黑木耳多糖的提取工艺

魏红，吴向阳，仰榴青，赵婷，李芳，邹烨

（1.江苏大学食品与生物工程学院，江苏镇江212013；2.江苏大学化学化工学院，江苏镇江212013；3.江苏大学药学院，江苏镇江212013）

黑木耳多糖的提取工艺

魏红1，吴向阳2，*，仰榴青3，赵婷3，李芳1，邹烨2

（1.江苏大学食品与生物工程学院，江苏镇江212013；2.江苏大学化学化工学院，江苏镇江212013；3.江苏大学药学院，江苏镇江212013）

研究黑木耳多糖的提取工艺,以多糖得率为考察指标，在单因素试验结果的基础上，进行正交试验设计，考察液料比、时间、温度对多糖得率的影响。结果表明，温度是影响粗多糖得率的重要因素，水提法的最佳工艺为：液料比70（mL∶g），提取时间4h，温度100℃，提取2次，pH为7.0。此条件下黑木耳多糖得率为32.24%，多糖含量为64.23%。

黑木耳；多糖；提取工艺

Abstract：To study the optimal water extraction technology of polysaccharide from Auricularia auricula.The yield was regarded as an examine target.On the basis of single factor tests,orthogonal experiment design was applied to analyze the influence of factors including liquid-solid ratio,extraction time,extraction temperature on the yield of the polysaccharides.Temperature is an important factor for the yield of the polysaccharides.The optimal technology condition was obtained.The liquid-solid ratio was 70,the extraction time was 4 h,the extraction temperature was 100℃,the extraction times were 2 times,pH was 7.0.In this condition,the yield of solublepolysaccharidesinAuriculariaauriculawas32.24%,thecontentsofsolublepolysaccharidesin Auricularia auricula was 64.23%.

Key words:Auricularia auricula;polysaccharide;extraction technology

黑木耳（Auricularia auricula）别名光木耳、云耳、木茸、木菌等，属层菌纲，木耳目，木耳科，木耳属，是珍贵的胶质菌，营养丰富，食味鲜美，具有很高的营养价值和药用价值。研究发现，黑木耳多糖具有降血脂、降血糖、抗衰老、抗凝血、免疫调节等生物活性[1-5]，有重要的研究和应用价值。但目前工业上由黑木耳子实体生产黑木耳多糖时，因黑木耳中含有大量胶质成分，给其提取分离造成了很大困难，影响了黑木耳多糖产品的开发利用。因此，本文以黑木耳为原料，对其多糖的提取工艺进行研究，为黑木耳多糖的进一步开发应用奠定基础。

1 材料与方法

1.1 主要材料、试剂及仪器

1.1.1 材料

黑木耳：由浙江方格药业有限公司提供，60℃烘干，粉碎，过200目筛，贮于干燥器中备用。

1.1.2 试剂

葡萄糖（分析纯，105℃下烘至恒重）、95%医用酒精、苯酚溶液（苯酚100 g加铝粉0.1 g和氢氧化钠0.05 g，蒸馏收集180℃～182℃馏分，得到100%的苯酚。配制成5%的苯酚溶液，放入棕色瓶，置于冰箱中保存备用）；浓硫酸（分析纯）。

1.1.3 仪器

VIS-7220型可见分光光度计：北京瑞利分析仪器公司；RE-52C型旋转蒸发器、HH-S型数控恒温水浴锅：巩义市予华仪器有限责任公司；电子天平：北京赛多利斯仪器系统有限公司；FD-1C-50冷冻干燥机：北京博医康实验仪器有限公司；101型电热鼓风干燥箱：巩义市英峪予华仪器厂；KQ-250B型超声波清洗器：昆山市超声波仪器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 粗多糖的提取

称取适量黑木耳粉末，置于圆底烧瓶中，按一定液料比、浸提时间、浸提温度、pH，在热水浴中回流浸提数次，冷却后离心，合并上清液；上述清液经减压浓缩，加入一定体积95%乙醇，使终浓度为80%进行沉淀，所得沉淀经离心、冷冻干燥后得粗多糖样品粉末。

1.2.2 单因素试验

影响多糖得率的主要因素为液料比、时间、提取次数、温度、pH 等。本文液料比（mL∶g）选取 40、50、60 、70 、805 个水平，提取时间选取 1、2、3、4、5 h 5 个水平，提取次数选取 1、2、3、4、5 次 5 个水平，提取温度选取 60、70、80、90、100 ℃ 5 个水平，pH 选取 6.0、7.0、8.0、9.0、10.05个水平，分别进行单因素试验。

1.2.3 正交试验

根据单因素试验结果，以多糖得率为考察指标，选取液料比、提取时间、提取温度三项作为考察因素，各取3个水平，进行L9（34）正交试验设计，以确定黑木耳粗多糖提取的最优工艺条件，并对最优条件进行验证试验。

1.2.4 多糖含量的测定

1.2.4.1 标准曲线的制作

精确称取105℃干燥至恒重葡萄糖标准品30 mg，用双蒸水定容至100 mL，得葡萄糖标准溶液。将该标准溶液稀释成浓度为 120、150、180、210、240、270 mg/L的溶液，分别吸取稀释液0.6 mL，加入5%的苯酚溶液1.2 mL，混合后迅速加入6 mL浓硫酸，混匀，30℃水浴中显色30 min，另以双蒸水代替糖溶液同上操作为空白对照，在490 nm波长处测定吸光度。以糖浓度（C）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，制作标准曲线。标准曲线的回归方程为A=0.0042C+0.0166（R=0.9986），式中：A为吸光度；C为葡萄糖溶液浓度，单位：mg/L。

1.2.4.2 样品中多糖含量的测定

称取适量的粗多糖样品，蒸馏水定容至50 mL。精密量取0.6 mL按1.2.4.1中方法操作，测定吸光度，根据标准曲线计算多糖的浓度和样品中多糖的含量。

2 结果与讨论

2.1 单因素试验

2.1.1 液料比对黑木耳多糖得率的影响

图1为提取温度100℃，提取时间3 h，提取次数2次，pH为7.0时，不同的液料比对多糖得率的影响。

由图1可见，当液料比低于60时，随着液料比的增加多糖得率增加，而当液料比大于60后，多糖得率增加缓慢。因此液料比选取60为宜。

2.1.2 温度对黑木耳多糖得率的影响

图2为液料比60，提取时间3 h，提取次数2次，pH为7.0时，不同提取温度对多糖得率的影响。

由图2可知，多糖得率随着温度的升高而增加，因此温度选取100℃。

2.1.3 提取次数对黑木耳多糖得率的影响

图3为液料比60，提取时间3 h，提取温度100℃，pH为7.0时，不同提取次数对多糖得率的影响。

由图3可知，随着提取次数的增加多糖得率增加，提取2次后多糖得率变化趋于平缓。因此，考虑到能耗，选取提取次数2次。

2.1.4 提取时间对黑木耳多糖得率的影响

图4为液料比60，提取温度100℃，提取次数2次，pH为7.0时，不同提取时间对多糖得率的影响。

由图4可知，随着提取时间的增加多糖得率有所增加，且3 h多糖得率明显高于2 h，3 h后曲线趋于平缓，因此选取提取时间为3 h。

2.1.5 pH对黑木耳多糖得率的影响

图5为液料比60，提取时间为3 h，提取温度为100℃，提取次数为2次时，不同pH对多糖得率的影响。

由图5可知，多糖得率随着pH增大变化较小，pH为8.0时最大；多糖得率在pH7.0时与pH为8.0时相差很小，考虑到碱性条件可能使黑木耳中某些杂质溶出度增加，使得多糖含量下降，因此选取pH为7.0较宜。

2.2 正交试验

在上述单因素试验结果的基础上，以多糖得率为考察指标，选定三因素三水平进行L9(34)正交试验设计，因素水平见表1，提取次数2次，pH为7.0时的正交试验结果见表2。方差分析结果见表3。

表1 因素水平表Table 1 Factors and levels

表2 正交试验结果Table 2 Results of orthogonal test

表3 方差分析表Table 3 Analysis of vaiance

由正交试验结果和极差分析可知，影响黑木耳多糖提取诸多因素的主要顺序为提取温度（C），液料比（B），提取时间（A）；最优组合为 A3B3C3，即在浸提 2次，pH为7.0的情况下，浸提时间4 h，液料比70，浸提温度100℃。

由表3方差分析结果可知，各因素对结果影响的主次顺序为浸提温度（6.220）＞液料比（2.003）＞浸提时间（1.750），其中温度有显著性差异。

2.3 验证试验

以最优工艺条件（液料比70，温度100℃，时间4h，提取2次，pH为7.0）进行验证试验，此条件下，黑木耳多糖的得率为32.24%，粗多糖样品中多糖含量为64.23%。樊黎生等[6-7]用微波辅助和常规水提法对黑木耳多糖的提取工艺进行了研究，结果表明微波辅助提取条件下多糖得率为13.26%，常规水提法得率为8.58%，可见，本文最优工艺的多糖得率明显高于文献报道，多糖含量也较高。

3 结论

温度是影响热水浸取黑木耳多糖得率的最重要因素，其次为液料比和浸提时间。热水浸取黑木耳多糖的最佳工艺条件为：液料比70，提取温度100℃，提取时间4 h，提取次数2次，pH为7.0。此条件下，黑木耳多糖得率为32.24%，粗多糖样品中多糖的含量为64.23%。该提取工艺的多糖得率较高，粗多糖中多糖的含量高，可用于黑木耳多糖的提取。

[1]韩春然,徐丽萍.黑木耳多糖的提取、纯化及降血脂作用的研究[J].中国食品学报,2007,7(1):54-58

[2]宗灿华,于国萍.黑木耳多糖对糖尿病小鼠降血糖作用的研究[J].食用菌,2007,4:60-61

[3]周国华.黑木耳多糖抗衰老及降血脂生物功效的研究[D].东北农业大学,2005：21-27

[4]Seon-Joo Yoon,Myeong-Ae Yu.The nontoxic mushroom Auricularia auricula contains a polysaccharide with anticoagulant activity mediatedbyantithrombin[J].ThrombosisResearch,2003,112:151-158

[5]张秀娟,于慧茹,耿丹,等.黑木耳多糖对荷瘤小鼠细胞免疫功能的影响[J].中成药,2005,27(6):691-693

[6]樊黎生,张声华,夏服宝.黑木耳多糖(CAAP)的分离提取工艺及其理化性能的研究[J].食品科学,2004,25(8):100

[7]樊黎生,张声华,吴小刚.微波辅助提取黑木耳多糖的研究[J].食品与发酵工业,2005,31(10):142-145

Extraction Technology on Crude Polysaccharides from Auricularia Auricula

WEI Hong1，WU Xiang-yang2,*，YANG Liu-qing3，ZHAO Ting3，LI Fang1，ZOU Ye2
（1.School of Food and Biological Engineering，Jiangsu University，Zhenjiang 212013，Jiangsu，China；2.School of Chemistry and Chemical Engineering，Jiangsu University，Zhenjiang 212013，Jiangsu，China；3.School of Pharmacy，Jiangsu University，Zhenjiang 212013，Jiangsu，China）

2009-07-29

魏红(1982—)，女（汉），硕士研究生，主要从事天然产物提取与功能食品开发。

*通讯作者：吴向阳（1965—），男（汉），教授，博士生导师，从事天然产物提取与功能食品开发。