表皮生长因子、雌二醇及其受体与肝癌分期的关系及意义

陈进国 孔先一 吴洪文

原发性肝癌(primary liver cancer, PLC)(以下简称肝癌)是常见的恶性肿瘤，严重危害人类的健康。肝癌的发生机制目前尚未完全阐明，研究发现，表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)及其受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)在肝癌有过表达现象，与肝癌的形成、发生、发展有密切关系[1]。近年雌二醇(estradiol,E2)及其受体(estrogen receptor, ER)与肝癌的关系受到关注。本研究对40例不同分期肝癌组织进行EGF、EGFR、E2和ER检测，旨在进一步探讨其与肝癌分期的关系和意义。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选择我院2007年1月～2007年12月行肝癌切除术的40例男性患者为研究对象，乙肝血清标志物至少一项阳性，除外转移性肝癌、术前化疗或放疗的患者。年龄17～66岁，平均年龄(50.2±9.0)岁。采用2001年中国抗癌协会肝癌专业委员会制定的原发性肝癌诊断及分期标准[2]，其中I期15例，II期17例，III期8例。

1.2 检测试剂 兔抗人EGF抗体购自武汉博士德生物工程公司，即用型鼠抗人EGFR单克隆抗体、鼠兔通用型S-P试剂盒和联苯二氨(DAB)显色试剂均购自福州迈新生物技术开发有限公司。即用型兔抗人E2多克隆抗体及鼠抗人ER单克隆抗体均为美国SIGNET公司产品。

1.3 检测方法 取检测标本组织制作石蜡切片，用免疫组织化学链亲和素-过氧化物酶(S-P)法检测EGF、EGFR，用已知的阳性片作阳性对照，用PBS代替一抗染色做空白对照。用免疫组织化学链亲和素-过氧化物酶(S-P)法检测E2、ER，以乳腺癌阳性片作为阳性对照，用PBS代替一抗染色做空白对照。以细胞浆和细胞膜出现棕黄色颗粒作为阳性细胞，任意选择5个高倍镜视野(×400倍)，每个视野计数100个细胞，根据阳性细胞的百分比判断：无阳性着色或阳性着色＜10%为阴性，阳性着色≥10%为阳性。

1.4 统计学处理 应用SPSS12.0软件对结果进行统计处理。计数资料采用x2检验，取P＜0.05为显著性差异。

2 结果

见表1。

从表1中可见，I期、II期、III期肝癌EGF和EGFR阳性率逐渐增高。I期阳性率明显低于II期和III期(P＜0.05)；II期阳性率低于III期但无统计学差异(P 0.05)。从表2中可见，I期、II期、III期肝癌E2、ER阳性率随肝癌进展逐渐降低；除I期E2阳性率显著高于III期(Fisher精确概率P=0.017)外，其于各组无显著性差异(P＞0.05)。

表1 EGF、EGFR表达与肝癌分期的关系

表2 E2、ER表达与肝癌分期的关系

3 讨论

本研究发现，随肝癌进展EGF和EGFR阳性率逐渐升高，Ⅱ期、Ⅲ期明显高于Ⅰ期(P＜0.05)。EGF、EGFR与肝癌发展、转移有密切关系。EGF是一种强有力的细胞分裂促进因子，存在于人体组织和细胞外液，具有广泛的生理作用，与胚胎发生与生长、组织修复和再生以及肿瘤发生等均有密切关系。EGFR是原癌基因c-erbB-1(HER-1)的表达产物，是一种跨膜糖蛋白，定位于细胞膜上，由膜外区、跨膜区和胞内区三部分组成，其细胞内段有酪氨酸激酶活性。EGFR可以促进肿瘤细胞的增殖、血管生成、粘附、侵袭和转移，抑制肿瘤细胞凋亡[3]。EGF通过与EGFR结合发挥生物学效应。EGF与EGFR结合后，可通过离子通道、信号传导及基因表达等机制促进肝癌细胞DNA合成、促进肝癌发生与发展[1]。

许多因素与肝癌发展、转移有关，EGF和EGFR促进肿瘤细胞生长、肿瘤血管及间质生成，促进肝癌发展、转移及复发。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)作为最关键的血管生成促进因子，在肝癌发展、转移中发挥重要作用[4-5]。Huang等[6]发现EGF和低氧是刺激VEGF表达的基本因素，二者可以促进VEGF表达。血小板凝血酶敏感蛋白-1(thrombospondin,TSP-1)在肿瘤血管及间质的生成中发挥重要的作用，Okamoto等[7]在人肝癌细胞HuH-7中加入EGF可以显著上调细胞中TSP-1的水平。Zhang等[8]在肝癌细胞株HepG2中加入外源性的EGF，发现肝癌细胞表达骨桥蛋白(osteopontin,OPN)明显增加，OPN在肿瘤转移中发挥重要作用，并且发现EGF可以通过EGF/PI3K旁路信号表达，引起OPN过表达，促进肝癌转移。EGF可促进肝癌尿激酶型纤溶酶原激活物受体(urokinase type plasminogen activator receptor,uPAR)表达，在肿瘤的浸润和转移中发挥重要作用。Guerrero等[9]发现，EGFR在uPAR刺激后起转导作用，介导高度恶性肿瘤细胞中尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase type plasminogen activator,uPA)引起的增殖作用。EGF和EGFR对肝癌的作用机制复杂，有待进一步研究。

雌激素及其受体与肝癌关系密切，大量资料证实外源性的雌激素长期刺激可导致肝细胞肿瘤发病率的升高，HCC是一种雌激素依赖性肿瘤[10-11]。此前我们研究发现[12]肝硬化、肝癌有E2、ER表达增高，肝硬化期就已经存在E2、ER含量的增多，在肝硬化向HCC转变的过程中，E2发挥重要的促进作用。

本研究发现，I、II、III期肝癌E2和ER阳性率随肝癌进展逐渐降低；在研究中亦发现随肿瘤直径增大，E2和ER的阳性率呈下降趋势。从不同肝癌分期的研究结果可以推测在肝癌的早期发生发展及转移过程中，E2、ER发挥着重要作用，而在晚期肝癌中，E2、ER不再发挥重要作用。

从本研究可以得出以下结论：随肝癌分期发展EGF、EGFR和E2、ER表达呈不同变化趋势，在肝癌发生、发展和转移的具有不同作用。

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[12]吴洪文,白文坤,王文奇.原发性肝癌雌二醇及其受体的表达及意义[J].实用肝脏病杂志,2007,10(2):92-93.