NCCLS评价酶循环法测定β-羟丁酸及临床意义

丁继红 常文青

β-羟丁酸(beta-hydroxybutyrate)是酮体的主要成份，占酮体的78%，在肝脏内合成，经肝外组织利用［1］。由于β-羟丁酸在酮体中所占比例最大，所以它可代表酮体的含量。酶法测定的特异性好、检测简便、反应温和、无污染，因此β-羟丁酸测定多采用酶法。随着临床化学的发展出现了一种更加灵敏的测定技术—酶循环法，酶循环法是利用酶的底物特异性来放大靶物质的测定方法。此法仅循环靶物质，减少了样品中存在的其他物质对测定的干扰，因此不需要对样品进行预处理或对靶物质的提取。该法不需要专门的设备，是种前景广阔的测定技术［2］。针对传统方法学评价中的一些不足与缺陷，美国国家标准实验室标准化委员会(national committee for clinical laboratory standards，NCCLS)制定了标准化文件，用以对临床方法的评价。本文拟用NCCLS评价酶循环法检测2008年3至9月来我院体检人员和患者血清中β-羟丁酸的含量，并探讨了β-羟丁酸检测的临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 对照组为门诊体检健康者60例，男30例，女30例;年龄18～65岁;各项理化指标均正常;糖尿病无酮症组40例，男20例，女20例;年龄40～68岁;诊断符合WHO糖尿病诊断标准;糖尿病酮症酸中毒组9例，男5例，女4例;年龄42～63岁;血糖 ＞25mmol/L，血 pH 值 ＜7.2，CO2分压明显降低，CO2结合力＜12mmol/L，血钠降低，尿酮(++～+++)。

1.2 材料与方法

1.2.1 仪器与试剂:东芝TBA120FR全自动生化分析仪;酶循环法β-羟丁酸测定试剂盒RANDOX标准品宁波亚太生物技术有限责任公司生产。

1.2.2 仪器参数设定:主波长500 nm，副波长700 nm，校准方式线性，反应方向上升，温度 37℃，R1试剂 240 μl，R2试剂60 μl，样品量 10 μl，反应时间 10min，测定点 22-28，标准液浓度1mmol/L。

1.2.3 准确性试验:用RANDOX标准液做回收试验。取2份0.9ml的混合血清，分别加入0.1ml的 1mmol/L(样品1)和4mmol/L(样品2)的 RANDOX标准液，测定 β-羟丁酸的回收率。

1.2.4 精密度试验:将1mmol/L β-羟丁酸倍数稀释三个浓度的样本，取高、中、低值3个不同β-羟丁酸水平样本，每天测定2次(上午下午各1次，2次间隔时间＞3 h)每次测定均作双份，连续测定20 d。

1.2.5 线性试验:取4mmol/L的β-羟丁酸标准品和混合血清按 0∶4，1∶3，2∶2，3∶1、4∶0比例混合，制备 5 个不同 β-羟丁酸水平的标本，各测定4次。

1.3 统计学分析 应用SPSS 10.0统计软件，采用NCCLS标准化文件，EPO5-A文件用于精密度评价，EP06-A文件进行线性评价，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 准确性试验 经过试验，得出数据，见表1。

表1 样品回收率

2.2 精密度试验 采用NCCLS EP05-A文件进行精密度试验分析，见表2。

表2 精密度试验结果

2.3 线性分析 采用NCCLS EP06-A文件进行线性分析，本法线性回归分析方程为 Y=1.0095 X=0.0573，r=0.9958。稀释变异试验(P ＜0.05)，线性失拟检查G(P ＜0.05)，表明β-羟丁酸在4mmol/L范围内线性良好。

2.4 3组临床标本测定 对照组和糖尿病无酮症组标本含量与糖尿病酮症酸中毒组进行比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表 3。

表3 循环酶法测定3组临床标本结果

3 讨论

正常情况下，肝内产生的酮体可被肝外组织充分利用，血清中的酮体含量不高，但在糖尿病时，由于糖不能被补充利用，脂肪动员加强，产生的酮体超过肝外组织的利用量，致使血清中酮体增加，产生酮血症，导致患者酸碱失衡及电解质紊乱，不易纠正且病死率高［3］。在2型糖尿病患者中，酮症酸中毒非常常见，临床上常以尿常规检测酮体的方法进行诊断，此法方便易行，但由于尿试纸带中的酮体检测模块主要反映的是乙酰乙酸，无法与β-羟丁酸进行反应，而部分糖尿病酮症酸中毒的患者早期尿液中是以β-羟丁酸为主，此时容易造成漏检，而且当患者无尿或肾功能严重损坏，肾血循环障碍，肾小球滤过率下降，此时尿酮体可减少或消失，也无法通过尿液判断患者酮症酸中毒的状况。因此，测定血中β-羟丁酸对诊断糖尿病酮症酸中毒是十分必要的。

1 雷鸣.血清β-羟丁酸的测定及临床应用.中国实验诊断学，2008，12:1050-1051.

2 杨昌国，许叶.酶循环法及其在酶法分析中的应用.临床检验杂志，2009，11:310-311.

3 王冬环，赵月霞.D-3-羟丁酸检测与临床应用.临床和实验医学杂志，2006，5:142-143.