LIN Zhi-wei，LEI Ning-fei*，YAN Xue-feng，GUO Cheng-fei,ZHUANG He
（College of Materials and Chemistry&Chemical Engineering,Chengdu University of Technology,Chengdu 6100059，Sichuan,China）

2010-03-29

四川省青年基金(07zQ026-039)

但春（1973—），女（汉），讲师，博士，主要从事天然产物研究与开发工作。

*通信作者