芦荟生肌膏对大鼠直肠损伤模型的治疗机制

姜爱琴，高庆元，刘长宝

芦荟生肌膏对大鼠直肠损伤模型的治疗机制

姜爱琴1，高庆元1，刘长宝2

目的:探讨芦荟生肌膏对大鼠直肠损伤模型的治疗机制。方法：健康Wistar大鼠30只，随机分为正常对照组、模型组、芦荟生肌膏治疗组。连续治疗7 d后，取各组大鼠直肠组织行蛋白质含量（考马斯亮蓝法）、髓过氧化物酶、成纤维细胞数及病理组织学检查。结果：芦荟生肌膏治疗组的直肠组织蛋白含量、成纤维细胞数明显高于模型组，而髓过氧化物酶的含量显著低于模型组(P＜0.01)。芦荟生肌膏治疗组的直肠病理组织学检查上皮基本完整，浆膜层基本正常。结论:芦荟生肌膏对大鼠直肠损伤模型有显著的治疗作用，其机制可能与减轻受损组织的炎性反应、促进成纤维细胞增生等有关。

芦荟生肌膏；大鼠直肠损伤模型；作用机制

由于肛门部解剖学和生理学特征决定了该部位手术创面较大，术后愈合时间长。目前，在临床应用表皮生长因子以促进伤口的愈合，但对肛门部创口的愈合效果不佳。以芦荟为主的中药制剂具有活血化瘀、清热解毒、化腐生肌作用，能有效抑制创面细菌的生长，促进坏死组织的脱落及肉芽组织的生长，改善创口的血液循环。芦荟生肌膏能促进成纤维细胞的增殖。为进一步验证其作用，我们进行了以下动物实验。

1 材料与方法

1.1 实验动物健康Wistar大鼠，体重250～280 g，雌雄各半，由温州医学院实验动物中心提供，动物合格证号SYXK[浙]2008-0061。

1.2 实验药物与试剂芦荟生肌膏由芦荟、当归、白芷、紫草、大黄、黄连、冰片、甘草、没药、龙骨组成，由温州医学院附属二院药剂科提供，所有药物均经超微粉碎(400目)，用时以高分子PEG基质调配成含生药浓度为40%的膏剂。髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)检测试剂盒，购自南京建成生物工程研究所。

1.3 大肠杆菌菌液的制备大肠杆菌菌液(来源于温州医学院微生物室，菌株为大肠杆菌014)于普通肉汤培养基内，置37℃温箱内培养6 h备用。

1.4 动物模型制备于玻璃棒一侧头端包裹细砂纸并固定，包裹后的棒端直径约1 cm，将该棒缓插入大鼠肛门内约3 cm，反复旋转磨擦，造成局部黏膜层损伤、出血。按付小兵等[1-2]方法，于组织损伤处取对称两点各注入培养基菌液0.25 mL(菌液浓度约为1×1012∕L)，使其创面感染。

1.5 实验方法健康Wistar大鼠30只，随机分为正常对照组、模型组、芦荟生肌膏治疗组。芦荟生肌膏治疗组在造模后8h，用1根适当粗细的橡皮管涂上凡士林润滑，缓缓插入大鼠肛门内3cm，再把吸有芦荟生肌膏的注射器接在橡皮管上，把药物注入直肠，每日注药1次，连续7 d，处死动物，留取直肠创面组织。

1.6 观察指标及检测方法直肠组织蛋白质含量采用考马斯亮蓝法测定。直肠组织髓过氧化物酶测定采用MPO检测试剂盒，按说明书检测。直肠组织病理组织学检查采用HE染色，观察一般情况和每视野成纤维细胞数。

1.7 统计学方法所有实验数据以SPSS 11.0软件进行分析。计量数据以均数±标准差(±s)表示；组间区别以单因素方差分析进行统计，组间两两比较采用LSD，以P＜0.05视为有统计学意义。

2 结果

2.1 大鼠直肠组织蛋白质含量芦荟生肌膏可显著增加受损直肠组织中蛋白含量，提示其可促进创面修复（见表1）。

2.2 大鼠直肠组织MPO髓过氧化物酶可以提示组织炎症严重程度，实验结果表明芦荟生肌膏可显著降低受损组织中MPO水平（见表1）。

2.3 大鼠直肠组织成纤维细胞数芦荟生肌膏可显著增加大鼠直肠组织成纤维细胞数，提示其可促进创面修复（见表1）。

表1 大鼠直肠组织蛋白质含量、髓过氧化物酶、成纤维细胞数检测结果±s)

表1 大鼠直肠组织蛋白质含量、髓过氧化物酶、成纤维细胞数检测结果±s)

注：与正常对照组比，*P＜0.001；与模型组比，#P＜0.01。

组别正常对照组模型组芦荟生肌膏治疗组n 10 10 10蛋白含量(μg∕mg) 8.04±1.75 11.75±4.25*20.23±6.45*#MPO(u∕g) 0.25±0.05 2.01±0.33*0.98±0.22*#成纤维细胞数（个∕视野）15.5±4.5 25.6±8.5*48.9±9.2*#

2.4 病理组织学观察正常对照组肠微绒毛基本正常，上皮完整，浆膜基本正常（图1）;模型组黏膜变性、浆膜明显增厚，炎细胞大量浸润，间皮细胞层脱落、缺失（图2）；生肌膏治疗组上皮基本完整，浆膜层基本正常（图3）。

3 讨论

创面愈合是一个复杂的生物学过程，涉及到创面局部的生理环境和自身组织修复。既往临床研究表明,粪污染所致肠道杆菌的细菌感染和细菌内毒素释放是肛门部创面延迟愈合的主要因素之一,当创面感染时，会阻碍创面愈合。

芦荟生肌膏由芦荟、当归、白芷、紫草、大黄、黄连、冰片、甘草、没药、龙骨组成。祖国医学认为，芦荟，味苦，性寒，归肝、胃、大肠经，有泻下、清肝、杀虫、止血、疗伤等功效。研究表明，芦荟具有明显的抗菌、抗炎、抗内毒素、促进创面愈合等功能[3],芦荟多糖、氨基酸、微量元素等能促进成纤维细胞生可以显著降低受损组织的MPO水平，抑制炎症细胞在受损组织的过多浸润，从而调控炎症反应，保护创面，进而加速创面愈合。长[4]。当归、白芷、紫草、大黄、黄连、冰片、甘草、没药、龙骨等药具有活血化瘀、清热解毒、止痛消肿、生肌等功效。

图1 正常组直肠壁镜下改变HE 40×

图2 模型组直肠壁镜下改变HE 40×

炎症反应是组织修复的基础，其核心又是微循环的结构和功能的紊乱，炎症反应过程中激活和释放的炎症介质也可造成组织损伤。因此，以适当手段、调控炎症反应过程[5]，对促进创面愈合具有积极的意义。本实验通过测定直肠组织髓过氧化物酶和观察受伤直肠的病理组织学表现，提示芦荟生肌膏

图3 生肌膏治疗组直肠壁镜下改变HE 40×

成纤维细胞是创伤愈合中主要的修复细胞之一,在细胞因子等因素的调控下,成纤维细胞发生增殖、迁移,并合成、分泌胶原和细胞外基质成分以及胶原酶等,参与肉芽组织形成、创口收缩、瘢痕形成及组织重建的全过程,在创伤愈合过程中起到重要作用。在细胞增殖和修复期,最关键的步骤之一是肉芽组织的形成,肉芽组织的本质是大量的成纤维细胞和毛细血管形成。创伤形成后,成纤维细胞数量变化会对创伤愈合产生巨大影响[5-6]。本研究结果提示，芦荟生肌膏能显著提高创面肉芽组织成纤维细胞数和蛋白质含量,从而促进伤口愈合。

[1]付小兵,孙同柱,盛志勇.几种用于创伤修复研究的动物模型[J].中华实验外科杂志.1999，16(5):101.

[2]崔桅,付强,李侠,等.库拉索芦荟抑制内毒素作用的实验研究[J].天津药学，2002，14(2):38.

[3]Abdullah KM,Abdullah A,Johnson ML,et al.Effects of Aloe vera on gap junctional intercellular communication and proliferation of human diabetic and nondiabetic skin fibroblasts[J].J Altern Com⁃plement Med，2003，9(5):711.

[4]Habeeb F,Stables G,Bradbury F,et al.The inner gel component of Aloe vera suppresses bacterial-induced pro-inflammatory cyto⁃kines from human immune cells.Methods[J]，2007，42(4):388.

[5]陆树良,廖镇江，陈志龙.烧伤创面愈合机制与新技术[M].北京:人民军医出版社，2003：12-55.

[6]李玉林，文继舫，唐建武.病理学[M].第7版.北京:人民卫生出版社,2008：22，30-33.

（收稿：2010-01-10修回：2010-05-26）

（责任编辑刘洪斌田在善）

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Therapeutical Effect and Mechanism of Luhui Shengji(芦荟生肌）Ointment on Healing of Rats

Anorectal Wound in Rats

Jiang Aiqin,Gao Qingyuan,Liu Changbao，Department of Coloproctology,The

Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College,Wenzhou（325027），China

ObjectiveTo explore the therapeutical effect and mechanism of Luhui Shengji（芦荟生肌）ointment on the healing of anorectal wound in rats.MethodsThirty Wistar rats were randomly divided into 3 groups,group 1(normal control group),group 2(model group),group 3(Luhui Shengji ointment treatment group).After 7 days,all Wistar rats were sacrificed,and the therapeutic effects were evaluated by the protein contents（Coomassie brilliant blue）,Myeloperoxidase(MPO),the cell number of fibroblasts,and the index of histopathology in anorectal tissue.ResultsCompared with the other two groups,the protein contents and the cell number of fibroblasts in group 3 were increasing more obviously than those in the other groups(P＜0.01);on the contrary, there was less MPO in group3，Histopathology showed epithelium was almost completed and the serosa layer was nearly perfect.ConclusionLuhui Shengji ointment shows excellent therapeutical effect on the healing of anorectal wound in rats,it may reduce inflammatory reaction,or promote the proliferation of fibroblasts.

Luhui Shengji ointment，anorectal wound modle，therapeutical mechanism

R285.5；R657.1

A

1007-6948(2010)04-0442-03

10.3969∕j.issn.1007-6948.2010.04.016

温州市龙湾区科技发展计划项目(2008S2)

1.温州市龙湾区第一人民医院肛肠科（温州325024）

2.温州医学院附属第二医院肛肠科

刘长宝，Tel:0577-88086251，E-mail：lcb@wzhealth.com