高效液相色谱法测定小儿氨酚烷胺颗粒中咖啡因含量

小儿氨酚烷胺颗粒是由对乙酰氨基酚、咖啡因、扑尔敏、人工牛黄组成的复方制剂，常用于儿童伤风感冒引起的鼻塞、咽喉痛、头痛、发热等[1,2]。咖啡因主要限于配制复方制剂，常与对乙酰氨基酚合用，能增强镇痛作用，用于治疗一般性疼痛。咖啡因具有刺激心脏、强心利尿、提神醒脑、兴奋中枢神经、扩张血管、增强胃分泌等生物活性，但一次服用过多会产生恶心、呕吐、烦躁不安、肌肉震颤、抽搐、惊厥等症状,已被列入第一类精神药品管制范围。对成人感冒药中咖啡因含量的测定已有报道[3，4]。作者在此建立了一种快速检测小儿感冒药中咖啡因含量的高效液相色谱法，并取得满意效果。

1 实验

1.1 材料、试剂与仪器

小儿氨酚烷胺颗粒(批号:20100203、600579014100103、 10013153、 0910052)，购自药店。

咖啡因对照品，纯度>99%，TLC检验为一单纯斑点，由宝鸡文理学院化学化工系有机化学实验室提供。

甲醇，色谱纯,美国Methanex公司；娃哈哈纯水。

Agilent 1200型高效液相色谱仪、G1328B型二级管阵列检测器，美国安捷伦公司；KQ5200E型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；DZF-1型电热恒温鼓风干燥箱，上海一恒科学仪器有限公司；ME254S型电子天平，德国Sartorius公司；UV-2550型紫外分光光度计，日本岛津公司。

1.2 对照品溶液的制备

精密称取105℃干燥至恒重的咖啡因对照品0.0507 g，置100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即为对照品溶液。

1.3 样品溶液的制备

分别取4种批号的小儿氨酚烷胺颗粒6袋，研细，精密称取1/30袋，置50 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，用微孔滤膜(0.45 μm)过滤，即为样品溶液。

1.4 色谱条件

色谱条件为：Eclipse XDB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-水(35∶65)，流速1.0 mL·min-1，进样量20 μL，检测波长275 nm。

2 结果与讨论

2.1 紫外吸收波长的确定

对咖啡因紫外吸收光谱进行测定，结果显示样品溶液在275 nm (图1)处有最大吸收。因此本实验选择275 nm作为检测波长。

图1 咖啡因紫外吸收图谱

2.2 线性关系

分别量取对照品溶液0.75 mL、1.5 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL、7 mL，加入25 mL容量瓶中定容，使其定容后的浓度分别为15 mg·L-1、30 mg·L-1、60 mg·L-1、80 mg·L-1、100 mg·L-1、120 mg·L-1、140 mg·L-1，每次进样20 μL对照品溶液，得到色谱流出曲线。以咖啡因浓度(mg·L-1)为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，见图2。

图2 咖啡因标准曲线

由图2可以看出，咖啡因浓度与峰面积在15～140 mg·L-1范围内有良好的线性关系。对其拟合回归，得回归方程为y=64.556x+71.885，R2=0.9991。

2.3 精密度

取同一种对照品溶液(100 mg·L-1)重复进样6次，每次20 μL。测得其RSD=1.33%(n=6)，说明仪器精密度良好。

2.4 重复性

分别取4 种样品溶液按色谱条件重复进样3 次，测得4种样品溶液中咖啡因色谱峰峰面积的RSD值分别为0.97%、1.05%、0.77%、0.41%(n=3)，表明方法的重复性好。

2.5 稳定性

分别取4种样品溶液，在不同时间0 h、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h按色谱条件进样，记录峰面积，计算其RSD值。结果分别为1.85%、3.35%、1.83%、2.98%(n=6),表明样品在5 h内稳定。

2.6 样品测定

取处理好的样品溶液进行测定，每次进样量为20 μL，得到HPLC色谱图,见图3。

图3 咖啡因对照品(a)与样品(b)的色谱图

由图3可知，咖啡因与其它组分分离较好，保留时间约为3.6 min。含量测定结果见表1。

表1 4种样品中咖啡因的含量测定结果

2.7 加标回收率测定

取已知含量样品，加入咖啡因对照品，进行回收率实验，结果见表2。

表2 咖啡因回收率测定结果

由表2可以看出，该方法平均回收率为106.8%,RSD为2.21%。

2.8 讨论

实验中尝试用甲醇-三氟乙酸、乙腈-水、甲醇-水体系为流动相，其中甲醇-水(35∶65)体系保留时间合适、分离度高、峰形对称，故选定甲醇-水(35∶65)为本实验的流动相。

比较不同柱温20℃、25℃、30℃，发现柱温对咖啡因的保留时间影响不大，最终选择柱温在25℃下进行测定。

3 结论

利用高效液相色谱法检测小儿氨酚烷胺颗粒中咖啡因含量，咖啡因浓度在15～140 mg·L-1范围内线性关系良好，回归方程为y=64.556x+71.885，R2=0.9991,平均加标回收率为106.8%，RSD=2.21%。该法快速、简便、结果可靠，适用于小儿氨酚烷胺颗粒中咖啡因的质量控制和监测。

参考文献：

[1] 姜红,周希英,贾善学.HPLC法测定小儿速效感冒颗粒中对乙酰氨基酚和咖啡因的含量[J].山东医药工业,2002,21(5):9-10.

[2] 孙桂荣，卢华伟，潘舒平.HPLC测定氨咖麻敏胶囊中各组分的含量[J].中国药学杂志,2004,39(7):524-544.

[3] 尤伟,张娟.HPLC法测定6种感冒药中咖啡因的含量[J].化学工程与装备，2009,(3):104-105.

[4] 朱军,陈中道,赵艳霞,等.7种常用感冒药中咖啡因的HPLC测定[J].济宁医学院学报,2004,27(1):44-45.