补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠脑组织NO及NOS的影响

宫健伟，叶蕾（滨州医学院，山东烟台264003）

补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠脑组织NO及NOS的影响

宫健伟，叶蕾
（滨州医学院，山东烟台264003）

目的观察补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织一氧化氮（NO）及其合酶（NOS）的影响。方法采取血管内栓塞阻断法制成大鼠脑缺血再灌注模型，比较补阳还五汤与尼莫地平对大鼠脑组织中的NO、NOS的变化。结果与假手术组比较，各组大鼠脑组织NO及NOS含量均不同程度降低；补阳还五汤组与尼莫地平组均较模型组显著增高NO及NOS含量，补阳还五汤组作用明显。结论补阳还五汤具有增加脑NO及NOS含量的作用。

补阳还五汤；脑缺血；一氧化氮；一氧化氮合酶；大鼠

脑卒中病具有高发病率和高病死率的特点，其中缺血性脑卒中约占脑卒中病人的70%以上。补阳还五汤出自清代医家王清任的《医林改错》，方由黄芪四两，当归尾一钱半，赤芍二钱，地龙、川芎、桃仁、红花各一钱等7味药物组成，具有补气、活血、通络作用，主治脑卒中后遗症，是中医临床上用于预防脑卒中和治疗脑卒中及后遗症的常用名方。现代药理研究证实，补阳还五汤具有改善脑循环、增加脑血流量、改善血流动力学、改善脑细胞能量代谢、抗氧化作用及抑制自由基的产生和灭活自由基、拮抗神经毒性作用、减轻炎症反应、促进神经干细胞增殖分化抑制神经细胞凋亡和调节神经递质或神经肽紊乱等多方面作用［1］。本实验采取血管内栓线阻断法制成经典的大鼠脑缺血再灌注模型（MACO模型），观察补阳还五汤对脑组织一氧化氮（NO）及其合酶（NOS）的影响。

1 材料与方法

1.1 动物及药物试剂清洁级SD大鼠，雌雄各半，体质量150～180 g，购自烟台绿叶制药股份有限公司。补阳还五汤液：按《医林改错》原方所载的各药（黄芪120 g，当归尾6 g，赤芍5 g，川芎、地龙、桃仁、红花各3 g），依据原书的用量比例，浸泡，进行水煎煮，煎煮30 min，过滤；再加水煎煮30 min，过滤，两次滤液合并，并浓缩成150%的液体（每毫升含原方生药1.5 g），冰箱保存备用。尼莫地平：天津制药厂，冰箱保存备用。水合氯醛：购自上海化学试剂公司生产，批号20070716；一氧化氮（NO）及一氧化氮合酶（NOS）试剂盒：由南京建成生物工程研究所提供（批号200801017）。

1.2 实验方法清洁级SD大鼠随机编号分为4组：假手术组，模型对照组，补阳还五汤汤液组，尼莫地平组，每组10只。

采取灌胃法，补阳还五汤按7.5 mL／kg的剂量进行灌胃；模型组及假手术组则分别给予等量的生理盐水进行灌胃；尼莫地平1 mg／kg术前30 min皮下注射。每日1次，连续7 d后，实施脑缺血再灌注造模。采取经典方法血管内栓线阻断法造成MACO模型［2-3］：以10%水合氯醛（0.4 mL／100 g）腹腔注射麻醉大鼠，颈部正中切口，沿气管两侧分离出左右颈总动脉（CCA），并在动脉下穿线备用。然后，迅速用套有硅胶的动脉夹夹闭双侧颈总动脉，造成急性脑缺血。以翻正反射消失，双侧瞳孔放大，呼吸加深但能自主呼吸为模型成功标志。30 min后开放CCA再灌注。假手术组所采用的方法与模型组相同，但不夹闭双侧颈总动脉的操作。脑缺血造模30 min后开放CCA再灌注2 d后，立即迅速断头取脑。在冰浴中取左侧大鼠大脑从额极后3 mm取脑，用冰磷酸盐缓冲液冲洗后置液氯保存待测。指标测定时脑组织用冰磷酸盐缓冲液制成10%脑组织匀浆，3 500 r／min于4℃离心15min，分离上清液，分别测定NO及NOS含量。具体按试剂盒操作步骤的要求测定。

1.3 统计学分析采用SPSS 12.0统计软件进行统计学处理，实验结果以均数±标准差±s）表示，统计分析用t检验。

2 结果

模型组大鼠脑组织NO和NOS含量明显低于假手术组；补阳还五汤组大鼠脑NO及NOS含量均不同程度低于假手术组，而高于模型组，且有统计学意义。见表1。

表1 对脑组织中NO、NOS含量的影响±s）μmol／g

表1 对脑组织中NO、NOS含量的影响±s）μmol／g

注：与假手术组比较，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01；与模型组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。

组别n NO NOS假手术组10 3.68±1.03 12.67±1.43＃＃模型组10 1.51±1.31＃＃8.96±1.04＃＃补阳还五汤组10 2.73±0.74＃▲10.02±0.94＃＃▲▲尼莫地平组10 2.58±0.81＃▲9.64±1.28＃＃

3 讨论

补阳还五汤是清代著名医家王清任创立的益气活血之代表方剂，方中重用黄芪大补元气，取其“气旺而促进血行”，血畅则络脉通，从而治疗气虚血瘀络阻的各种疾病。近年来报道用补阳还五汤治疗缺血性脑血管病均取得了较好的疗效。研究表明，缺血再灌注是大多数缺血性脑血管病的病理生理过程，而引起缺血再灌注损伤的机制比较复杂，至今尚未彻底阐明［4］。

NO是一种具有多种生物活性的气体小分子，其主要生理作用是扩张血管、促进免疫、抗血栓形成等。研究表明，固有型NOS（cNOS）在基础条件下起作用，产生的NO对脑循环起重要的调节作用；而诱导型NOS（iNOS）在基础条件下不起作用，在缺血时表达并产生高浓度的NO，从而加速能量消耗，损伤DNA，导致神经细胞死亡。脑组织在遭受缺血性刺激时，NO浓度和NOS活性常明显升高，特别是在缺血再灌注早期，是引起缺血性脑损伤的主要因素之一［5］。可见，NO既具有潜在的有益作用，又有毒性作用，NO浓度升高主要发生在缺血早期，此时对神经细胞产生毒性作用，而在再灌注后期，NO对脑血流等具有有益调节作用。本研究发现，在再灌注48 h后，脑组织NO含量降低，NOS活性降低，表明此时脑组织内NO合成障碍。给予补阳还五汤后，可对抗再灌注后期NO含量和NOS活性的降低。总之，本研究表明，在脑缺血后再灌注48 h，脑组织NOS活性降低，NO合成减少。补阳还五汤对脑组织能量代谢具有一定的调节作用，并可增加NOS活性，促进NO合成，提示该方有对抗脑缺血、保护脑组织的作用。

［1］王敏，邓长青.补阳还五汤抗脑缺血作用的研究概况与展望［J］.湖南中医学院学报，2000，20（4）：71-72.

［2］陈奇.中药药效研究思路与方法［M］.北京：人民卫生出版社，2005：219.

［3］Longa E Z，Weinstein P R，Carisons，et，al.Reversible middle cerebral arteryocclusion without craniectomy in rats［J］.Stroke，1989，20（1）：84-91.

［4］吴基良，刘超.补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用［J］.中国老年学杂志，2004，24（6）：552.

［5］Hangai M.er al.Inducible Nitric Oxide Synthase in Retinal Ischemia2 Reperfusion Injury［J］.Exp Eye Res，1996，63（5）：501-509.

R285.5

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1007－4813（2010）06－0819－02

2010－08－04）

宫健伟（1978－），男，硕士，讲师。研究方向：古今名方的临床与实验研究。