鲁米诺在现场潜血发现中的应用研究

侯常永 刘海东 李 学 王金祥 邢立学 李国宏

鲁米诺(luminol),又名发光氨。化学名称为3-氨基邻苯二甲酰肼。化学式为C8H7N3O2,溶液显强酸性,对眼睛、皮肤、呼吸道有一定刺激作用。通常所说的鲁米诺试剂是鲁米诺与过氧化氢(双氧水的主要成分)的混合物,主要用于犯罪现场潜血的发现。血液中含有血红蛋白,血红蛋白含有铁,而铁能催化过氧化氢的分解,让过氧化氢变成水和单氧,单氧再氧化鲁米诺让它发光。。作为催化剂,铁、锰、钴等金属起到非常重要的作用,催化剂的含量越高,鲁米诺发生氧化反应就越强烈,其荧光就越明亮。因为血液是一种略呈碱性的混合液体,血液里的血红素含有铁,可以作为催化剂使鲁米诺发生氧化反应,产生蓝绿色的荧光。

一、实验材料

实验室模拟的犯罪现场血迹和有微量血痕的衣物。

二、主要实验试剂和仪器

(一)主要试剂

1.鲁米诺(C8H7N3O2)0.1g﹑无水碳酸钠(Na2CO3)5g﹑蒸馏水100m﹑30%双氧水(H2O2)6ml;2.去离子水;3.Identifiler试剂盒包括10譩uffer(含Mg2)﹑TapDNA聚合酶﹑PrimerSet;4.蛋白酶K(5mg/mL);5.毛细管电泳上样所需试剂:GS-500分子量内标﹑95%去离子甲酰胺﹑POP-4液态胶。

(二)主要仪器

1.塑料喷壶;2.超净工作台;3.9700型热循环仪;4.ABI3130遗传分析仪;5.涡漩震荡器;6.Biofuge台式离心机。

三﹑实验方法

(一)血液的发现

在命案等犯罪现场勘查中,可以用鲁米诺配制成碱性溶液,盛装于喷罐内,在黑暗的室内喷洒在疑有血迹的位置或物品上。

第一,溶液的配置鲁米诺溶液可以参考以下方案配制:鲁米诺(C8H7N3O2)0.1g﹑无水碳酸钠(Na2CO3)5g﹑蒸馏水100ml﹑30%双氧水(H2O2)6ml,可以将溶液注入定制的喷罐密封。

第二,使用步骤。在使用鲁米诺搜寻血迹时,首先要确定勘查人员戴好口罩等防护措施,其次须将门窗紧闭,关闭所有光源,确认房间处于完全的黑暗状态。将喷罐内的溶液喷洒于待显现的客体上,与客体保持距离在30～45cm,喷出的液体形成细小均匀的喷雾。用相同的方式反复喷洒两次,并确保喷洒出的试剂雾不要太浓,以防止它扩散。

第三,将显示荧光的部分标出,然后再进行提取,检测。

(二)血液的提取、扩增和检测

将显示荧光处剪碎或者用棉签擦拭,置于500ul的管中,用200ul无菌去离子水浸泡,室温放置并振荡,13000r/min离心3min,弃上清。沉淀用5%的Chelex-10050ul充分悬浮,50℃温浴30min,充分振荡。13000r/min离心3min,上清用于PCR扩增。

将提取的DNA进行PCR扩增反应,经过变性、退火、延伸,将扩增产物使用ABI3130遗传分析仪电泳,并经GeneMapperIDv3.2软件分析。

四、结果分析和讨论

鲁米诺与血液发生荧光反应非常敏感,主要用于现场潜血的发现,即使若干年前被清洗过的血迹,都可以通过鲁米诺显现出来。更为重要的是鲁米诺的使用对后续DNA的检验没有影响,完全是无损的。另外鲁米诺溶液的配置方法简单,溶液稳定,易于保存。最后鲁米诺和它的溶液对人体的危害很小。

但是,鲁米诺若产生荧光反应,只是说明该位置存在有血迹的可能,并不能完全肯定引起发光反应的物质就是血迹。因为鲁米诺在钴、镍等金属的催化下也能发生荧光反应。