HPLC法测定山奈酚胃漂浮缓释片中主药含量Δ

钱一鑫，康冀川，文庭池，何，何军(.贵州大学西南药用生物资源教育部工程研究中心，贵阳市55005；.贵州师范学院，贵阳市55008)

近年来，中药及其活性成分诱导肿瘤细胞凋亡的研究已成为生物医学研究中最活跃的领域之一[1，2]。现代药理学研究[3]表明，天然黄酮醇山奈酚(Kaempferol)对多种肿瘤细胞均有抑制作用，特别是对胃癌细胞的抑制作用方面近年来已取得较多的进展，如:山奈酚可通过下调凋亡抑制基因bcl-2表达来诱导胃癌细胞凋亡，从而发挥抑制肿瘤生长、转移作用；山奈酚的摄入能够降低西班牙人胃癌的发病率[4]等。山奈酚胃漂浮缓释片是由山奈酚与适宜药用辅料制成的亲水凝胶型缓释胃漂浮片，是针对胃癌治疗而新开发的靶向制剂，该制剂可延长药物在胃内的滞留时间，减少给药次数，延长山奈酚的吸收，提高生物利用度和治疗胃癌的靶向性。为了更好地控制产品质量，保证产品疗效，本文选用高效液相色谱(HPLC)法对制剂中山奈酚的含量进行了测定，建立了分离效果好、简便可行的含量测定方法，结果表明其可用于本品的质量控制。

1 仪器与试药

Agilent 1100 HPLC仪，包括G1310A泵、G1316A柱温箱、G1314A紫外检测器、HPCORE工作站(美国Agilent公司)。

山奈酚标准品(中国药品生物制品检定所，批号:110861-20080，含量:95.9%)；山奈酚原料药(贵州省生化工程中心，批号:20080311，含量:98.7%)；山奈酚胃漂浮缓释片(贵州省生化工程中心，批号:20080801、20080803、20080805，规格:每片25 mg)；甲醇为色谱纯，醋酸为分析纯，水为重蒸水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Hypersil ODS C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相:甲醇-0.4%醋酸溶液(48∶52)；检测波长:360 nm；流速:0.8 mL·min－1；柱温:45℃；进样量:20 μL。取“2.2”、“2.3”、“2.4”项下标准品、供试品、空白辅料溶液进样测定，结果空白辅料对主药测定无干扰。色谱见图1。

2.2 标准品溶液的制备

精密称取山奈酚标准品5.0 mg，置于50 mL容量瓶中，加甲醇振摇超声溶解，冷却后定容，得到质量浓度为0.1 mg·mL－1的贮备液。精密量取贮备液2 mL置于10 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，得含山奈酚为20 μg·mL－1的溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取本品20片，研细，取细粉适量(相当于山奈酚10 mg)，精密称定，置于100 mL容量瓶中，加甲醇80 mL，超声处理10 min使药物溶解，再加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过。精密量取续滤液2 mL，置于10 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.4 空白辅料溶液的制备

按样品的处方称取相当于10 mg山奈酚的辅料，置于100 mL容量瓶中，按“2.3”项下方法制成空白辅料溶液。

2.5 线性关系考察

分别精密量取“2.2”项下制备的标准品贮备液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL，分别置于10 mL容量瓶中，以流动相稀释并定容，摇匀，制成系列标准溶液。分别精密吸取20 μL进样，记录色谱峰，以峰面积(A)对其浓度(C，µg·mL－1)进行线性回归，结果回归方程为A＝19.705C+31.598(r＝0.9997)。结果表明，山奈酚检测浓度线性范围为5.0～40.0 μg·mL－1。

2.6 稳定性试验

将上述标准品溶液(20.0 μg·mL－1)于室温、阳光不直射的情况下放置，每隔2 h分别精密量取20 μL进样测定1次，共测定6次，记录峰面积，结果RSD＝2.0%，表明溶液在6 h内稳定。

2.7 精密度试验

取同一批样品(批号20080801)6份，分别按照“2.3”项下制备供试品溶液，进样测定含量，结果样品平均标示量为100.30%，RSD＝1.77%，表明本方法的精密度良好。

2.8 回收率试验

取山奈酚原料药，加入处方比例的辅料，用甲醇溶解，超声处理10 min，再加甲醇稀释至刻度，浓度范围为含量测定浓度的80%、100%、120%，每个浓度制备3份，过滤。取续滤液按“2.9”项下方法进行测定，并计算回收率，结果见表1。

表1 回收率试验结果(n＝9)Tab 1Results of recovery test(n＝9)

2.9 样品含量测定

分别取山奈酚胃漂浮缓释片3批各20片(批号:20080801、20080803、20080805)，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，精密吸取20 μL进样分析，记录色谱；另取“2.2”项下标准品溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算供试品的含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果Tab 2Content determination of samples

3 讨论

山奈酚胃漂浮缓释片是贵州大学西南药用生物资源教育部工程研究中心开发研究的抗胃癌新制剂，目前该产品尚未上市，故对产品质量标准进行充分的研究，将对制剂品种的稳定性和上市产品后质量监控具有十分重要的意义。试验中测定的山奈酚胃漂浮缓释片的凝胶骨架材料为羟丙甲基纤维素和海藻酸钠，这2种辅料均不干扰主药的测定。

本文通过方法学考察建立了测定山奈酚胃漂浮缓释片含量的HPLC法，结果表明，本方法灵敏、准确、专属性强，不但可用于控制山奈酚胃漂浮缓释片的质量，也可用于山奈酚其它制剂的质量控制和分析。

[1]马慧萍，谢景文.中药诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展[J].中国药房，2001，12(4):242.

[2]王艳艳，王威，李红岩.中药有效成分抗胃癌作用研究进展[J].中国药房，2007，18(30):2383.

[3]刘彦芳.山奈素对裸鼠原位种植人胃癌组织ki67和bcl-2表达的影响[D].第二军医大学，2005:38.

[4]Reina GC，Carlos AG，Antonio A，et al.In take of specific carotenoids and flavonoids and the risk of gastric cancer in Spain[J].Cancer Causes and Control，1999，10(1):71.