消金膏质量标准研究

2010-07-30王赫

中国医药指南 2010年18期

王赫

消金膏为长春市南关区中医院临床经验方。是由黄柏、大黄、姜黄、苍术、天花粉、白芷、陈皮、厚朴等中药组成。具有活血、消肿、止痛、拔毒、疔疮疖肿、痈、蛇盘疮的功效。其中黄柏为常用中药，也为方中君药，为芸香科植物黄皮树 Phellodendron chinense Schneid.的树皮。临床应用十分广泛，具有清热、燥湿、泻火、解毒的功效，主治热痢、泄泻、消渴、黄疸、痿、梦遗、淋浊、痔疮、便血、赤白带下、骨蒸劳热、目赤肿痛、口舌生疮、疮疡肿毒等，含有的小檗碱、黄柏酮等成分有抗菌、收敛、消炎的作用，多各种皮肤湿毒、疮疡等症状效果良好。为了控制制剂的质量、保证疗效，我们利用高效液相色谱法对黄柏中的指标成分盐酸小檗碱进行含量测定，并对该方法学进行研究，对黄柏、大黄、姜黄进行薄层色谱鉴别研究。结果表明该方法可以用于消金膏复方制剂的质量控制。

1 仪器与试剂

LC-10AT日本岛津高效液相色谱仪；超声波洗涤机；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯；消金膏（10g/袋）、黄柏阴性、大黄阴性、姜黄阴性均由长春市南关区中医院制剂室提供，对照品盐酸小檗碱和对照药材黄柏、大黄、姜黄均购自中国药品生物制品检定所。

2 定性鉴别

2.1 黄柏[1,2]

取本品内容物10g，加甲醇50mL，加热回流30min，放至室温，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇溶解，使成1mL，作为供试品溶液；按处方比例取缺黄柏的阴性样品10g，同法制成阴性对照溶液；另取黄柏对照药材0.1g，加热回流30min，放至室温，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇溶解，使成1mL，作为对照药材溶液。吸取上述3种溶液各6µL，分别点于同一以0.4%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10∶6∶1∶1）为展开剂，置氨蒸气预饱和的展开缸内预平衡30min，上行展开，展距为8cm，取出，晾干，在荧光（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照中无干扰。结果见图1。

2.2 大黄[3,4]

取本品内容物10g，加甲醇25mL，搅拌5min，超声提取20min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10mL使溶解，再加盐酸1mL，加热回流30min，立即冷却，用乙醚振摇提取3次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加乙酸乙酯溶解，使成1mL，作为供试品溶液。按处方比例取缺大黄的阴性样品10g，同法制成阴性对照溶液；另取大黄对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液。吸取上述3种溶液各6µL，分别点于同一以0.4%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸（60∶20∶1）为展开剂，上行展开，展距为8cm，取出，晾干，在荧光（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点，阴性对照中无干扰。结果见图2。

2.3 姜黄

取本品内容物5g，加无水乙醇20mL，搅拌5min，回流提取30min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣用无水乙醇，使成1mL，作为供试品溶液。另取姜黄对照药材0.2g，加无水乙醇25mL，回流提取30min，放冷，过滤，滤液蒸干，残渣用无水乙醇溶解，使成1mL，作为对照药材溶液；按处方比例取缺姜黄的阴性样品10g，同法制成阴性对照溶液；吸取上述3种溶液各5µL，分别点于同一以0.4%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-三氯甲烷-乙醇（50∶30∶3）为展开剂，上行展开，展距为8cm，取出，晾干，在荧光（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显黄色色的荧光斑点。结果见图3。

3 含量测定

3.1 色谱条件

色谱柱：Shim-pack（岛津）C18 （150×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-0.15%磷酸溶液（含0.1%的十二烷基磺酸钠）（50∶50）；检测波长：265nm。流速：1mL/min；柱温：25℃[5]；按盐酸小檗碱峰计算理论板数应不低于4000。按外标法计算。对照品溶液、供试品溶液及缺黄柏的阴性样品溶液色谱图见图4～图6。图谱显示，阴性对照溶液在盐酸小檗碱相应的保留时间处无吸收峰，表明处方中其他成分对测定盐酸小檗碱无干扰。

3.2 对照品溶液的制备

精密称取100℃干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品适量，加流动相振摇溶解，制成每1mL含0.03mg的溶液，即得。

3.3 供试品溶液的制备

取本品1g，精密称定，置50mL量瓶中，加流动相40mL，超声处理30min（功率250W，频率40kHz），放冷，用流动稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得[6]。

3.4 线性关系的考察

精密称取在100℃干燥干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品6.55mg，置25mL容量瓶中，加适量流动相振摇溶解，并定容至刻度，摇匀，精密量取3mL，置25mL容量瓶中，加流动相稀释，定容至刻度，摇匀，得浓度为0.03144mg/mL的对照品溶液。分别吸取对照品溶液4、8、12、16、20μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标（Y），盐酸小檗碱含量为横坐标（X）绘制标准曲线，计算回归方程为y=2365817.68x＋1045.81，相关系数r=1.0000。结果表明，盐酸小檗碱在0.12576～0.62880μg范围内线性关系良好。

3.5 中间精密度试验

在不同时间由不同的分析人员照“3.3”项下制备供试品溶液（批号：20090418），测定盐酸小檗碱峰面积（n=6），结果表明盐酸小檗碱含量的RSD为1.42%，说明该方法中间精密度良好。

图4 盐酸小檗碱对照品

图5 消金膏供试品图谱

图6 阴性对照图谱

3.6 稳定性试验

取同一供试品溶液（批号：20090418），室温下放置，按上述色谱条件，分别于0、2、4、6、8、10h进样，测定峰面积，其盐酸小檗碱峰面积的RSD为1.02%，表明供试品溶液中盐酸小檗碱在10h内稳定。

表1 准确度实验结果

3.7 重复性试验

取同一批号的样品6份（批号：20090418），按照“3.3”项下方法制备供试品溶液，按照上述色谱条件测定，结果盐酸小檗碱含量的RSD为1.28%，表明该方法重复性良好。

3.8 准确度试验

精密称取已知盐酸小檗碱含量的供试品（其盐酸小檗碱含量按重复性试验6次测定平均值计算，为1.526mg/g，批号：20090418）6份，分别精密加入盐酸小檗碱浓度为0.382mg/mL的对照品溶液2mL，照“3.3”项下方法制备供试品溶液，测定，外标法计算，见表1，测得平均回收率为99.19%，RSD=0.81 %（n=6）。

3.9 样品的含量测定

取3批样品，按照“3.3”项下制备供试品溶液，照上述色谱条件测定，以外标法计算，测定3批样品的含量，含量测定结果见表2。

表2 样品含量测定（n=3）

4 讨论

4.1 供试品溶液制备方法的选择

分别用流动相和甲醇超声和回流的方法提取供试品进行实验，结果显示超声和回流的实验结果是一致的，由于甲醇提取的供试品杂质较多，并且高效液相色谱理论塔板数达不到要求，所以我们选择用流动相作为提取溶剂、操作方法方便的超声提取方式。

4.2 检测波长的确定

选用浓度为0.02mg/mL的盐酸小檗碱对照品，进行紫外扫描，图谱显示在199～400nm处有5个吸收峰，文献多报道多用265nm，同时参考《中华人民共和国药典}2005年版一部黄柏项下含量测定方法，经试验以265nm为检测波长其灵敏度高，能够满足质量控制的要求。

4.3 流动相的选择

本研究中为了使盐酸小檗碱达到较好的分离，在流动相中加入了十二烷基磺酸钠，它是一种表面活性剂，十二烷基磺酸钠电离的十二烷基磺酸根可与目标分子互相吸引作用，得到一个较大的基团，同时十二烷基的存在保证了在反相填料C18的表面有一定的互相作用，增大的目标物质的保留，十二烷基磺酸钠在水溶液中黏度大且容易产生气泡，流动相现用现配，并且要过滤，使用结束后要用水冲洗管道、以便很好的维护仪器[7,8]。