双氯芬酸钠乳膏的微生物限度检查方法验证试验研究

2010-07-31林小毅

中国医药导报 2010年23期

郑笠，林小毅

（福建省福州市药品检验所，福建福州 350007）

双氯芬酸钠乳膏为乳剂型基质的类白色乳膏，在建立双氯芬酸钠乳膏的微生物限度检查方法时应进行方法验证，选择正确的方法降低或消除该药品抑菌作用对试验的干扰，以证明所采用的方法适合于该药品细菌、霉菌和酵母菌数的测定及控制菌的检查。因此，笔者采用《中国药典》2005年版一部附录微生物限度检查法项下方法建立伤痛宁膏的细菌、霉菌和酵母菌及控制菌的检查方法并验证。

1 仪器与试药

1.1 试验环境

在环境洁净度万级、局部洁净度百级的单向流空气的无菌室中进行。

1.2 样品

双氯芬酸钠乳膏由福州某药业有限公司提供。

1.3 验证菌种

枯草杆菌[CMCC（B）63501]、金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]、大肠埃希菌[CMCC（B）44102]、白色念珠菌[CMCC（F）98001]、黑曲霉[CMCC（F）98003]、铜绿假单胞菌[CMCC （B）10104]均由中国药品生物制品检定所提供。

1.4 稀释液

pH=7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（批号：091217，福州市药品检验所菌检室）。

1.5 仪器

SW-GJ-1BU标准型洁净工作台、YXQ-LS-50S数显立式压力蒸汽灭菌器、SHP-250生化培养箱、MJX-250BZ霉菌培养箱。

1.6 培养基

干粉：营养琼脂培养基（批号：080304），玫瑰红钠琼脂培养基（批号：081217），营养肉汤培养基（批号：081119），胆盐乳糖培养基（批号：081210），甘露醇氯化钠琼脂培养基（批号：080628），溴化十六烷基三甲胺琼脂培养基（批号：091107），改良马丁琼脂培养基（批号：081031），改良马丁培养基（批号：090307）均由北京三药科技开发公司提供。

2 方法与结果

2.1 菌液制备

取经37℃培养18～24 h的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草杆菌肉汤培养物1 ml加9 ml 0.9%无菌氯化钠溶液逐管 10 倍稀释至 10-5～10-7，为 50～100 cfu/ml，备用；取经25℃培养48～72 h的白色念珠菌液体培养物1 ml加9 ml 0.9%无菌氯化钠溶液逐管10倍稀释至10-5～10-7，为50～100 cfu/ml，备用；取经25℃培养1周的黑曲霉斜面培养物，加3～5 ml盐水洗下霉菌孢子，吸取出菌液，取1 ml加9 ml 0.9%无菌氯化钠溶液逐管10倍稀释为10-4，为50～100 cfu/ml，备用。

2.2 供试品溶液制备

取本品5 g，与5 g司盘80、3 g单硬脂酸甘油酯、5 g聚山梨酯80混合于无菌烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加入45℃的pH=7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液至100 ml，边加边搅拌，使供试品充分乳化，作为1∶20供试品溶液。

2.3 细菌、霉菌和酵母菌检查法的验证

2.3.1 常规法采用常规法进行3次独立的平行实验，每种菌液做平行2皿。

2.3.2 菌液组分别取枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌3种菌液各1 ml，注入培养皿中，然后注入45℃营养琼脂培养基约 15 ml，待凝固后，置 30～35℃培养 24～48 h，逐日观察结果。分别取白色念珠菌、黑曲霉2种菌液各1 ml，注入培养皿中，然后注入45℃改良马丁琼脂培养基约15 ml，待凝固后，置 23～28℃培养 48～72 h，逐日观察结果。

2.3.3 供试品对照组取本品1∶20供试品溶液1 ml，倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24～72 h，逐日观察结果，测定供试品本底菌数。

2.3.4 试验组取本品 1∶20供试品溶液 1 ml、50～100 cfu/ml试验菌液1 ml，分别注入平皿中，倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24～72 h，逐日观察结果。

2.3.5 稀释剂对照组取稀释剂1 ml、50～100 cfu/ml试验菌液1 ml，分别加入平皿中，倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24～72 h，逐日观察结果。

2.3.6 实验结果见表1。由表1可知，经3次平行试验，结果试验组及稀释剂对照组的5种阳性试验菌株的回收率均大于70%，因此可采用常规法测定该供试品的细菌数、霉菌和酵母菌数。