基层医院HIV抗体测定室内质控初探

2010-06-09丁顺娥

中国医药指南 2010年25期

丁顺娥施炜

宜兴市周铁医院检验科（214261）

随着艾滋病流行形势的日趋严峻，新发现的感染者数量在成倍增加，艾滋病的检测也显得非常重要，国内检测HIV抗体的方法主要是酶联免疫法，而其检测结果受到试剂的质量，检验人员的操作水平以及实验室的操作条件如仪器的稳定性、试剂盒的质量、加样操作、孵育温度、显色时间等诸多因素的影响，为保证检测结果的稳定性、准确性，对艾滋病实验室进行全面的质量评价是必不可少的，多年以来，基层医院检验科对ELISA法检测HIV抗体的室内质控一直不够重视，认为不像生化定量那样有具体直观的数据，且试剂盒内已有阴阳性对照、结果明了，认为没有必要和没有好办法进行质控。众所周知，Levey-Jenings质控图法都必须检测20次，方可绘制质控图，其周期较长，一些不是每天检测的如HIV抗体的检测等项目的检测质控都会遇到困难，在基层实验室尤为如此，为此，本室采用即刻法质控与Levey-Jenings质控图法相结合的方法实现室内质控，即将同一批外部质控血清连续测定3次后，对第3次到第20次的所有检验结果进行即刻法质控，20次以后采用Levey-Jenings质控图法进行质控。

1 材料与方法

表1 HIV抗体即刻法质控自动判断表[2]

1.1 仪器与试剂

北京普朗新技术有限公司酶标仪DNM9602A，美国宝特ELX-50型洗板机，英科新创科技有限公司HIV（双抗原夹心酶联免疫法）ELISA抗体诊断试剂盒。

1.2 方法

1.2.1 首先必须购买同一批号的试剂盒两盒以上，将同一批号的每盒内阳性对照血清各吸400μL进行混合，然后因为本实验临介值（CO）为0.15，按照HIV抗体弱阳性（S/CO=2.0～2.9）的标准，以及弱阳性质控的标本的光密度应是临介值的2～3倍，稀释后弱阳性的质控标本光密度应在0.3～0.45，为此，本室将阳性对照混合血清用正常人体检者血清（即乙型肝炎两对半和HIV抗体阴性）进行1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶24、1∶32稀释[1]，然后56℃加热30min灭活处理，每一个稀释度吸两孔，与标本一起检测，得出最适稀释度为1∶24，将阳性对照混合血清用正常人血清稀释后，按每天试验用量分装，标记，封口，-20℃保存于非自动除霜冰箱中，和标本一起检测，得到第一次和第二次的光密度值分别是0.352、0.370，S/CO值分别是2.33、2.46。

2 结果

2.1 将质控血清的测定值按测定次数从小到大排列

计算时OD值按X1、X2、X3、X4……，Xn，X1为最小值，Xn为最大值（表1）。

2.3 计算SI上限值和SI下限值。

2.5 将SI上限，SI下限与上表中n2s和n3s值中的数值比较。

2.5.1 当SI上限和SI下限，＜n2s时表示处于控制范围内，可以继续测定，继续重复以上各项计算。当SI上限和SI下限有一值处于n2s～n3S时说明该值在2S～3S范围，处于告警状态。当SI上限和SI下限有一值＞n3s值时说明该值已在3S范围之外，属失控[3]。

2.5.2 绘制质控图

根据外部对照质控血清连续检测20次所测得的S/CO值计算出χ—平均值±2S，以试验日期为横坐标，以S/CO值为纵坐标绘制质控图。从第21日起，将每次质控血清的检测结果（S/CO值）依次绘入该质控框架图中，检验进入Levey-Jenings质控图状态。

2.6 从表1可以看出，即刻法质控与Levey-Jenings质控图法质控的标准差、平均值、变异系数分别是0.061（0.056）、2.40（2.397）、2.3%（2.5%），t=0.5907，P＞0.05，说明两种方法数据构成的样本的平均值差异不明显，两种方法的结合对艾滋病实验室的质量控制是可行的，弥补了彼此的不足，特别是能对第3次到第20次的检测进行质量控制，经过1年多的观察，外部质控血清稳定性良好。