北沙参乙醇提取物对四氯化碳诱导急性肝损伤的保护作用

金香男，郑明昱*（.龙井中医医院内科病房，吉林龙井33400；.延边大学医学部中医学院，吉林延吉33000）

北沙参乙醇提取物对四氯化碳诱导急性肝损伤的保护作用

金香男1，郑明昱2*
（1.龙井中医医院内科病房，吉林龙井133400；2.延边大学医学部中医学院，吉林延吉133000）

目的观察北沙参乙醇提取物（EEAR）对CCl4诱导大鼠急性肝损伤的影响。方法将SD大鼠分为5组：正常对照组，模型对照组，阳性对照组及药物大、小剂量组。分别用生理盐水、EEAR和Silibinin灌胃7 d，最后1 d腹腔注射CCl4，检测血清中ALT、AST、ALP；HE染色观察病变程度；黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法分别检测肝匀浆SOD、CAT和MDA。结果与对照组比较，CCl4组血清中ALT、AST、ALP的含量显著增加（P＜0.05），HE染色肝组织变性坏死累及全小叶。与CCl4组比较，EEAR+CCl4组血清中ALT、AST、ALP的含量显著下降（P＜0.05）；HE染色病变程度较轻；胞浆中SOD和CAT活性提高、MDA水平降低（P＜0.05）。结论EEAR对CCl4所致的大鼠急性肝损伤具有一定的保护作用。

北沙参；大鼠；四氯化碳；肝损伤

北沙参（Radix Glehnic）味甘微苦，性微寒，归肺胃经，能清肺热、补肺阴。临床用于阴虚肺热燥咳痰黏，热病伤津的治疗。现代研究认为，沙参有祛痰、强心、抗真菌作用，而在免疫药理方面国内外研究较少［1-2］。故本实验通过观察EEAR作用于CCl4肝损伤的急性动物模型，探讨EEAR对CCl4急性肝损伤的影响。

1 材料与方法

1.1 试剂仪器SD大鼠，四氯化碳，乙醚、HE染液，SOD、CAT、MDA测定试剂盒，考马斯亮脏蛋白测定试剂盒，多聚甲醛，酶联免疫检测仪，Microfuge 22R台式冷冻离心机，自动生化分析仪。

1.2 北沙参乙醇提取物的制备取干燥的北沙参500 g加3 000 mL 70%乙醇，用萃取机萃取3 h，将取得的萃取液用滤纸过滤，然后使用回转真空浓缩机，上清液在45℃减压浓缩，经冷冻干燥得粉末。

1.3 动物分组及给药SD大鼠50只，清洁级，雄性，体质量（200±30）g，随机分成5组，每组10只。对照组、CCl4组、150mg／kg EEAR+CCl4组、300mg／kg EEAR+CCl4组和50 mg／kg Silibinin+CCl4组。灌胃7 d，1次／d，0.5 mL／次，最后1 d，对照组腹腔注射生理盐水，其余各组腹腔注射CCl41 mL／kg［3］。16 h后乙醚麻醉打开胸腔取血，取肝脏。

1.4 血清ALT、AST、ALP测定大鼠打开胸腔后，从左心室直接抽5mL，37℃温浴10min，3 000 r／min离心10min，取上血清1 000μL，参照试剂盒的说明书测定ALT、AST、ALP。

1.5 肝匀浆SOD、CAT与MDA检测4℃生理盐水冲洗肝表面，称取0.5 g肝组织，加入9mL生理盐水，煎碎，研磨，制备5%的肝匀浆，2 000 r／min离心10 min，取上清1mL，4℃10 000 r／min离心15min，上清为胞浆待测。沉淀加入1 mL生理盐水，利用细胞超声破碎仪，制备成10%的线粒体匀浆待测。按SOD、MDA试剂盒操作说明，检测胞浆和线粒体中的SOD、CAT活性和MDA含量。

1.6 肝组织病理学观察肝组织学观察在同一部位切取1块肝组织，以10%甲醛固定后制备石蜡切片，HE染色，在光镜下观察肝组织变化。

1.7 统计学处理数据用均数±标准差（¯x±s）表示，SPSS 11.0软件进行完全随机方差分析（Oneway ANOVA），组间比较采用LSD法。

2 结果

2.1 北沙参对血清中ALT、AST、ALP活性的影响见表1。

2.2 北沙参对肝匀浆SOD、CAT与MDA含量的影响见表2。

表1 北沙参对CCl4所致肝损伤小鼠血清中ALT、AST及ALP活性的影响±s，n＝10）

表1 北沙参对CCl4所致肝损伤小鼠血清中ALT、AST及ALP活性的影响±s，n＝10）

注：与模型组比较，＃P＜0.05。

组别ALT／（U／L）AST／（U／L）ALP／（U／L）正常组41.7±3.6 66.50±5.3 96.50±5.3模型组156.4±10.2 210.40±13.7 301.60±14.6 EEAR 300／（mg·kg）130.1±7.3 150.40±11.6 220.30±12.5＃EEAR 300／（mg·kg）86.4±8.9 110.38±7.4＃160.42±13.3＃Silibinin 50／（mg·kg）71.6±6.4 91.90±7.2＃130.30±14.3＃

表2 北沙参对CCl4诱导大鼠肝组织中SOD、CAT及MDA含量的影响±s，n＝10）

表2 北沙参对CCl4诱导大鼠肝组织中SOD、CAT及MDA含量的影响±s，n＝10）

注：与模型组比较，＃P＜0.05。

组别SOD／（U／mL）CA／（U／mL）MDA／（mmol／mL）正常组101 2.3±15.3 92.30±18.3 7.5±1.1模型组69.8±10.7 62.56±11.3 11.7±1.6 EEAR 300／（mg·kg）88.4±12.8 68.50±12.6 9.3±1.2 EEAR 300／（mg·kg）96.8±14.4＃80.80±14.3＃8.3±1.4＃Silibinin 50／（mg·kg）106.2±13.6＃85.00±14.5＃8.0±1.4＃

结果与CCl4组比较，EEAR+CC4组胞浆中SOD、CAT的活性显著增加（P＜0.05），MDA的含量显著降低（P＜0.05），线粒体中的CCl4活性增加，MDA含量降低无显著差异；EEAR+CCl4组胞浆和线粒体中SOD、CAT活性均显著增加（P＜0.05），MDA含量降低无显著差异。

2.3 北沙参对肝组织变性坏死的影响光镜下可见正常对照组肝小叶结构正常，肝索结构清晰可辨，未见肝细胞变性、坏死等病理变化。模型对照组改变明显，肝小叶失去正常结构，肝细胞不同程度的坏死伴炎细胞浸润（中性粒细胞为主），嗜酸性增强，部分可见浊肿，体积增大，呈现气球样病变。阳性对照组、大剂量给药组与模型对照组比较上述改变有一定减轻。大剂量给药组炎性肝细胞明显减少，肝细胞脂肪变性明显好转，正常肝细胞数目增多。小剂量给药组效果较差。

3 讨论

CCl4在肝微粒体细胞色素P-450酶激活下产生活性自由基CCl3－，可进一步与氧反应，形成具有更强反应活性的CCl3O－，这些自由基与肝细胞内大分子发生共价结合，也可攻击肝细胞包膜不饱和脂肪酸发生脂质过氧化，损伤肝细胞膜的结构和功能，使膜通透性升高，导致细胞肿胀坏死，肝损伤是由多种病因引起并且可以有多种因素参与的复杂过程。CCl4长期作用后可导致胶原纤维沉积，可能是CCl4诱发肝纤维的机制之一。CCl4注射后可以发生部分肝被膜的破坏，被膜下组织出血，并可导致血纤维蛋白析出、以嗜酸性白细胞为主的炎性细润，还可以导致肝细胞发生空泡变性，并发生肝细胞坏死。本研究HE染色病理切片证实了北沙参乙醇提取物较CCl4组显著改善肝小叶变性、坏死的范围和程度。SOD和CAT是机体内清除自由基的特异酶类，其活性的降低表明机体内自由基产生的增加，其中CAT起着重要的作用。它们在体内具有清除有害过氧化物，减轻和阻断脂质过氧化链锁反应等作用。当自由基增加到一定程度时，清除自由基的特异酶类如SOD、CAT等的活性就降低，机体清除自由基的能力下降，造成自由基在体内堆积，脂质过氧化产物如MDA等增加，最终导致机体的脂质过氧化而致损伤。因此，北沙参乙醇提取物的保肝效应可能与提前预防给药增加了肝脏抗氧化的储备有关。

［1］中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京：化学工业出版社，2005：66.

［2］原忠，簟众，朱静娟，等.HPLC测定北沙参中腺苷的含量［J］.中国中药杂志，2005，30（17）：1391-1392.

［3］Ha KT，Yoon SJ，Choi DY.Protective effect of LyciuMchinense fruit on carbon tetrachloride－induced hepatotoxicity［J］.Journal of Ethnopharmacology，2005，96：529-535.

R285.5

A

1007－4813（2010）06－0828－02

2010－10－11）

金香男，女，大学本科。研究方向：肝病研究。

*通信作者：郑明昱，硕士，讲师。Tel：0433-2436025。