潍坊地区鸡大肠杆菌病的流行病学调查

郭洪梅

（山东畜牧兽医职业学院，山东潍坊 261061）

鸡大肠杆菌病一直是危害养鸡业发展的主要疾病之一，该病表现形式复杂多变，不分年龄和季节，易成为其他疾病的并发病或继发病，发病率均在其他禽类疾病之首。大肠杆菌的血清型众多，致病性菌株分布范围较广，且具有较强的地域性[1]。高崧等在国内做了较大的一次有关禽致病性大肠杆菌的流行病学调查表明，禽病原性大肠杆菌的优势血清型与时间、地区及实地状况密切相关[2]。因此开展特定地区鸡大肠杆菌的流行病学调查对摸清该病流行情况及病原的血清型，以便采取恰当方法防制本病十分必要。

本研究结合门诊三年来的诊断情况及驻场兽医的问卷调查对潍坊地区的鸡大肠杆菌流行情况进行了统计，并对某些鸡场进行了大肠杆菌的分离鉴定和血清型分型，为指导潍坊地区的大肠杆菌防治提供了重要参考依据。

1 材料

1.1 病料来源

病原学调查所用病料来源于初诊患病鸡群中，每个鸡群取病死肉鸡10只，无菌采取病料。

1.2 主要试剂

麦康凯琼脂、普通营养琼脂、微量生化发酵管等均购自上海医药试剂公司。革兰氏染色液，由山东畜牧兽医职业学院微生物实验室配制。大肠杆菌O血清型鉴定用单因子血清和多因子血清等均购自中国兽药监察所。

2 方法

2.1 调查对象及调查方式

根据潍坊地区养殖行业的现状及发展趋势，本研究选取两种类型的养殖场作为研究对象，即规模化水平较高的标准化肉鸡饲养场和散养户为主的小型肉鸡饲养大棚。随机选择24个标准化肉鸡饲养场118个鸡群和220个肉鸡散养户作为本次调查的对象。标准化肉鸡饲养场采用驻场兽医问卷方式，对鸡群的发病情况进行调查，对发病鸡群采取病料进行病原学调查；对大棚肉鸡饲养场、户采用门诊现场询问，并采取病料进行病原学调查。

同时对山东畜牧兽医职业学院动物医院禽病门诊2006年1月份至2008年12月份确诊为大肠杆菌病的发病及混合感染情况进行了统计。

2.2 大肠杆菌病病例的判定标准

临床感染大肠杆菌病病例的判定标准如下：

10日龄以内雏鸡：精神沉郁，常拥挤在一起，少食或不食，腹部大，水样腹泻，脐孔及其周围皮肤发红、水肿。病死鸡剖检后可见卵黄吸收不良，卵黄囊肿大，呈黄绿色，囊内充满黄绿色水样或粘稠液体，肠道卡他性炎症，肝脏淤血或有出血，有时可见散在的淡黄色坏死灶，气囊壁混浊。

11~50日龄肉鸡：病鸡精神沉郁，食欲下降，羽毛松乱，下痢，往往同时兼有其他疾病症状。剖检主要表现为纤维素性心包炎、肝周炎、腹膜炎、气囊炎等。有的病例呈急性经过，表现为突然死亡，病死鸡剖检时仅见肝、脾肿大、充血、腹腔液体增多。

2.3 大肠杆菌的分离鉴定

2.3.1 细菌分离与纯培养

从上述病死禽内脏挑取病料，在麦康凯培养基上进行三区划线，倒置于37℃恒温箱培养18~24 h后，挑取粉红色单个菌落，于普通琼脂平板上三区划线进行纯培养，倒置放于37℃恒温箱，培养18~24 h后，将平板放置于4℃中保存，待用。

2.3.2 细菌的染色镜检

细菌染色镜检按常规方法进行。

2.3.3 分离菌的生化试验

参照说明书按常规方法对所分离的菌株进行19项生化实验。

2.3.4 分离菌O血清型鉴定

所有细菌分离株均按中国兽药监察所提供的产品使用说明书对大肠杆菌O血清型进行鉴定。

3 结果与分析

3.1 2006—2008年门诊确诊大肠杆菌发病情况统计

对动物医院禽病门诊近三年的病例进行统计分析，三年来共就诊家禽病例10 823例，其中大肠杆菌病2008年、2007年与2006年分别占总就诊病例的10.3%、10.8%和12.2%；大肠杆菌病与病毒病混感病例分别占总就诊病例的 11.3%、8.8%和11.7%；大肠杆菌病与其他细菌的混感病例占总就诊病例的6.7%、6.14%和 6.3%（见表 1）。

3.2 临床发病情况调查

根据2.2介绍的判定标准，在调查的24个标准化肉鸡饲养场118个鸡群中，初诊有22个鸡群患有大肠杆菌病，占被调查鸡群的18.6%（见表2）。在调查的220个大棚肉鸡饲养场、户中，初诊有66个鸡群患有大肠杆菌病，占被调查鸡群的30%（见表3）。不同鸡场大肠杆菌病发病率和死亡率统计见表4。

3.3 病原学鉴定

3.3.1 革兰氏染色镜检

对所有分离菌经革兰氏染色后，镜下均可见大量散在的红色、中等大小、两端钝圆的无芽孢直杆菌。

3.3.2 生化试验

分离菌株都发酵麦芽糖、甘露醇、阿拉伯糖、葡萄糖，大多数菌株可迅速发酵木糖、乳糖。所有菌株不产生H2S、不分解尿素、不利用枸橼酸盐、不液化明胶。V－P试验呈阴性，M－R试验和吲哚试验均呈阳性。通过鉴定，88个培养菌中有75株分离菌株检测结果符合大肠杆菌生化鉴定指标，判定为大肠杆菌。

3.3.3 初诊病例中大肠杆菌的分离情况统计

对初诊病例中大肠杆菌进行分离鉴定，从统计结果可以看出，细菌的分离率都较高，达到80%以上，平均分离率为85.2%。各地的细菌分离率存在一定的差距，这与细菌分离操作中的误差以及兽医临床诊断的准确率有关（见表5）。

3.3.4 分离菌的O血清型鉴定

通过玻板凝集和试管凝集试验，对分离鉴定的75株大肠杆菌进行血清型测定，测出了68株大肠杆菌的血清型，定型率为90.7%。这68株大肠杆菌的O血清型覆盖了14种血清型，其中所占菌株数最多的前4种血清型分别为：O78（17）、O2（10）、O15（8）、O11（7），共包含42株分离菌，占定型菌株总数的61.8%，但血清型种类仅占总血清型种类的28.6%。从实验结果可以确定 O78、O2、O15、O11为本地区大肠杆菌病的优势血清型。分离菌株的血清型分布如表6所示。

3.4 大肠杆菌病鸡群中混合感染或继发感染调查结果

对上述鉴定为大肠杆菌病的病例同时进行其它病原的统计。结果显示，大肠杆菌与病毒性疾病或其他细菌性疾病混感后引起的发病率和死亡率显著高于单纯大肠杆菌感染发病（见表7）。

4 讨论

鸡大肠杆菌病是危害养鸡业发展的重要疾病之一，发病率一直较高。造成这种现象的原因主要是大肠杆菌的血清型众多，致病性菌株分布范围较广，具有较强的地域性，现有的疫苗不能有效防治。高崧[2]等关于禽致病性大肠杆菌的流行病学调查表明，禽病原性大肠杆菌的优势血清型与时间、地区及实地状况密切相关。因此开展特定地区鸡大肠杆菌的流行病学调查成为大肠杆菌病防治的重要基础。

针对不同地区鸡大肠杆菌病的流行病学调查已有不少的报道，这些报道显示了不同地区大肠杆菌优势血清型的差异[3-5]。如彭孝先等对某大型鸡场大肠杆菌病的流行病学调查显示该鸡场的优势血清型为O78、O2和O1等，卢晓辉等对河南省部分地区鸡源大肠杆菌的调查显示O141、O88和O78为该地区的优势血清型。在本研究中，我们对潍坊地区不同鸡场进行了大肠杆菌的调查统计，对表现为大肠杆菌的病例进行了病原的分离鉴定和血清型分型，结果表明潍坊地区存在着多种血清型的流行，但优势血清型为O78、O2、O15。结合其他报道可以看出，常见血清型O78和O2始终是危害鸡的主要大肠杆菌血清型。

在很多的报道中，与大肠杆菌伴发的细菌性和病毒性疾病也存在较高的比例，如柴同杰等报道了在山东樱桃谷鸭群鸭圆环病毒与大肠杆菌的混合感染[6]；姬香梅等报道了在蛋鸡中新城疫与大肠杆菌的混合感染[7]。此外，大肠杆菌病与禽流感的混合感染也曾多次报道[8-9]。本次调查显示，潍坊地区大肠杆菌病例同样伴发有一些细菌或病毒的混合感染（表1、表7），相对于大肠杆菌的单独感染，混合感染导致的发病率和死亡率明显升高。从表2和表3也可以看出，大棚饲养场/户大肠杆菌病的发病率比标准化饲养场明显要高，这间接证明了大肠杆菌病是一种典型的条件性致病菌，其发病与鸡群的管理，鸡舍环境条件如卫生、通风、温度、湿度等因素有着密切的关系。我们推测大肠杆菌单独存在时发病轻微甚至不发病，当其他因素特别是细菌或病毒与其混合感染后降低了机体的免疫能力，大肠杆菌的复制及致病性得到增强，导致发病率和死亡率显著升高。这一结果提示我们在做好大肠杆菌防治的同时，也要做好其他病原的防治工作。

[1]Calnek B W.禽病学[M].高福，苏敬良，译.10版.北京:中国农业出版社，1999:158-171.

[2]高崧，刘秀梵，张如宽，等.我国部分地区禽病原性大肠杆菌的分离与鉴定[J].畜牧兽医学报，1999，30（2）:164-171.

[3]彭孝先，高崧，刘秀梵.某大型鸡场鸡大肠杆菌病流行病学调查[J].中国家禽，2003，25（13）:12-14.

[4]卢晓辉，李祥瑞，孙清莲，等.河南省部分地区鸡源大肠杆菌分离及其生物学特性[J].畜牧与兽医，2009，41（2）:69-72.

[5]钱晨，顾艳，杨建泉.扬州市郊区鸡大肠杆菌病的流行病学调查及诊治[J].中国家禽，2005，27（18）:27-28.

[6]柴同杰.山东省樱桃谷鸭群鸭圆环病毒及其混合感染的调查[J].中国家禽，2009，31（6）:4-7.

[7]姬香梅，张俊文.蛋鸡新城疫与大肠杆菌混合感染的诊治[J].畜禽业，2007（10）:45.

[8]刘明生，甘辉群，谭菊，等.蛋鸡新城疫、H9亚型禽流感和大肠杆菌混合感染的诊治 [J].中国动物检疫，2009，26（7）:56-57.

[9]韩梅英，刘国华，许卫戈，等.鸡H9亚型禽流感和大肠杆菌混合感染的诊治 [J].中国兽医杂志，2005，41（10）:22-23.