二盐酸奎宁注射液质量标准的研究

赵新静 周慧 冯凯

二盐酸奎宁注射液是6’-甲氧基-(8α，9R)-辛可宁-9-醇的二盐酸盐的灭菌水溶液。奎宁是喹啉类衍生物，能与疟原虫的DNA结合，形成复合物，抑制DNA的复制和RNA的转录，从而抑制原虫的蛋白合成，作用较氯喹为弱。另外，奎宁能降低疟原虫氧耗量，抑制疟原虫内的磷酸化酶而干扰其糖代谢，故临床用于抗疟药［1］。目前药典标准测定其含量的方法为氯仿提取蒸干后再非水滴定法［2］，但其操作步骤复杂，耗时过长，不利于对大批样品的测定，且无有关物资测定方法，本实验的HPLC法可以有效缩短实验时间，并能准确测定二盐酸奎宁注射液的含量和有关物资。

1 仪器与试药

戴安P680高效液相色谱仪，四元梯度泵;UVD170 U检测器;chromeleon色谱工作站;UV-1800spc型紫外可见分光光度计;BS21S型精密电子天平;20 μl标准进样器。二盐酸奎宁对照品:由二盐酸奎宁原料精制，含量99.87%;二盐酸奎宁注射液:规格 300 mg/ml，批号 081201、081202、081205。甲醇、乙腈为色谱纯，其余为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:KromasilC18，(5 μm ，250 mm×4.6 mm)。流动相:甲醇-乙腈-水(150:100:750)［1000 ml溶液，加三乙胺3 ml，用磷酸调pH至2.5，摇匀］，流速为1.00 ml/min ，进样 20 μl，检测波长 250 nm，外标法测定。

2.2 含量测定

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取二盐酸奎宁对照品0.03023 g，置100 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取10 ml置100 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 精密量取供试品1 ml注射液，置100 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，再精密量取10 ml置100 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 阴性对照试验 按处方配比，制备不含二盐酸奎宁样品溶液，进样20 μl，结果表明其他成分对二盐酸奎宁的测定无干扰。

2.2.4 线性关系 分别精密量取2.2.1项下对照品溶液5、10、15、20、25 ml，置 100 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，进样20 μl，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积对浓度(μg/ml)作回归处理，得一次回归方程:

在2～50 μg/ml范围内线性关系良好。

2.2.5 精密度实验 按上述色谱条件，配制30.3 μg/ml对照品溶液20 μl，重复进样6次，记录对照品峰面积积分值，RSD为0.10%

2.2.6 稳定性试验 取2.2.2项下样品溶液，分别与0、2、4、8、12 h进样，按上述色谱条件分别测得峰面积，结果峰面积的RSD为0.66%，表明供试品溶液稳定。

2.2.7 回收率试验 精密量取不含二盐酸奎宁的空白溶液2 ml 9份，精密称取对照品适量共9份(相当于待测溶液的80%、100%、120%的量各三分)加入空白溶液中，按供试品溶液的制备方法制备，取20 μl进样，计算回收率，结果见表1。

表1 回收率试验(mg，%)

2.2.8 二盐酸奎宁注射液含量测定 分别取2.2.1、2.2.2项下的对照品与供试品溶液，按上述色谱条件测定了3批样品，同时按药典标准测定其含量，结果见表2。

表2 含量测定

2.3 有关物资检查

2.3.1 供试品溶液的制备 精密量取二盐酸奎宁注射液2 ml，置100 ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取5 ml置于50 ml容量瓶中加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3.2 破坏实验 精密量取二盐酸奎宁注射液2 ml，置100 ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取5 ml置于50 ml容量瓶中分别加入6 mol/L的氢氧化钠溶液，6 mol/L的盐酸溶液，3%的过氧化氢溶液5 ml。置水浴上加热2 h，放冷后，分别用酸、碱中和加流动相稀释至刻度，过滤，分别取20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。

光破坏实验精密量取二盐酸奎宁注射液2 ml，置100 ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，从中精密量取5 ml置于50 ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，将容量瓶置4500LX光照下10 h后，取20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图，结果本法能有效的将杂质与主峰分离。

2.3.3 检测限 将二盐酸奎宁注射液用流动相稀释至含二盐酸奎宁0.2 μg/ml时，测得样品的响应值为噪音信号的3倍高，故本法的检测灵敏度为0.2 μg/ml。

2.3.4 样品中的有关物质测定 取供试溶液20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图，记录时间应为主成分色谱峰保留时间的二倍，并用面积归一化法处理见表3。

表3 二盐酸奎宁注射液有关物质检测结果(%)

3 讨论

3.1 紫外检测波长 曾以水为空白，测定对照品溶液的最大吸收，但在此波长下，峰面积出现较大波动，后改用流动相为空白，并用流动相配制对照品液，得到的最大吸收下峰面积稳定。

3.2 流动相组成 为了得到较好的分离度、峰型，分别醇-水(60:40)、甲醇-乙腈-水(20:10:70)，甲醇-乙腈-水(15:10:75)(按比例配制成1000 ml溶液，加三乙胺3 ml，用磷酸调pH至2.5，摇匀)，结果表明，本试验的流动相组成得到的图谱最佳。

3.3 HPLC法和非水滴定法的结果基本相同，但HPLC法步骤少，用时短，同时也具有良好的线性关系、精密度和稳定性，表明HPLC法可以作为非水滴定法的替代方法对二盐酸奎宁注射液进行行量测定。

3.4 专属性考察 二盐酸奎宁对光较稳定，破坏后，杂质峰面积无明显增加;碱酸性条件下，主峰面积变化不大，但在保留时间约为3 min处出现一个较大的未知杂质峰;氧化条件下主峰面积有较大变化，且产生降解物质较多;二盐酸奎宁经酸、碱、氧化、光照等破坏，所产生的杂质峰与主成分峰均能达到有效分离，表明方法的专属强。

［1］李端，殷明．药理学．人民卫生出版社，2008:466．

［2］国家药典委员会．中华人民共和国药典二部．化学工业出版社，2005:11．