尖锐湿疣局部皮损内的白介素2、白介素4、白介素10和白介素12水平的研究

应作霖 党宏 李晓杰 徐晓寅 程斌 王丰

尖锐湿疣(CA)是由人乳头瘤病毒(HPV)感染引起的一种性传播疾病。近年来我国尖锐湿疣的发病率呈明显上升趋势，而且治疗后复发率很高，成为性病临床工作中的一个重点和难点。一些研究表明CA的发生、消退、复发及癌变都与机体的免疫功能有关［1］。白介素2(IL-2)、白介素4(IL-4)、白介素10(IL-10)和白介素12(IL-12)等细胞因子与机体的免疫状况密切相关。为探讨疣体皮损局部的免疫状态在尖锐湿疣发病机制中的作用，我们对CA患者局部疣体组织内的IL-2、IL-4、IL-10和IL-12等细胞因子的水平进行了研究，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 病例资料 患者均来自我院皮肤性病科就诊的初发CA，根据2000年我国卫生部制定的尖锐湿疣诊断标准确诊。患者3个月内未接受免疫疗法及其他治疗，且排除自身免疫性疾病、严重系统性疾病和感染性疾病。共收集60例男性CA患者的典型皮损标本，年龄19～47岁，平均31.5岁;病期3 d～6个月，平均1.8月。所有CA患者均经治疗清除所有疣体皮损，随访观察共6个月，分为复发组和未复发组(16例患者的疣体经治疗完全消失后，在随访期间又在局部重新出现新发的疣体皮损者定为复发;44例未出现者定为未复发)。另取14例健康男性包皮环切术的包皮组织作为正常对照组。

1.2 实验步骤

1.2.1 标本制备 常规消毒局部皮肤，切取CA患者的部分疣体皮损，称重后用生理盐水冲洗3次，再以50 mg/ml比例加生理盐水，置于组织研磨器内研磨成匀浆后离心，取上清液分装，置-30℃冰箱内保存待测。

1.2.2 对组织标本内的IL-2、IL-4、IL-10和IL-12的水平进行检测。按照ELISA检测试剂盒说明书操作，使用双抗体夹心ELISA方法，将标准品倍比稀释，用酶标测定仪分别在波长450 nm处测定各孔的OD值，绘制标准曲线;测定各个实验标本的OD值，从中求出每个标本的各细胞因子的浓度水平。ELISA检测试剂盒由晶美生物工程有限公司提供。

1.3 统计学分析 应用SPSS 13.0统计软件包对实验结果进行统计处理。检测的计量资料用均数±标准差(±s)表示;使用方差分析和LSD检验等方法对实验数据进行统计分析。P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

我们对尖锐湿疣患者局部疣体组织内的细胞因子检测结果显示，CA患者的IL-2和IL-12的水平都明显低于正常对照组，而IL-4和IL-10水平都明显高于正常对照组，具有显著的统计学差异(P＜0.05)。复发组CA患者疣体组织内的IL-2和IL-12的水平都明显低于未复发组，而IL-4和IL-10水平都明显高于未复发组，在统计学上也有显著性差异(P＜0.05)，见表1。

表1 尖锐湿疣患者疣体组织内的IL-2、IL-4、IL-10和IL-12的检测结果± s，pg/ml)

表1 尖锐湿疣患者疣体组织内的IL-2、IL-4、IL-10和IL-12的检测结果± s，pg/ml)

组别 例数IL-2 IL-4 IL-10 IL-12 CA复发组16 1.93±0.48 3.62±0.91 4.89±1.23 1.16±0.34 CA未复发组 44 3.79±1.01 1.99±0.54 3.21±0.88 3.14±0.81正常对照组14 6.68±1.79 0.62±0.16 1.14±0.31 4.97±1.25

3 讨论

近年来的研究发现尖锐湿疣的发生、消退、复发及癌变与患者的免疫功能有关，尤其与细胞免疫功能下降有密切关系［2］。Th1 淋巴细胞分泌细胞因子 IL-2、IL-12、IFN-γ 和 TNF-α等，主要介导细胞免疫;而Th2淋巴细胞分泌细胞因子IL-4、IL-5、IL-6和IL-10等，主要介导体液免疫。IL-2属于Th1型细胞因子，可增强Th细胞的活性，刺激NK细胞生长，还可诱导NK细胞和淋巴因子激活的杀伤细胞的分化和效应功能，具有广泛的抗病毒活性。IL-12也属于Th1型细胞因子，可促进T细胞和NK细胞增殖，增强T细胞和NK细胞活性并诱导γ干扰素产生，而对IL-4的产生起抑制作用。IL-12诱导免疫反应朝Th1型方向发展，并刺激Th1细胞的发育和增殖，从而在细胞免疫中发挥重要作用。IL-4属于Th2型细胞因子，可刺激活化B细胞和T细胞增殖，在调节体液免疫中起重要作用;另外其可抑制Th1细胞活化及分泌细胞因子。IL-10也是由Th2细胞分泌，可促进体液免疫，抑制细胞免疫，能抑制Th1细胞产生IL-2和IFN-γ而达到调节作用［3］。目前对CA患者全身性免疫功能的研究较多，国内外对CA患者血液中的Th1和Th2淋巴细胞的研究发现在免疫应答过程中Th1型细胞因子水平降低，而Th2型细胞因子水平升高，存在Thl和Th2分泌细胞因子交互作用失衡的现象［4］，表明CA患者的全身性细胞免疫功能下降。

尖锐湿疣是好发于生殖器及肛门附近皮肤黏膜处的HPV病毒感染性疾病，其复发也主要局限于原发损害附近的皮肤黏膜。除患者全身免疫功能外，CA患者疣体皮损处的局部免疫状态对其病程及预后也起着重要影响。王岚等［5］证实CA局部淋巴细胞不仅比例失调，而且淋巴细胞和单核细胞功能受抑制或降低，不能有效地杀伤靶细胞，从而使HPV病毒得以生长繁殖。为了进一步探讨CA的发病机制，我们对CA患者局部疣体组织内的IL-2、IL-4、IL-10和IL-12水平进行了检测，结果发现CA患者的Th1型细胞因子IL-2和IL-12的水平都明显低于正常对照组，而Th2型细胞因子IL-4和IL-10水平都明显高于正常对照组，表明CA患者皮损局部的细胞免疫功能下降，这可能是导致CA发生及复发的重要原因。研究还发现CA复发组的IL-2和IL-12的水平低于未复发组，而IL-4和IL-10的水平高于未复发组。与未复发组相比，CA复发组表现为Th1型免疫反应更弱，而Th2型免疫反应更强，提示CA患者局部皮损组织内的IL-2和IL-12的水平增加可能减少CA的复发。总之，CA患者Th1型细胞因子水平降低，而Th2型细胞因子水平升高，说明CA患者存在Th1与Th2型细胞因子平衡失调而向Th2方向漂移，并由此导致一系列的细胞免疫功能的抑制，对病毒清除及抵抗力下降，使HPV病毒发生免疫逃逸，这可能与尖锐湿疣的发病机制有关［6］。

［1］Kobayashi A，Miaslowski C，Wallhagen M，et al.Recent development in understanding the immune response to human papillomavirus infection and cervical neoplasia.Oncol Nurs Forum，2000，27:643-651.

［2］Ahmed AM，Madkan V，Tyring SK.Human papillomaviruses and genital disease.Dermatol Clin，2006，24:157-165.

［3］Romagnani S.Regulation of the T cell response.Clin Exp Allergy，2006，36:1357-1366.

［4］朱宁，程浩.Th1/Th2与尖锐湿疣关系的研究进展.浙江医学，2007，10:1137-1140.

［5］王岚，陈映玲，周礼义.尖锐湿疣患者肿瘤坏死因子α、白介素6和白介素8水平的研究.中华皮肤科杂志，1998，4:239-240.

［6］李莉，周再高，曾抗，等.尖锐湿疣患者外周血Th1/Th2淋巴细胞比的改变.第一军医大学学报，2003，23:737-739.