二参汤对大鼠心肌缺血兴奋性氨基酸损伤的保护作用

王亚平，周丽雅（.德惠市中医院，吉林德惠33000；.长春中医药大学，吉林长春307）

二参汤对大鼠心肌缺血兴奋性氨基酸损伤的保护作用

王亚平1，周丽雅2
（1.德惠市中医院，吉林德惠133000；2.长春中医药大学，吉林长春130117）

目的利用垂体后叶素腹腔注射造成大鼠心肌缺血模型，观察二参汤对大鼠心肌缺血的保护作用。方法将60只Wistar大鼠分为正常对照组，模型组，二参汤低、中、高剂量组，肠溶阿斯匹林组，观察二参汤对各组大鼠心电图、血清及心肌组织兴奋性氨基酸的影响及心肌组织病理变化。结果二参汤可以对抗垂体后叶素腹腔注射造成大鼠心肌缺血损伤，使心肌缺血大鼠的心电图ST段异常升高数减少，二参汤可使血浆和心肌组织Glu、Asp含量降低，表明二参汤可防止EAA的升高。结论二参汤对大鼠心肌缺血有保护作用，其机制可能与抗脂质过氧化反应有关。

二参汤；心肌缺血；兴奋性氨基酸；大鼠

本实验通过中药二参汤对大鼠心肌缺血抗脂质过氧化损伤的保护作用的研究，观察二参汤对各组大鼠心电图、血清及心肌组织谷氨酸（GLU）及天冬氨酸（Asp）的影响及心肌组织病理变化以验证二参汤对大鼠心肌缺血的保护作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物与药物Wistar大白鼠60只，体质量（250～300）g，8～10周龄，雄性，购自长春开发区实验动物中心。二参汤（黄芪、党参、丹参、川芎、降香、麦冬、五味子、木香、薤白、三七、水蛭、甘草）、垂体后叶素、谷氨酸（GLU）、天冬氨酸（Asp）测试盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.2 实验方法将大鼠随机分为6组，每组10只：正常对照组，用10 mL／kg蒸馏水灌胃；模型组，用10 mL／kg蒸馏水灌胃；二参汤低、中、高剂量组，用浓度分别为50，200，400 g／L的二参汤10 mL／kg灌胃；肠溶阿斯匹林组，用浓度为3.33 g／L的肠溶阿斯匹林10mL／kg灌胃。连续灌胃14 d后，除正常对照组外，其余5组大鼠用垂体后叶素（Pit）20 U／kg腹腔注射造成心肌缺血模型。各组在给与垂体后叶素前后均描记心电图。24 h后全部大鼠用20%乌拉坦10mL／kg腹腔注射麻醉，进行指标测定。

1.3 指标测定（1）麻醉后，将大鼠仰卧位固定，四肢皮下插入针状电极及胸前电极，每只大鼠先做心电图。各组动物均记录正常Ⅱ导联，测定用垂体后叶素ST段异常偏移总毫伏数（∑ST）、每组出现ST段异常的动物数及ST偏移的平均值，作为判断心肌缺血程度和药物疗效的指标。（2）模型成功后，剖腹，自腹主动脉无菌取血，在4℃条件下3 000 r／min离心10min，分离血清置于－70℃冰箱待测。（3）模型成功后，大鼠于腹主动脉取血后立即冰面上快速取心肌组织，平行于冠状沟均匀地将心室部分横断成5份，取其2份放入2mL预冷4℃的生理盐水中，用玻璃匀浆器制备心肌组织匀浆，镜下观察到细胞磨破，取10%匀浆上清加生理盐水，按1∶9制成10%匀浆液，3 500 r／min离心15 min，取上清－70℃冻存作相关检测。（4）大鼠处死后，取其余心肌组织进行病理学检查。

1.4 统计学分析所有数据经SAS软件包处理，数据以均数±标准差（¯x±s）表示，所得数据作方差齐性试验后作配对t检验，P＜0.05有统计学意义。

2 实验结果

2.1 对心肌缺血大鼠心电图ST段偏移的影响见表1。

表1 对心肌缺血大鼠Ⅱ导联ST偏移的影响（±s，n＝10）

表1 对心肌缺血大鼠Ⅱ导联ST偏移的影响（±s，n＝10）

注：与正常对照组比较，△P＜0.05；与模型组比较，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01。

组别∑ST／mV ST 段异常偏移n mV正常对照组0.08 6 0.013±0.020模型组1.75 10 0.228±0.150△肠溶阿斯匹林组1.67 9 0.216±0.140二参汤大剂量组0.15 4 0.021±0.012＃＃二参汤中剂量组0.28 5 0.056±0.080＃二参汤小剂量组0.37 7 0.078±0.040＃

2.2 对心肌缺血大鼠血清及心肌组织兴奋性氨基酸的影响见表2。

表2 对心肌缺血大鼠血清及心肌组织兴奋性氨基酸的影响（¯x±s，n＝10）（μmol／g）

2.3 心肌组织病理学观察心肌组织切片经HE染色，参照Rona等［1］方法对心肌病理损伤程度进行分级分析。正常对照组心肌细胞未见明显变性与坏死，为0度；模型组见心肌组织呈灶性坏死，偶见灶间相互连接，部分心肌细胞收缩带形成，组织病理损伤程度为Ⅱ～Ⅲ度，病理改变多位于心尖部心内膜下层；二参汤各组也可见心肌坏死灶的形成，但多为点片状坏死，病理损伤程度多为Ⅰ度。

3 讨论

兴奋性氨基酸主要是指谷氨酸（Glutamate，Glu）和天冬氨酸（Asparate，Asp）。心肌缺血时大量释放的EAA尤其是Glu对心肌的损伤起关键作用。因缺血后ATP降解，依赖能量而重吸收Glu的机制衰竭，影响Glu摄取功能，甚至出现Glu向细胞外液转移，如此恶性循环，突触间隙持续高浓度的Glu就引起兴奋性神经毒性［2］。

本研究表明，模型组Glu和Asp含量明显增加，表明EAA的兴奋毒性参与了心肌缺血细胞损伤和迟发性神经损伤的发生过程。在研究中，给予二参汤可使血浆和心肌组织Glu、Asp含量降低，表明二参汤可防止EAA的升高［3-4］。

［1］Rosa G.An infact-likemyocardial lesion and other toxicmanifestations produced by isoproterend in the rat［J］.Arch Pathol LabMed，1959，67：43.

［2］陈维洲，芮耀诚.脑血管疾病基础与临床研究［M］.济南：山东科技出版社，1993：12-25.

［3］Muir KW，Lees KR.Clinica experience with excitatory aMino acid antagonist drugs［J］.Stroke，1995，26（3）：5026.

［4］Rogawski MA.The NMDA receptor，NMDA antagonists and epilepsy therapy［J］.Drugs，1992，44（3）：279.

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