抑制植物病原细菌的植物筛选＊

袁高庆， 黎起秦， 王 静， 曾东强， 吴定朴，杨 龙， 秦 健， 曹祖恒， 黎 桦

（广西大学农学院，南宁 530004）

抑制植物病原细菌的植物筛选＊

袁高庆， 黎起秦＊＊， 王 静， 曾东强， 吴定朴，杨 龙， 秦 健， 曹祖恒， 黎 桦

（广西大学农学院，南宁 530004）

以3种重要的植物病原细菌—辣椒青枯病菌（Ralstoniasolanacearum）、柑橘溃疡病菌（Xanthomonascitri）和大白菜软腐病菌（Erwiniacarotovorapv.carotovora）为供试菌，对43种植物甲醇提取物进行离体抑菌活性测定。研究结果表明，漆树对辣椒青枯病菌抑菌活性最强，其次是金秀清明茶；抑制柑橘溃疡病菌活性最高的植物有漆树和十大功劳；对大白菜软腐病菌没有筛选到抑菌活性较好的植物；垫状卷柏、七叶一枝花、少花龙葵、水半夏和豆瓣菜粗提物对3种植物病原细菌均无抑制作用。

植物粗提物； 植物病原细菌； 抑菌活性

＊ 致 谢： 广西大学农学院林纬老师为试验提供了许多帮助，在此表示诚挚感谢。

＊＊ 通信作者Tel：0771-3235674；E-mail：qqli5806＠gxu.edu.cn

随着农药的发展方向从传统的有机化学物质转向环境和谐农药，从高毒、高残留、长持久性的合成化学农药转向高安全性、低残留、无公害、高生物活性、高选择性的生物农药，植物被认为是化学合成杀菌剂替代品最好的资源。但目前以植物病原细菌作为筛选靶标的生物农药的研究较少。辣椒青枯病菌［Ralstoniasolanacearum（Smith）Yabuuchi et al.］、柑橘溃疡病菌［Xanthomonascitri（ex Hasse）Gabriel］和大白菜软腐病菌（Erwiniacarotovorapv.carotovoraDye）是3种常见的植物病原细菌，尤其在热带、亚热带地区发生普遍，对农业生产的危害性较大。本文采集了广西的43种植物，测定其对这3种植物病原细菌的抑菌作用，以期筛选到抑菌效果明显的植物，为深入分离和纯化抑菌活性成分提供材料，同时也为进一步开发应用植物资源提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

供试植物分别采自广西的5个县、市（见表1），由广西大学农学院黎桦副教授鉴定。供试细菌辣椒青枯病菌（R.solanacearum）、柑橘溃疡病菌（X.citri）和大白菜软腐病菌（E.carotovorapv.carotovora）由广西大学植物病理研究室提供。植物病原细菌分别在牛肉膏蛋白胨（nutrient agar，简称NA）固体培养基上画线活化培养24～48h，然后转入NA培养液中进行悬浮培养（28℃，130r／min）24h，将其稀释成浓度为109cfu／mL的细菌悬浮液，备用。

1.2 植物化学成分粗提物的制备

将采集的植物材料阴干后于50℃下烘24～48h，粉碎，过40～60目筛。每种植物干粉称取100～150g，在室温下以样品量的6～8倍甲醇（AR）（V／m）浸泡72～96h，期间定时搅拌。然后真空抽滤获得滤液，用旋转蒸发仪在45～50℃水浴中减压浓缩，获得膏状植物粗提物，计算提取率［1］。植物粗提物密封放置于4℃冰箱保存。测定抑菌作用时，将植物粗提物用甲醇溶解后，加4倍体积的灭菌蒸馏水配成300mg／mL的药液备用（甲醇最终浓度为20%）。提取率＝（粗提物干质量／样品干粉质量）×100%。

1.3 植物粗提物对3种植物病原细菌的抑制作用测定

采取琼脂打孔药剂扩散法测定植物粗提物对3种植物病原细菌的抑制作用［2］。在培养皿中倒入水琼脂（WA，琼脂含量3%）15mL使之成一薄层，凝固后，倒入25mL温度为50～60℃含有107cfu／mL测试细菌的NA培养基，培养基凝固后，用5mm的打孔器打孔（不可穿过水琼脂层），每孔加70μL植物粗提物药液，以浓度0.2mg／mL的链霉素作阳性对照和20%甲醇作溶剂对照，每种处理3次重复，置于28℃的培养箱中恒温培养48h。十字交叉法测量抑菌圈的直径（减去孔径5mm），取平均值。

1.4 数据统计分析

数据的统计分析采用Microsoft Excel 2003和DPS数据处理系统（v6.55版）进行。

2 结果与分析

采集的44份植物材料（分属32科43种）中，针对辣椒青枯病菌，漆树、金秀清明茶、猪笼草粗提物抑菌效果好，抑菌圈直径分别为28.00、21.00mm和14.67mm，与0.2mg／mL的医用链霉素阳性对照（抑菌圈直径12.33mm）相比，差异显著。其中，漆树粗提物抑菌效果最好。另外，杨梅、绞股蓝、粗叶悬钩子、白背叶、破布叶、香花崖豆藤、磨盘草、蜈蚣草、小果蔷薇（根部）、蛇泡筋等植物粗提物对辣椒青枯病菌的抑菌效果与0.2mg／mL的医用链霉素相当，差异不显著。垫状卷柏、七叶一枝花、少花龙葵、水半夏和豆瓣菜粗提物对辣椒青枯病菌离体无抑制作用；针对柑橘溃疡病菌，漆树和十大功劳的抑菌效果最好，优于医用链霉素阳性对照。杨梅、粗叶悬钩子、白背叶、草麻黄、金线兰、猪笼草、金秀清明茶、广州相思子和广西鸡矢藤也有较好的抑菌活性。垫状卷柏、少花龙葵、豆瓣菜、水半夏 、山芝麻、绞股蓝、藿香、五棱苦丁茶和七叶一枝花等9种植物对柑橘溃疡病菌离体均无抑制作用；供试的43种药用植物中，只有杨梅、猪笼草、细辛、羊耳菊、白背叶、郁金、何首乌、吴茱萸、灵香草、余甘子和广西鸡矢藤等13植物的粗提物对大白菜软腐病菌有较弱的抑菌活性。其中，杨梅的抑菌圈直径最大，但 也 仅为5.67mm，远低于0.2mg／mL的医用链霉素阳性对照，差异显著。其余30种植物粗提物对大白菜软腐病菌离体均无抑制作用。从试验中还观察到20%的甲醇对3种植物病原细菌的生长均无影响（见表1）。

3 结论与讨论

在含植物粗提物干物质300mg／mL的测定浓度下，供试的43种植物中，漆树对辣椒青枯病菌和柑橘溃疡病菌均有最强的抑菌作用；杨梅、粗叶悬钩子、白背叶、猪笼草和金秀清明茶对这两种病菌也有较强的抑菌作用；绞股蓝、十大功劳、破布叶、香花崖豆藤、磨盘草、蜈蚣草、小果蔷薇（根部）、蛇泡筋、草麻黄、金线兰、广州相思子和广西鸡矢藤等植物对其中1种植物病原细菌抑菌效果明显；没有筛选到对大白菜软腐病菌抑菌效果明显的植物。垫状卷柏、七叶一枝花、少花龙葵、水半夏和豆瓣菜粗提物对3种植物病原细菌均无抑制作用。

植物提取物对植物病原细菌抑菌活性的研究相对较少。据报道，苦瓜种仁中的凝集素备提物和苦瓜籽粗蛋白对大白菜软腐病菌、花生青枯病菌均无抑菌活性［3］；紫草、荔枝对水稻白叶枯病菌、白菜软腐病菌、十字花科蔬菜黑腐病菌、茄科青枯病菌均具抑菌活性［4－5］；苦参中的生物碱具有较广谱的杀菌活性，除抑制多种植物病原真菌外，对十字花科蔬菜软腐病菌、茄科蔬菜青枯病菌的抑制作用也很明显［6］。Pradhanang等在4种植物精油对大棚番茄青枯病的防治研究中发现，经百里酚、玫瑰草油和柠檬草油处理的土壤中，Ralstoniasolanacearum种群数量很快下降至无法检测，植株不发病，但茶树油没有作用［7］。由此可见，不同的植物材料抑菌活性不同。

表1 植物粗提物对3种植物病原细菌离体抑菌活性测定结果

在供试的43种植物材料中，对辣椒青枯病菌和柑橘溃疡病菌，分别有13种和11种植物提取物具有较好的抑菌活性；对大白菜软腐病菌，有13种植物提取物具有较弱的抑菌活性。这说明不同植物病原细菌种类对植物提取物的敏感性差别很大。目前，对辣椒青枯病菌和柑橘溃疡病菌具有较强抑菌活性的漆树、杨梅、粗叶悬钩子、白背叶和猪笼草提取物中的活性物质正在研究中。

［1］陈业高.植物化学成分［M］.北京：化学工业出版社，2004.

［2］杜华，周立刚，唐静，等.无叶假木贼和盐爪爪提取物的抗菌活性［J］.天然产物研究与开发，2007，19：92-96

［3］王贻莲，陈燕平，黄伟，等.苦瓜活性组分物质抑菌活性测定［J］.植物保护，2008，34（2）：67-71.

［4］侯美珍，宋德贵，杨真，等.紫草不同溶剂提取物对植物病原菌的抑菌作用［J］.广西师范大学学报（自然科学版），2006，24（3）：95-98.

［5］侯美珍，卢习刚，韦红群，等.荔枝果皮和果核提取物对植物病原菌的抑菌作用［J］.广西植保，2006，19（6）：2-4.

［6］李楠，韦平英，梁英，等.生物碱对几种植物病原菌的抑制作用研究初报［J］.广西植保，2003，16（2）：1-2.

［7］Pradhanang P M，Momol M T，Olson S M，et al.Effects of plant essential oils onRalstoniasolanacearumpopulation density and bacterial wilt incidence in tomato［J］.Plant Disease，2003，87（4）：423-427.

Screening of plants for antimicrobial activity to phytopathogenic bacteria

Yuan Gaoqing， Li Qiqin， Wang Jing， Zeng Dongqiang， Wu Dingpu，
Yang Long， Qin Jian， Cao Zuheng， Li Hua
（CollegeofAgriculture，GuangxiUniversity，Nanning530004，China）

The extracts of 43 plants were tested for inhibiting the growth ofRalstoniasolanacearum，XanthomonascitriandPectobacteriumcarotovorapv.carotovorainvitro.The extract ofToxicodendronsp.had the highest antimicrobial activity againstR.solanacearum，followed byCamelliasp.，Toxicodendronsp.andMahoniafortunei，which showed strongest inhibitory effects againstX.citri.However，none of the plant extracts had significant inhibition toPectobacteriumcarotovorapv.carotovora.Selaginellapulvinata，Parispolyphylla，Solanumphoteinocarpum，PinelliaternateandNasturtiumofficinaleshowed no inhibitory activity against the 3 phytopathogenic bacteria.

botanical extract； phytopathogenic bacteria； antimicrobial activity

Q 946.91；S 482.2

B

10.3969／j.issn.0529-1542.2010.04.045

2009-06-30

2009-07-17

广西自然科学基金（桂科基0342002-1）；研究生科研创新项目（2008105930904D007）；国家大学生创新性实验计划（081059302）

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