ELISA法与TRUST法、胶体金法检测梅毒抗体的临床应用和方法学评价

吴丽婷，陈立刚，林 哲

(海南省人民医院医学检验部，海南 海口 570133)

梅毒是由苍白密螺旋体(TP)感染所致的一种慢性全身性传播疾病，其可通过性接触、母婴垂直传播、输血、注射等途径传播，严重危害人类健康。TP一旦侵入人体内，血清中可产生非特异性抗体(反应素)和梅毒特异性抗体，因此，血清学检测是诊断梅毒的重要依据之一，它在梅毒的诊断、治疗方面有重要意义。目前，在临床实验室用于诊断TP感染的血清学方法有快速血浆反应素试验(RPR)、TRUST、胶体金法、ELISA、TPPA、聚合酶链反应(PCR)、蛋白印迹法和荧光密螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)等。不同的检测方法都有其特殊的临床应用价值，选择有效的方法对梅毒的早期诊断、预防和控制梅毒的传播、避免因错误的检测结果引起不必要的医疗纠纷有着重要的意义。TPPA法是美国疾病预防控制中心2002年推荐的梅毒确证试验，也是我国实验室近年来临床常用的梅毒确诊试验[1]，但由于其步骤繁琐、试剂昂贵、操作和结果判断难以自动化，不适合在临床工作中用于大批量筛查。本文就我院检验科最常用的TRUST法、胶体金法、ELISA法做以下方法学评价。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2010年2月至6月皮肤科患者标本240例，随机抽取2010年5月病房做输血四项的患者标本100例，年龄在19-82岁。其中一期梅毒有24例，二期梅毒有26例，三期梅毒8例，其诊断均符合临床梅毒诊断分期标准。不明期梅毒有21例，其他161例非梅毒患者标本不排除为孕产妇和其他疾病。

1.2 仪器和试剂 TRUST试剂、胶体金试剂均为英科新创公司产品，批号分别是2010017601和2010020907；ELISA试剂为上海科华公司产品，批号是201003011；TPPA试剂为日本富士瑞必欧株式会社公司产品，批号是VN00303。主要仪器有芬兰MK3酶标仪，深圳汇松PW-960全自动酶标洗板机。

1.3 检测方法 所有受试者均空腹抽血5 ml，4000 r/min离心5 min后分离血清，血清标本不能及时检测则置于4℃冰箱，避免反复冻融，均采用TRUST法、ELISA法、胶体金法与TPPA法对所选择标本按各种方法试剂盒说明进行检测。前三种方法所得检测结果均与TPPA法进行比较。

1.4 统计学处理 每种方法与TPPA法检测结果之间采用χ2检验进行显著性差异比较，均以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三种血清学方法对各期梅毒标本的检测结果比较 三种血清学方法对各期梅毒标本的检出率见表1，可见ELISA法在各期梅毒中的检出率都比较高，与TPPA法有较高的一致性。

2.2 三种血清学方法检测结果的评价 三种血清学方法敏感度、特异度及与TPPA法的比较见表2。

表1 三种方法对不同血清标本的检测结果(例)

表2 三种血清学方法检测结果的评价（例）

3 讨论

TP侵入人体后，人体可产生两种抗体:一种是抗心磷脂的非特异性抗体(即反应素)，一种是抗菌体的特异性抗体。非特异性抗体不是机体针对菌体本身所起的反应，而是针对菌体破坏患者组织后释放的类脂产生的反应，故其检出时间要比检出机体对菌体产生的特异性抗体迟两周，并且在一期梅毒早期、晚期梅毒、潜伏期梅毒及梅毒治疗后其检出率降低甚至可呈阴性，所以，用检测非特异性抗体来对梅毒进行诊断，会有比特异性抗体更长的窗口期和更多的假阴性。而针对菌体的特异性抗体出现早、消失迟，甚至梅毒治愈后还可终生存在[2]的特点，我们认为特异性抗体是诊断TP感染的依据。目前，临床上常用来检测非特异性抗体的试验有RPR和TRUST，这两种试验所用的抗原均为心磷脂类。这类试验虽操作简便、结果易读、检测迅速、试剂成本设备要求低，但由于该试验方法的局限性、结果易受主观因素影响、灵敏度和特异性较差、很多时候易受某些传染病或自身免疫性疾病的影响，常出现生物学假阳性，主要常见于怀孕、红斑狼疮、类风湿性关节炎等。所以，即使非特异性抗体阳性结果也只能提示所测标本中有抗类脂抗体的存在，而不能作为患者感染TP的依据。但由于非特异性抗体是TP破坏患者组织后释放的物质刺激机体产生的，TP在人体的活动程度基本上与此抗体的滴度成正比，所以非特异性抗体是梅毒经诊断后，疗效观察和复发的判断指标[3]，即当血清滴度升高时，可表示最近感染或复发；当滴度降低时，可表示梅毒得到适当的治疗。

临床上常用以检测特异性抗体的试验有胶体金、ELISA、TPPA试验，胶体金法是一种应用现代生物工程技术制备的高度纯化单克隆TP的基因工程抗原，快速检测特异性抗体的诊断技术，具有快速(5-10 min)、操作简便、准确的特点，而且，价格实惠、不需要特殊设备、结果易判读，但胶体金法存在一定的假阴性，在梅毒潜伏期时容易漏诊，所以只能作为一般的筛检试验，主要用于术前和急诊筛查。ELISA法是利用重组TP的特异性抗原包被酶标板孔，采用双抗原夹心法原理检测血清中的特异性抗体，对各期梅毒的检出率较高，其特异度和灵敏度与TPPA非常接近，具有操作简便、可自动化、标准化的优点，并且能大批量同时检测。ELISA法可通过酶标仪读取数据，克服了肉眼判读的主观性缺点，为临床工作中的首选方法，但ELISA结果阳性只能说明正在或曾经感染过梅毒，而不能判断梅毒的活动情况，故不能用于疗效观察、梅毒复发或再感染的诊断。有相关报道指出梅毒ELISA“一步法钩状效应”的影响[4]，即当标本中的梅毒抗体浓度过高或过低时，会因“钩状”现象出现假阴性或弱阳性而漏检，必要时一些可疑的标本可同时进行多种方法测定。

梅毒的以上试验方法虽各有利弊，但在临床工作中不能舍弃任何一种方法，本人认为，用胶体金对梅毒进行术前或急诊筛选、ELISA法可替代TPPA法用于对梅毒进行确诊和大批量标本的筛查，并用ELISA结合TRUST进行疗效判断是较理想的组合方法。

[1]程艳杰,王广杰,王 旭,等.梅毒螺旋体血清学检测方法的实验室评价[J].中国皮肤性病学杂志,2005,19(8):503-504.

[2]季 阳.输血相关梅毒的检测[M]//王培华.输血技术学.2版.北京:人民卫生出版社,2002:113-116.

[3]吴 薇.试析TPHA与TRUST在梅毒血清学诊断中的应用[J].中国卫生检验杂志,2003,13(2):239.

[4]张京豫,谭爱国,郭 健.TP-ELISA一步法检测梅毒螺旋体抗体钩状现象研究[J].中国实验诊断学,2007,11(11):1520-1523.