子宫内膜样腺癌组织中NF-κB p65与ERα的表达及意义

李 伟 章明放 张云莎

细胞核因子kappa B（nuclear factor-kappa B,NF-κB）p65也被称为人类应激反应的中心调节剂[1]。近年来人们发现其在调节炎症反应之外，还能够在促进血管生成，肿瘤发生、侵袭和转移过程中发挥关键作用[2]。子宫内膜癌是较常见的妇科恶性肿瘤，其发病机制目前尚不清楚。本研究通过检测不同类型子宫内膜组织中NF-κB p65蛋白和雌激素受体（ER）α蛋白的表达，旨在探讨二者在子宫内膜样腺癌发病过程中的作用及二者间的相互关系。

1 对象与方法

1.1 研究对象 收集天津医科大学总医院病理科2006年6月—2008年12月诊刮活检的子宫内膜组织标本90例。其中正常子宫内膜10例（增殖期和分泌期各5例），取自子宫肌瘤术前诊刮的患者，年龄24~47岁，平均（39.2±7.4）岁，其月经规则，无性激素类药物使用史。子宫内膜增生症60例，年龄21~79岁，平均（47.4±12.2）岁，包括单纯性增生、复杂性增生和非典型增生各20例。子宫内膜样腺癌20例，年龄15~78岁，平均（52.6±17.1）岁，子宫内膜增生症和子宫内膜样腺癌的子宫内膜组织取自因阴道异常出血行刮宫术的患者，术前均未经化疗、放疗或性激素治疗。

1.2 方法 所有组织标本均经10%福尔马林固定，石蜡包埋，4 μm厚连续切片。鼠抗人NF-κB p65单克隆抗体（sc-8008）、ERα单克隆抗体（zm-0104）购自美国Santa Cruz公司，工作浓度均为1∶150。二抗PV6000购自北京中杉生物技术有限公司。免疫组化采用二步法进行染色：石蜡切片经常规二甲苯脱蜡、梯度乙醇脱水后，用PBS冲洗3次，5 min/次；枸橼酸盐缓冲液微波炉抗原热修复95℃10 min；3%H2O2室温孵育10 min；PBS冲洗2次，3 min/次；正常山羊血清工作液封闭10 min；滴加一抗工作液，4℃冰箱过夜；恢复室温30℃，PBS冲洗2次，3 min/次；滴加二抗工作液，37℃温箱孵育60 min，PBS冲洗2次，3 min/次；DAB显色。显色充分后应用苏木素复染细胞核，乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。NF-κB p65染色阳性信号定位于胞浆或胞核，ERα染色阳性信号定位于胞核，二者均以胞核染色为阳性，呈棕黄色或棕褐色。选取内膜腺体上皮细胞密集的区域，连续观察5个高倍视野（×400），计数每视野中100个腺上皮细胞中的阳性细胞数，以“%”表示，取5次计数均值。

1.3 统计学方法 采用SPSS 13.0统计软件进行分析，数据符合正态分布时，以x±s表示，多组比较采用单因素方差分析，两两比较采用q检验。数据不符合正态分布时，以中位数（四分位数间距）表示，多组间比较采用Kruskal-Wallis test秩和检验，两两比较采用Mann-Whitney test，相关性分析采用Spearman秩相关，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同类型子宫内膜组织腺上皮细胞核中NF-κB p65和ERα蛋白表达比较 3组NF-κB p65蛋白、ERα蛋白表达率差别有统计学意义，两两比较差异亦有统计学意义（P<0.05或P<0.01），见表1。

表1 不同类型子宫内膜组织中NF-κB p65与ERα蛋白的表达比较 （%）

2.2 不同子宫内膜增生类型NF-κB p65与ERα蛋白表达比较 3组NF-κB p65蛋白表达率差别有统计学意义，两两比较差别亦有统计学意义（P<0.05或P<0.01）；3组ERα蛋白表达率差别有统计学意义（P<0.01），单纯性增生组与非典型增生组、复杂性增生组与非典型增生组之间差异均有统计学意义（P<0.05或 P<0.01），见表 2。

表2 子宫内膜增生症中NF-κB p65与ERα蛋白的表达比较 （n=20，%）

2.3 子宫内膜样腺癌组织中NF-κB p65与ERα表达的关系 子宫内膜样腺癌组织中NF-κB p65蛋白的表达与ERα蛋白的表达呈负相关（r=-0.491，tr=2．391，P ＝ 0.028）。

3 讨论

子宫内膜增生症与子宫内膜样腺癌是一个连续的过程，子宫内膜增生症包括单纯性、复杂性和非典型增生，有不同的比例可发展为癌。NF-κB为一个转录因子家族，在哺乳动物中该家族包括p50、p52、p65、c-Rel和Rel-B，并形成同型或异质二聚体转录复合物。在哺乳动物中最常见的Rel/NF-κB二聚体含有p50和p65，并被明确地称为NF-κB[1]。已有报道在结肠癌和前列腺癌中存在NF-κB持续的核表达[3-4]。本研究表明，在子宫内膜组织由增生症到内膜样腺癌的发展过程中，NF-κB p65的核阳性染色比率逐渐增加，提示NF-κB p65蛋白可能在子宫内膜样腺癌的发展过程中起重要作用。Pallares等[5]研究表明子宫内膜癌中NF-κB的核表达率为16.5%，且p50和p65表达之间显著相关，提示NF-κB表达于子宫内膜癌中。但他们同时认为ER表达增加与p65的核表达一致，这点与本研究结果是相悖的。

ERα在子宫内膜样腺癌的发生过程中起重要作用，这已被诸多学者所证实。Hu等[6]研究发现，从正常增殖期到子宫内膜单纯性增生，以及子宫内膜复杂性增生过程中，ERα的表达是上升的；而由子宫内膜非典型增生向子宫内膜样腺癌过渡过程中表达却显著下降，甚至在后者中的表达是缺失的。这与本研究结果类似，提示在子宫内膜过度增生向恶变转变的过程中，ERα会出现不同程度的减少，对雌激素失去了正常的识别功能，并有可能参与了子宫内膜样腺癌的发生。此外笔者还发现随着NF-κB蛋白的表达增加，ERα蛋白表达减少，两者之间存在相关性。还有研究证实，在ER阳性的Ishikawa子宫内膜癌细胞系中，使用白细胞介素（IL）-1处理后能够抑制ER介导的受体基因的转录[7]，由于IL-1能够诱导NF-κB，所以推断NF-κB在这种细胞环境中抑制ER的转录活性。ER可能和NF-κB复合定位于DNA上，这种相互作用与类固醇激素（GR）、孕激素（PR）是相似的，且NF-κB对于激素受体的这种抑制作用与肿瘤向不依赖激素的方向进展是有关的。据此笔者认为，NF-κB p65蛋白的表达增加，很可能抑制了ERα的活性，使其表达下降。与之相反，Ozlem等[8]研究认为，ERα能够直接阻止NF-κB与DNA结合，从而抑制其活性。由此可见两者的关系是相互的，称之为交互调节作用。

总之，NF-κB p65蛋白在子宫内膜样腺癌细胞核中的表达率显著增高，提示在子宫内膜样腺癌的演变过程中，NF-κB的变化可能促进了癌症的形成和进展，且在该过程中与ERα相互作用。NF-κB p65可能抑制了ERα的表达，从而使子宫内膜样腺癌演变成非激素依赖的状态。

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