优化手工制备浓缩血小板方法的应用

袁小玲，李文斌，熊春梅，刘云华，白红英，杨卫红

(宜春市中心血站，江西 宜春 336000)

对血小板减少引起的出血，输注血小扳是特异性治疗方法。随着骨髓移植、外周造血干细胞移植、抗肿瘤治疗以及免疫抑制剂等治疗方法的应用，血小板输注逐年增加[1]。近年来，血小板的制备方法有手工法和机采法两种，随着血细胞分离机的推广应用，机采血小板的用量明显大于手工分离浓缩血小板。机采血小板具有采集时间长(50～90min)、成本高、献血者招募困难等缺点。而手工浓缩血小板具有资源丰富、成本低廉等优点，在欧美国家，手工血小板的临床使用占所有血小板种类的40～50%[2]，如何有效提高手工分离血小板的质量是血站人不断努力探索的内容。我站自2008年3月至今制备浓缩血小板在传统法的基础上进行了改良，采用浓缩血小板改良方法，制备的血小板其质量符合《全血及成分血质量要求》(GB18469-2001)，临床应用取得良好的治疗效果，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 血液来源 血液来自本站无偿献血者，符合《献血者健康检查标准》，血小板计数大于150×109/L，每次献血量为400ml，6min内采血完毕，采血过程顺利。

1.2 器材 CR-7大容量低温离心机 (日本日立公司)、热合机、分浆夹、血小板振荡保存仪、全自动血细胞计数仪(迈瑞BC-3000Plus)。400ml折断式压延四联袋；400ml塞头式吹塑四联袋。两种血袋的工艺区别见表1。

1.3 操作方法

1.3.1 实验分组情况 将血小板计数大于150×109/L的献血者随机分为三组，第一组用塞头式吹塑四联袋采集400ml全血20袋，采血后6h内用传统富含法制备浓缩血小板；第二组用折断式压延四联袋采集400ml全血20袋，采血后6h内用传统富含法制备浓缩血小板；第三组用折断式压延四联袋采集400ml全血20袋，采血后6h内用改良富含法制备浓缩血小板。

表1 折断式压延四联袋与塞头式吹塑四联袋的工艺区别

表2 传统富含法和优化法制备血小板比较

1.3.2 分离离心后血液均采用分浆夹式分离方法。传统富含法和优化法制备血小板异同见表2，优化法分离富含血小板血浆中如有红细胞混悬，则轻离心285g，5min分离上层富含血小板血浆，袋底红细胞弃除。离心温度为22±2℃，成品在22±2℃振荡保存。

1.4 成品观察指标

制备好的各组浓缩血小板在血小板振荡保存仪中静置1h，解聚后混匀，称重、留样，进行血小板、红细胞、白细胞计数，取平均值。

1.5 统计学方法 数据用x±s表示。

2 结果

2.1 折断式压延袋和塞头式吹塑袋对血小板含量和红细胞、白细胞混入量的影响，见表3。

2.2 改良法和传统法制备浓缩血小板的效果比较见表4。

表3 2种血袋制备的浓缩血小板中血小板含量和红细胞、白细胞

表4 2种方法制备的浓缩血小板含量和红细胞

3 讨论

在手工制备浓缩血小板制品的过程中我们要注意到其质量受多种因素的影响，如：血袋内壁的光滑度、全血的采集时间、采集是否顺畅，运输及贮存条件、环境温度、离心条件等。此外制备过程中动作要轻，避免较强的物理振荡，造成血小板不可逆转的聚集。

选用400ml血袋制备要比200ml血袋更佳，200ml全血离心后分离界面太小，从离心机内移出到分离的过程，界面容易破坏；同时富浆中有大量的血小板粘附在血袋内壁表面而损耗。而400ml全血制备血小板时，尽管有相同因素存在，但由于体积较大，分离界面清晰，血小板的收集率均能达到国家标准。因此在手工制备浓缩血小板时，最好利用400 ml全血制备。另外由于选用压延袋内壁光滑平整，袋质较硬，离心时袋体不易打折，袋壁不易粘挂红细胞。折断式压延四联袋离心后红细胞不会粘挂在袋口，避免了塞头式联袋粘挂在塞子上的红细胞混入血浆；表3数据表明，同样使用传统法，用折断式压延四联袋制备的浓缩血小板中红细胞混入量明显低于塞头式吹塑四联袋。

利用富浆法手工制备浓缩血小板的收集率应大于70%[3]，进行成分制备时，离心条件的选择是非常重要的一步。离心力的大小、时间的长短、离心温度以及刹车速度等均可能影响血小板的质量及数量。离心力过大，时间过长，导致血小板下沉，富含血小板血浆内血小板含量减少；而离心力过轻，血液离心时红细胞、白细胞不能很好地下沉，以致分离出来的富含血小板血浆红细胞、白细胞严重超标，所制备出来的手工血小板的质量远远不达标。传统富含法制备浓缩血小板时首次离心采用轻离心，红细胞不宜压实，易悬浮、挂壁，造成浓缩血小板中的红细胞混入量超标，若为减少红细胞混入而加大离心力则易导致血小板含量不达标。通过应用改良方法有效去除了红细胞、白细胞，酌情增加轻度离心，能很好去除残存在袋口的红细胞和在搬运和分离过程中因血袋晃动而混悬的红细胞。表4数据表明，与传统法相比，改良法制备的浓缩血小板其红细胞白细胞混入量明显降低，从而降低了输血不良反应的发生，血小板含量的差异无统计学意义，表明离心参数设置恰当，增加离心次数，对血小板含量影响较小，血小板含量与相关报道相符[4]。

改良富含法虽然影响因素较多，但只要能严格认真地进行操作，不断总结经验，就能制备符合标准的血小板制品，既能节约血液资源，避免浪费，又能为临床提供充足的血小板制品，且其操作流程易于掌握、安全可靠、成本低，且制备的浓缩血小板质量稳定，符合国家标准，值得推荐。我站运用改良法制备浓缩血小板合格率80.7%，质量优良，临床应用效果良好，作为机采血小板的补充，很好地保证了临床供应[5]，有效地节约了血液资源。

[1]杨成民,李家增,季 阳.基础输血学[M].北京:中国科学技术出版社,2001:670.

[2]Sullivan MT,Cotten R,Read EJ,et al.Blood collection and transfusion in the United States in 2001[J].Transfusion,2007,47(3):385-394.

[3]王培华.临床输血学[M].北京:人民卫生出版社,2002:3.

[4]胡晓成.改良白膜法制备汇集浓缩血小板的临床应用[J].临床输血与检验,2008,10(3):234-235.

[5]卢 申,梅 静,吕 霞.浓缩血小板制备和临床应用分析[J].临床输血与检验,2008,10(2):160-161.