高效液相色谱法快速分离测定4种青霉素类药物

关翠林，樊月琴

(山西大同大学化学与化工学院，山西大同 037009）

高效液相色谱法快速分离测定4种青霉素类药物

关翠林，樊月琴

(山西大同大学化学与化工学院，山西大同 037009）

利用高效液相色谱法分离氨苄西林钠、美洛西林钠、青霉素V钾、氯唑西林钠4种青霉素类药物.色谱柱为Shim-pack VP-ODS柱(150mm×4.6mm，4.6μm)，流动相为0.02mol/L的磷酸二氢钾溶液-甲醇(体积比为50：50),流速为1 mL/min，检测波长208 nm，柱温40℃.在该色谱条件下，氨苄西林钠、美洛西林钠、青霉素V钾、氯唑西林钠能得到完全分离，线性关系良好 (r＞0.9944),用于4种青霉素含量的测定，回收率均在97.5%～100.7%之间,方法准确、灵敏，适用于青霉素类药物的质量控制和含量测定.

高效液相色谱法 氨苄西林钠 美洛西林钠 青霉素V钾 氯唑西林钠

青霉素类药物是一种重要的抗生素，20世纪40年代初，开始用于临床.经过半个多世纪的发展，合成出了性能更加优良的耐酸耐酶青霉素(如氯唑西林钠)和广普长效青霉素(如青霉素V钾、氨苄西林钠和美洛西林钠)等，这些青霉素类药物在临床上应用非常广泛[1].

2000年版中国药典二部[2]中对青霉素类药物含量测定采用分光光度法或电位滴定法.分光光度法操作烦琐，显色不稳定，易产生误差.电位滴定法影响因素多，重现性差.目前高效液相色谱法已被广泛用于青霉素类药物的测定[3-8]，本文研究了高效液相色谱-紫外检测法分离氯唑西林钠、青霉素V钾、氨苄西林钠和美洛西林钠四种青霉素类药物的条件，并将建立的方法用于四种青霉素药物制剂含量的测定，发现该方法快速、准确、灵敏，适用于青霉素类药物的质量控制和含量测定.

1 实验部分

1.1 仪器和试剂

日本岛津(SHINADZU)LC-10A高效液相色谱仪系统：DGU-14A在线脱气机，LG-10AT四元梯度泵，CTO-10A柱温箱，SPD-M10A二极管阵列检测器，CLASS-VP色谱工作站，Milli-Q纯水器(Millipore公司)；HANGPING FA2004电子天平 (上海天平仪器厂).

甲醇为色谱纯；氨苄西林钠、美洛西林钠、青霉素V钾、氯唑西林钠标准品均购于北京中生生物工程高科技公司；氨苄西林钠、美洛西林钠、氯唑西林钠粉针剂和青霉素V钾片样品均购于山西威奇达药业有限公司；配制试剂用水均为Milli-Q纯水器处理的超纯水.

1.2 色谱条件

色谱柱：Shim-pack VP-ODS柱 (150 mm×4.6 mm，4.6μm)；流动相：0.02mol/L的磷酸二氢钾溶液-甲醇(体积比为50：50)；流速：1.0mL/min；进样量：20μL；检测温度：40℃；检测波长：208 nm.

1.3 实验方法

1.3.1 应用试剂的配制

流动相的配制：称取适量的磷酸二氢钾固体，加超纯水分别制成浓度为 0.005、0.015、0.025、0.01、0.02 mol/L的磷酸二氢钾溶液，再用0.45μm微孔过滤膜过滤.

1.3.2 标准储备液的配制

称取氨苄西林钠、美洛西林钠、青霉素V钾、氯唑西林钠标准品各0.1 g，用流动相配制成浓度为1 mg/mL的标准溶液；取上述标准溶液各50μL，分别置于50 mL的容量瓶中，用流动相稀释至刻度线，配成浓度为1μg/mL的标准储备液.测定时取上述标准储备液配制成适宜浓度的标准溶液.

1.3.3 样品溶液的配制

称取氨苄西林钠、美洛西林钠、氯唑西林钠粉针剂和青霉素V钾片粉末各50 mg，用流动相溶解并定容于50 mL的容量瓶中，配成浓度为1 mg/mL的样品溶液，用0.45μm微孔过滤膜过滤.测定时取上述浓度的溶液配置成适宜浓度的样品溶液.

2 结果与讨论

2.1 分离条件的选择与优化

2.1.1 检测波长的选择

取20μL的1μg/mL标准混合溶液进样，结果显示：在208 nm处，氨苄西林钠、美洛西林钠、青霉素V钾和氯唑西林钠均有较灵敏的响应，且干扰小、分离佳，便于检测，因此选择208 nm作为检测波长.

2.1.2 流动相的选择

以不同体积比的0.02 mol/L磷酸二氢钾-甲醇为流动相，以混合标准溶液进样分析.当甲醇的比例为50%时，在12 min内各组分能得到较好的分离，且分析时间较短，故选择0.02mol/L磷酸二氢钾-甲醇(50：50)为流动相.

2.2 精密度试验

在1.2色谱条件下，用浓度为1μg/mL标准混合溶液日间连续进样11次，氨苄西林钠、美洛西林钠、青霉素V钾、氯唑西林钠的RSD分别为0.54%、1.02%、0.48%和0.37%.

2.3 方法的线性关系与检出限

取适宜浓度的标准储备液，用流动相稀释并定容于10 mL比色管中，配制浓度分别为0.05、0.10、0.50、1.00、2.00、5.00μg/mL等6个水平青霉素的标准混合溶液.每个溶液分别进样3次，以峰面积对浓度作工作曲线，用稀释法测定四种青霉素药物的检出限.其线性范围、线性回归方程、相关系数、检出限列于表1，其中X表示青霉素的质量浓度，Y表示青霉素的峰面积.

表1 四种青霉素的回归分析结果及线性范

表2 回收率试验(n=3)

2.4 加标回收试验

分别移取50μL 1.3.3样品滤液各三份，分别置于50mL的容量瓶中，再分别加入25mL的1.00 μg/mL、50μL的1 mg/mL和100μL的1 mg/mL的氯唑西林钠、青霉素V钾、氨苄西林钠、美洛西林钠标准溶液，用流动相稀释至刻度.在1.2色谱条件下进样，做加标回收试验，结果见表2.

2.5 实际样品的测定

对1.3.3样品滤液在上述色谱条件下操作，用外标法以峰面积计算氨苄西林钠、美洛西林钠、氯唑西林钠和青霉素V钾的含量，结果见表3.

表3 样品测定结果(n=3)

图1至图5分别为青霉素类药物标准混合溶液和样品色谱图.

图1 四种青霉素标准混合溶液色谱图

图2 氯唑西林钠样品色谱图(*)

图3 青霉素V钾样品色谱图(*)

图4 氨苄西林钠样品色谱图(*)

图5 美洛西林钠样品色谱图(*)

3 结语

目前，高效液相色谱-紫外检测法已被广泛用于各种青霉素类药物的测定.它具有灵敏度高、选择性好、分析时间短、样品用量少和易实现自动化等优点，已在医药、食品等领域得到广泛的应用，但同时分离氨苄西林钠、美洛西林钠、青霉素V钾、氯唑西林钠四种青霉素类药物含量还未见报道.该方法无需衍生化，且快速、准确、灵敏度高，适用于青霉素类药物的质量控制和含量测定.

[1]李安良.药物化学[M].北京：高等教育出版社，1999：571.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[S].北京:北京化学工业出版社，2000：353-354.

[3]LuoW H，Ang C YW，Deck J.Simultaneous determination of Amoxicillin and Ampicillin in bovinemilk by HPLCwith Fluorescence detection[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry,1997，45：1264-1268.

[4]Shakoor O，Taylor R B.Analysis of Ampicillin，Cloxacillin and their related substances in capsules，syrups and suspensions by HPLC[J].The Analyst，1996,121(10)：1473-1477.

[5]王超，王星.柱前衍生高效液相色谱法测定猪肉中5种青霉素残留量[J].分析化学研究简报，2001，29(7)：779-781.

[6]林萍，陈研.高效液相色谱法替代电位滴定法测定青霉素钠含量[J].黑龙江医药，2004，17(4)：256-257.

[7]曾令高.高效液相色谱法测定氯唑西林钠的含量及其有关物质[J].药物分析杂志，2004，24(4)：406-407.

[8]王超，李淑娟.测定牛奶中五种青霉素残留量的高效液相色谱柱前衍生法[J].分析测试学报，2000，19(6)：72-74.

Rapid Separation and Determ ination of Four Penicillins by HPLC

GUAN Cui-lin，FAN Yue-qin
(School of Chemistry and Chemical Engineering，ShanxiDatong University，Datong Shanxi，037009)

A high performance liquid chromatographic method，coupled with ultraviolet detection(HPLC-UV)，was developed for the determination of Ampicillin Sodium，Mezlocilin Sodium，Phenoxymethylpenicillin Potassium and Cloxacillin Sodium.It employed a Shim-pack VP-ODS column(150mm×4.6mm，4.6μm)and amobile phase of 50 volumes of potassium dihydrogen phosphate and 50 volumes ofmethanol at a flow rate of 1.0mL/min.The detection wavelength was set at 208 nm；The temperature of column was 40℃.At this condition Ampicillin Sodium，Mezlocilin Sodium，Phenoxymethylpenicillin Potassium and Cloxacillin Sodium could be completely separated.The proposed method was used for the content determinioation of four penicillins preparation，the recovery was in the range 97.5%～100.7%.The proposed HPLCmethod is convenient，accurate.

high performance liquid chromatographic method (HPLC)；Ampicillin Sodium；Mezlocilin Sodium；Phenoxymethylpenicillin Potassium；Cloxacillin Sodium

O652.63

A

〔编辑杨德兵〕

1674-0874(2010)02-0038-03

2009-12-25

山西大同大学科研项目[2008K6]

关翠林(1968-)，女，山西阳高人,硕士，副教授，研究方向:液相色谱的应用.