低温应激对淮南麻黄鸡血清生化指标的影响

陈兴勇，姜润深，耿照玉

（安徽农业大学动物科技学院，安徽 合肥 230036）

随着人们生活水平的提高，对鸡肉、蛋品的质量要求也越来越高，山地鸡、放养土鸡也更加受到人们的青睐，在此养殖过程中，冬季冷应激的问题突现[1]。4～6周龄雏鸡生长最佳环境温度为（20±2）℃，而在秋冬季节，因气候变冷鸡舍内需要的温度与外界气温相差悬殊，在气温急剧下降时，防寒保温工作不到位，雏鸡的神经内分泌系统、心血管系统、消化系统及免疫系统等会引发一系列生理生化变化，维持内环境的相对稳定，以提高机体的适应能力[2-4]。应激对动物机体影响广泛，目前，国内外学者在关于冷应激对动物的神经系统、内分泌系统、激素水平、生产性能及生理生化指标的影响等方面的研究做了大量工作[5-6]。血液是动物机体主要的流动运输系统，具有维持机体内环境稳定、物质交换等多种功能。血液生化指标能在一定程度上反映动物机体代谢及生理机能状况[7]。近年来，应用生化检测技术测定畜禽血液中特定酶的活性，探索其与畜禽生产性能间的关系，并将其作为早期选择的参考指标，已在畜牧业生产以及品种选育中得到广泛应用。由于低温应激的反应机制十分复杂，到目前其确切的机制仍未得到阐明，但研究证明在冷应激过程中存在血清酶类的改变[8-10]。

淮南麻黄鸡属肉蛋兼用型品种，为安徽省优质地方良种鸡之一，具有产蛋性能好、蛋品质佳，繁殖性能高，生长速度快，肉质优良等特点[11]。笔者对育雏期淮南麻黄鸡进行急性和慢性冷应激处理，测定其血清酶活性，并对其变化规律及相关关系进行探讨，旨在阐明冷应激对禽类生理机能的影响机制，为禽类冷应激相关疾病的预防和治疗提供参考，并为皖北地区地方品种冬季育雏饲养提供指导。

1 材料与方法

1.1 试验材料

供试鸡为4周龄健康淮南麻黄鸡公鸡。

1.2 试验设计

将300只4周龄健康淮南麻黄鸡公鸡随机分为3组，每组100只。对照组不进行应激处理，其余两组分别于2℃和10℃环境温度下暴露0.5、1、2、3、6、12、24、72 和 144 h，并在各时间点随机取 6 只鸡翅静脉采集血样2 mL。试验过程中，各试验组均自由采食和饮水。

1.3 血浆和血清的制备

采集的血样于37℃水浴20 min后，4℃ 3 500 r/min离心8 min，收集血清样品，分装于1.5 mL离心管，－70℃冻存。血清样品为无溶血血清。

1.4 检测项目及方法

采用IFCC法测定丙氨酸氨基转移酶（AL T/GPT）、γ-谷氨酸氨基转移酶（γ-GT）及天门冬氨酸氨基转移酶（AST/GOT）活性；酶偶联法测肌酸激酶（CK）活力；乳酸基质速率法测乳酸脱氢酶（LDHL）活性。

1.5 试验数据的分析与统计

应用SAS9.1软件进行数据的统计与分析，采用单因素方差分析法。所测数据以平均值±SD表示。

2 结果与分析

2.1 极端低温应激（2℃）下淮南麻黄鸡血清酶的改变

由表1可以看出，淮南麻黄鸡在低温应激状态下血清中各种酶的活性呈现出波动性变化，当低温暴露0.5 h后，血清中ALT和AST均显著下降，应激1 h后ALT再次上升至原来水平，AST水平也呈上升趋势，但变化不明显，至应激2 h后，二者水平极显著上升，应激3 h后再次下降，应激时间达6～24 h时，血清中ALT与AST水平基本维持在正常水平，当应激3 d时，ALT与AST均下降至一极低水平，应激6 d时，ALT继续维持在较低水平，但AST上升至与对照组相比变化不明显的水平。γ-GT在急性应激时无显著性变化，经慢性应激6 d后出现极显著上升。LDH在急性应激1 h和2 h后出现明显上升，应激3 h后与对照组相比急显著上升，6 h后下降至与对照组差异不明显的水平，12 h后再次上升至极显著水平，24 h后LDH水平与12 h相比明显下降，3 d后LDH水平与12 h和3 h相比差异极显著，与2 h和1 h相比差异显著。CK在急慢性应激过程中亦呈现出波动性变化，应激1 h与0.5 h相比差异显著，应激2 h与0.5 h相比差异极显著，与对照组相比差异显著，应激3 h与2 h相比，CK水平下降显著，6 h后上升至正常水平，12 hCK水平与0.5 h应激水平相比明显上升，24 h应激组CK水平与12 h组相比显著下降，与2 h组相比下降极显著，经慢性应激3 d后，血清CK与12 h、6 h、2 h和1 h相比，下降极显著，与3 h和对照组相比下降显著，慢性应激6 d后血清CK与3 d相比显著上升，与2 h相比显著下降。

表1 2℃低温应激下不同时间淮南麻黄鸡血清酶活力检测结果

2.2 中度低温应激（10℃）下淮南麻黄鸡血清酶的改变

表2为淮南麻黄鸡在环境温度为10℃下急慢性冷应激后血清酶水平的检测结果。从表2可以看出，ALT和AST在急性应激时变化不明显。急性应激6 h后ALT水平与应激2 h和1 h相比下降显著；急性应激12 h后ALT上升至对照组水平；慢性应激3 d后ALT水平与24 h和0.5 h相比显著上升，与6 h相比上升极显著；慢性应激6 d后血清ALT水平与3 d相比极显著下降，与12 h、2 h和1 h相比显著下降。急性应激12 h后血清AST水平与6 h相比显著上升，应激3 d后AST水平与6 h和0.5 h相比显著上升；慢性应激6 d与3 d相比AST水平显著下降。γ-GT水平在环境温度为10℃下的急慢性应激过程中的变化无显著性差异。与对照组比较，LDH水平经0.5 h急性应激后显著上升，经1 h应激后极显著升高，经12 h应激后显著升高；经3 d慢性应激后，LDH水平与12 h和1 h比较显著下降；经6 d慢性应激，LDH水平再次下降至极低水平，与12 h、1 h和0.5 h相比差异极显著，与24 h、3 h、2 h和对照组比较差异显著。CK在急性应激早期变化不显著，当应激时间为12 h时，CK水平显著上升并高于6 h和3 h组，24 h后又明显下降；慢性应激3 d后，血清CK水平显著高于24 h、6 h、3 h和 0.5 h组；慢性应激 6 d后，血清 CK与3 d组相比显著下降。

表2 10℃低温应激下不同时间淮南麻黄鸡血清酶活力检测结果

3 讨论

动物在适应外界环境过程中，机体必然出现某些生理生化反应[12]。肝脏是动物机体含酶最丰富的脏器，酶蛋白含量约占肝脏总蛋白含量的2/3，当肝脏有实质性损害时血清某些酶活性可升高，如肝细胞变性坏死，分布在胞浆中的酶如丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、γ-GT 及乳酸脱氢酶（LDH）等最易逸出，故血清中活性增高。从本实验研究结果可知，极端低温应激条件下，各应激时段淮南麻黄鸡公鸡血清中ALT、AST、γ-GT及LDH均表现出不同的变化规律，即在应激早期血清酶水平快速升高，至中期下降至与对照组接近的水平，慢性应激达3～6 d时，各血清酶水平再次升高。在中度冷应激条件下，淮南麻黄鸡公鸡血清中各酶水平变化较不明显，只在慢性应激达3～6 d时检测到血清酶水平的上升或下降。

CK正常分布于骨骼肌、心肌、脑、甲状腺、肺组织、胃肠平滑肌中，以骨骼肌含量最高，其次为心肌，再次为脑和胃肠平滑肌。正常情况下，细胞外液的CK浓度是细胞内液的1/1 000～1/10 000。因此，血清中肌酸激酶升高一般提示含有CK的组织细胞的通透性增强或细胞的破坏，尤其是肌纤维的膜通透性异常或肌纤维损害或正在发生损害的可能性。Yan等[13]研究证明，初生雏鸡在受到应激2 h后即可导致CK等血清酶迅速升高。本实验研究发现，极低温度应激下，淮南麻黄鸡公鸡血清中CK表现出不规律的显著性改变，而低温应激组只在应激时间较长时血清中的CK才发生升高或降低，并且均与对照组差异不明显。

CK在体内主要促进磷酸肌酸转化为肌酸和ATP，李士泽等[14]研究表明，雏鸡在浸水应激后CK会持续性升高，反映了在冷应激后机体能量代谢的增强；ALT活性主要反映肝胆及心血管系统疾病，在体内ALT可催化丙氨酸与α-酮戊二酸的氨基转换反应，生成丙酮酸和谷氨酸。LDH属于氧化还原酶类，催化乳酸氧化成丙酮酸的产生，从而使乳酸水平升高，NAD为氢的受体；上述几种生化指标的变化表明，雏鸡在重度冷应激后机体为了抵御外界应激刺激，血液某些酶活性发生较大变化，从而使机体发挥调节能力，达到稳态调节。

本研究发现皖北淮南麻黄鸡在冷应激时的体内各种酶发生有规律的变化，可作为快速鉴定家禽冷应激水平的方法。这对培育出耐寒、抗病、抗应激并具有较高的肉品、蛋品质量的家禽品种有重要意义。

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