苍术中非法添加硫酸阿托品及氢溴酸东莨菪碱的检测方法

毛谊平，任荣军，吴高芬

(湖南省岳阳市药品检验所，湖南 岳阳 414000)

苍术为菊科植物茅苍术 Atractylodes lancea(Thunb.)DC.或北苍术 Atractylodes chinensis(DC.)Koidz.的干燥根茎[1]，为芳香化湿类中药，性味辛、苦，温而无毒，具燥湿健脾、祛风除湿之功能，是湿困脾胃之专药。其临床应用范围较广，内外湿邪患者均可使用，并可配伍其他方药治疗胃脘痛、泄泻、感冒、痹症等疾病，效果较好[2]。近年来，我市有不少患者在使用苍术后出现轻重不同的“阿托品中毒”样现象，表现为面部潮红、口干舌燥、视物不清、手掌发红或有紧胀感、身烦热、头昏头痛、小便淋漓不畅等症状，影响了患者疾病的及时有效治疗，也对其身心健康造成了一定的危害。经我所抽样研究，检出苍术药材中掺有硫酸阿托品及氢溴酸东莨宕碱。笔者采用薄层色谱(TLC)法及高效液相色谱(HPLC)法建立了中药苍术中非法添加硫酸阿托品及氢溴酸东莨菪碱的定性定量检测方法，报道如下。

1 仪器与试药

岛津20AT液相色谱仪(DAD检测器，solution色谱工作站);Mettler Toledo XS－105型分析天平;JAC－400型济宁奥波超声仪。硫酸阿托品对照品(供含量测定用，批号为110805－200306)，氢溴酸东莨菪碱对照品(供含量测定用，批号为10000492－200308)均来自中国药品生物制品检定所;苍术药材由湖南省岳阳市中医医院提供;乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 TLC 鉴别

取本品粉末5 g，加浓氨试液4 mL，混匀，加三氯甲烷30 mL，摇匀，超声 30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1 mL使溶解，作为供试品溶液。取苍术对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。取硫酸阿托品对照品、氢溴酸东莨菪碱对照品，加甲醇制成每1 mL各含4 mg的混合溶液，作为对照品溶液。照TLC法[2005年版《中国药典(二部)》附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯－甲醇－浓氨试液(17∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，对照药材溶液则无此斑点(图1)。

图1 薄层色谱图

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件

色谱柱:phenomenex Luna C18柱(200mm×4.60mm，5μm);流动相:0.07 mol/L磷酸钠溶液(含0.0175 mol/L十二烷基硫酸钠，用磷酸调节pH至6.0)－乙腈(70∶30);检测波长:216 nm;柱温:30℃;流速:1.0 mL/min。理论塔板数按氢溴酸东莨菪碱及硫酸阿托品峰计算均应不低于3 000。

2.2.2 溶液制备

精密称取氢溴酸东莨菪碱及硫酸阿托品对照品适量，分别加流动相溶解并制成每1 mL各含0.5 mg的混合对照品溶液，即得对照品溶液(东莨菪碱质量为氢溴酸东莨菪碱的1/1.445)。取本品粉末(过 3号筛)约1 g，精密称定，置锥形瓶中，加入2 mol/L盐酸溶液10 mL，超声处理30 min(功率250 W，频率 40 kHz)，放冷，滤过，滤渣和滤器用2 mol/L盐酸溶液10 mL分数次洗涤，合并滤液和洗液，用浓氨试液调节pH至9，用三氯甲烷振摇提取4次，每次10 mL，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣用流动相溶解并转移至5 mL量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。取苍术对照药材约0.5 g，按供试品溶液制备方法同法制成对照药材溶液。

图2 高效液相色谱图

2.2.3 方法学考察

干扰试验:分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、对照药材溶液各10 μL，按2.2.1项下色谱条件进样分析。结果，供试品溶液色谱图上在与对照品溶液相应位置有保留时间一致的色谱峰，氢溴酸东莨菪碱及硫酸阿托品对照品的保留时间分别约为20 min及34 min，而对照药材溶液在此保留时间无色谱峰。高效液相色谱图见图2。

标准曲线绘制:分别精密称取氢溴酸东莨菪碱及硫酸阿托品对照品 24.62，25.34 mg，置 50 mL 量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件测定，分别进样 4，8，12，16，20 μL，测定峰面积积分值。以对照品质量浓度为横坐标、峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，氢溴酸东莨菪碱及硫酸阿托品回归方程分 A=851.4 C+42.17(r=0.999 8)和 A=968.2 C+32.43(r=0.999 7)。结果表明，氢溴酸东莨菪碱及硫酸阿托品进样量分别在1.97 ～9.85 μg和 2.03 ～10.15 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

精密度试验:精密量取标准曲线绘制项下混合对照品溶液20μL，依法连续进样6次。结果氢溴酸东莨菪碱及硫酸阿托品峰面积的 RSD分别为0.82%和1.01%(n=6)。表明仪器精密度良好。

重复性试验:取同一批掺伪样品1.0 g，精密称定，依法制备供试品溶液并测定含量。结果氢溴酸东莨菪碱及硫酸阿托品含量分别为 2.3 mg/g 和 5.6 mg/g， RSD 分别为 0.92% 和 1.36%(n=6)。表明方法重现性良好。

加样回收试验:取已知含量的同一样品1 g共6份，精密称定，分别添加氢溴酸东莨菪碱及硫酸阿托品对照品，依法制备供试品溶液至“回收溶剂至干”，残渣用流动相溶解并转移至10 mL量瓶中，稀释至刻度，摇匀，依法进样分析。结果见表1。

表1 氢溴酸东莨菪碱及硫酸阿托品加样回收试验结果(n=6)

检测限测定:取氢溴酸东莨菪碱及硫酸阿托品对照品适量，加流动相适量溶解并逐步稀释，按上述色谱条件测定，结果氢溴酸东莨菪碱及硫酸阿托品最低检测质量浓度分别为0.131 μg/mL和0.586 μg/mL(S/N=3)，最低检测量分别为 1.31 ng 和 5.86 ng。

2.2.4 样品含量测定

取3批不同批号的掺伪样品，按2.2.2项下方法制备供试品溶液，按2.2.1项下色谱条件分别进样测定，外标法计算含量。结果掺伪样品中氢溴酸东莨菪碱及硫酸阿托品的平均质量分数分别为 0.23% 和 0.56% 。

3 讨论

文献报道的流动相有甲醇－水(53∶47，水中含20 mmol/L醋酸钠，0.02% 三乙胺，0.3%四氢呋喃，pH 为 6.86)[3－4]，0.02 mol/L醋酸钠溶液(含0.02%三乙胺，用醋酸调pH至7.0)－甲醇(48∶52)[5]，甲醇 －水(40 ∶60，水中含 0.02 mol/L 醋酸钠、0.02% 三乙胺、用冰醋酸调 pH 至 6.0)[6]，以 0.07 mol/L 磷酸钠溶液(含0.017 5 mol/L十二烷基硫酸钠，用磷酸调节pH至6.0)－乙腈(70∶30)[1]。为确定流动相的组成及比例，对含适当离子对浓度的甲醇－缓冲液、乙腈－缓冲液等系统进行了比较。结果发现，流动相为甲醇－缓冲液系统时，柱压很高;且因检测波长216 nm属于低紫外区，甲醇的末端吸收较大，易干扰检测，故选择乙腈－缓冲液系统。

对该色谱检测方法还进行了耐受性试验，考察流动相pH、组成比例等对色谱分离的影响。结果表明，pH为3.0～6.0时，待测成分的峰形及分离度均较好。pH越低，其保留时间越短，分离度越小。pH为6.0、组成比例为30∶70时，峰形及分离度较好，且准确可靠，方法重现性好。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:111，188.

[2]罗熙财.服含苍术复方煎剂出现阿托品中毒样现象[J].中国中药杂志，2000，25(11):32.

[3]陆 霞，李 华，阮桂平.心宝丸中硫酸阿托品与氢溴酸东莨菪碱的含量测定[J].中药材，2002，25(5):353 －354.

[4]朱月琴，张 弦，殷放宙.HPLC法测定洋金花及其总生物碱中东莨菪碱的含量[J].海峡药学，2006，18(1):95－97.

[5]柴金玲，李 瑛，李 伟，等.HPLC法测定洋金花中东莨菪碱的含量[J].药物分析杂志，2006，26(5):634－636.

[6]侯士果，谷学新，王书妍，等.HPLC测定洋金花中东莨菪碱和阿托品的含量[J].中国中药杂志，2006，31(13):1 065－1 067.