乳腺组织恶性肿瘤中 bFGF和 MVD的表达及意义

王 新,许秋实,李 壮,王 博,周 昱

(1.佳木斯大学附属第一医院肿瘤科,黑龙江 佳木斯 154003;2.佳木斯大学2007级研究生,黑龙江 佳木斯 154007)

碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)是目前认被为最具有活性的血管生长因子之一。而在乳腺组织中其恶性肿瘤的生长及转移很大程度上赖于滋养血管产生、生长。研究表明滋养肿瘤的血管生成是依赖于各种相关生长因子的诱导和调节,其生长状况可以视为是调节血管生成的正、负性因子相互作用相互制衡所产生的最终结果,而微血管密度(mi—crovesseldensity,MVD)值则是反映血管生成强度最关键指标之一[1]。本研究即从此观点出发使用 SP免疫组织化学方法检测乳腺组织恶性肿瘤中 bFGF的表达、并通过对 MV D值进行相对定量观察,探讨 bFGF的高表达同两种主要乳腺恶性肿瘤血管生成之间的相互关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选材2005— 06～ 2009— 06在佳木斯大学附属第一医院手术切除并经病理证实的原发性乳腺癌组织石蜡包埋标本285例。病人均系女性,年龄25～ 73岁,平均为 49岁。组织病理学分类浸润性导管癌198例,浸润小叶癌87例。病例均行改良根治手术,术前病人均未行过放疗,化疗及其他抗肿瘤治疗。所有标本经5%～ 10%甲醛溶液固定,石蜡包埋,制成4μ m厚连续切片、HE染色。

1.2 选用试剂

bFGF ELISA Kit Wako(碱性成纤维细胞生长因子bFGF-ELISA试剂盒)来自上海锐聪科技发展有限公司。CD34单克隆抗体来自众磊(北京)生物科技发展有限公司。抗原修复缓为0.01mol/L枸橼酸盐缓冲液(pH6.0)。

1.3 实验方法

该实验选取的组织经石蜡包埋,制成厚约4微米的连续切片。采用 SP法免疫组织化学染色,二氨基联苯胺显色,在染色过程中以含0.05%吐温-20的 pH7.4的磷酸盐缓冲液代替一抗作阴性对照,用已知的 bFGF表达为阳性的癌组织切片做阳性对照[2]。

1.3.1 bFGF结果判定[3]

已知 bFGF阳性物质定位于细胞膜。观察结果后选用Fromowitz阳性细胞半定量分级法(即采用染色强度记分与阳性细胞数量百分比记分相加之和的标准 )(A)选取染色最明显的部位根据染色深度不同分别进行计分,不着色部分记为0分;淡黄色、较之背景色稍高记为1分;棕黄色、较之背景色明显增高记为2分;棕褐色或强烈着色者记为3分。(B)阳性细胞数量计分标准则是:＜5%记为0分,6%～ 25%记1分,26%～ 50%记为2分,51%～ 75%记为3分,＞ 75%记为 4分。最后将染色强度记分与阳性细胞数量百分比记分相加之和再分为 4级:强阳性 (+++)6～ 7分 ,中等阳性 (++ )4～ 5分 ,弱阳性 (+ )2～ 3分 ,阴性 (一 )0～ 1分。

1.3.2 MV D结果判定[4]

选取 Weidner的方法判断是否阳性标准已知 CD34抗体存在于乳腺组织恶性肿瘤间质血管中的内皮细胞(EC)胞浆中,如果出现棕黄色颗粒则视为表达阳性,不出现棕黄色颗粒则视为表达阴性,根据 Weidner所选用的方法即在一百倍的卡尔.蔡司的显微镜光学镜头下确定微血管分布密度最大的部分,在两百倍的卡尔.蔡司的显微镜光学镜头视野下观察累计5个不重复视野中含有 CD34着色血管数目,所得的平均数即可认为是 MV D值,选用均数标准差表示结果。

1.4 统计学处理

使用 SPSS11.0软件包统计实验结果,分别应用方差分析法,独立样本的 t检验进行统计学分析。

2 结果

2.1 浸润性导管癌中 bFGF阴性与阳性的肿瘤微血管密度值比较

在浸润性导管癌中肿瘤微血管密度值在肿瘤细胞 bFGF呈阴性组和其它三组 bFGF阳性组间存在明显差异(P ＜0.05),阳性组 MVD值高于阴性组,且呈正相关且有统计学意义(相关系数0.64,P ＜0.05),见表1。

表1 在浸润性导管癌中 bFGF阴性与阳性的肿瘤微血管密度值比较

2.2 浸润性小叶癌中 bFGF阴性与阳性的肿瘤微血管密度值比较

在浸润性小叶癌中肿瘤微血管密度值在肿瘤细胞 bFGF呈阴性组和其它三组 bFGF阳性组间存在明显差异(P ＜0.05),阳性组 MVD值高于阴性组,且呈正相关且有统计学意义(相关系数0.57,P ＜0.05),见表2。

表2 在浸润性小叶癌中 bFGF阴性与阳性的肿瘤微血管密度值比较

2.3 两种恶性肿瘤 bFGF呈阳性组 MV D对比

在浸润性导管癌中 bFGF呈阳性组和在浸润性小叶癌中 bFGF呈阳性组 MVD综合统计情况,由于两个实验组样本量不同,且均属于正态分布,使用独立样本的 t检验,t= 0.456,P＞ 0.05两种乳腺组织恶性肿瘤 bFGF表达阳性组间 MV D表达无明显差别。见表3。

表3 两种恶性肿瘤 bFGF呈阳性组 MVD对比 ±s)

表3 两种恶性肿瘤 bFGF呈阳性组 MVD对比 ±s)

3 讨论

bFGF碱性成纤维细胞生长因子是含155个氨基酸的促有丝分裂的阳离子多肽家族中的一员,该家族成和员受体一般具有酪氨酸激酶的活性,其生物学效应是通过特异性地结合细胞表面上的相应受体发挥传递信息作用。其功效主要是在起源于神经外胚层和中胚层的骨骼肌细胞、纤维母细胞和骨细胞等,该家族的受体相应的也特异地分布于上述细胞表面。受体至少有4种形式,由细胞外区、跨膜区、胞浆区的近膜区和酪氨酸激酶区等结构组成[5]。由于每种 FGF受体均能和 FGF家族每个成员结合,而不同 bFGF受体的表达存在着组织细胞特异性。bFGF与受体亲和力显著大于酸性 FGF(aFGF)。而这些途径调节着内皮细胞的增殖、迁移和分化 ,最终能导致血管的形成[6]。通过本次实验可得出结论,研究结果提示:bFGF参与并促进乳腺癌微血管的形成,并且其高表达可能与促进肿瘤的生长、侵袭和转移有关。本实验发现,在乳腺的恶性肿瘤中组织中肿瘤微血管密度值在肿瘤细胞bFGF呈阴性组和其它三组 bFGF阳性组间存在明显差异(P ＜0.05),阳性组 MVD值高于阴性组,且呈正相关且有统计学意义(相关系数0＜r＜1,P＜0.05)而且呈正相关关系结论,通过研究进一步研究证实在乳腺组织不同的病理类型中碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)与肿瘤微血管密度值之间所表现的差异具有普遍性,即可证实 bFGF在乳腺组织恶性肿瘤中的普遍的高表达特性与肿瘤血管生成有相关性;因此足以认为 bFGF可能成为判断乳腺组织生物学行为及预后的重要指标之一。目前认为,肿瘤的发生发展是多基因协同作用的结果。本研究结果表明:bFGF受体与乳腺癌组织血管生成有密切的关系性,然而成纤维细胞生长因子与肿瘤微血管密度值之间是如何相互联系相互影响的以及在乳腺恶性肿瘤不同病理分型中的不同生理作用值得进一步探讨,如能在临床病理工作中开展 bFGF受体检测将会对指导临床治疗、预测患者的预后有着相当深远的意义[7]。

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