高效液相色谱法测定缬沙坦片的含量

廖洪娟，张 涛

（1.福建省龙岩市第二医院药剂科，福建 龙岩 364000； 2.江苏华源药业有限公司研发部，江苏 泰州 214500）

缬沙坦是一种高选择性Ⅰ型血管紧张素Ⅱ受体（AT1受体）拮抗剂，具有良好的抗高血压作用，可单用或与其他抗高血压药物合用治疗高血压，适用于各种类型的轻、中度高血压，尤其对血管紧张素转换酶抑制剂不能耐受的患者，且无致咳的不良反应[1-2]。目前国内已有多家药厂开始合成生产缬沙坦原料及其制剂产品[3-4]，但我国药典尚未收录，故无统一的含量测定方法。笔者参考有关文献[5-8]，建立了测定缬沙坦片含量的高效液相色谱（HPLC）法，现报道如下。

1 仪器与试药

岛津高效液相色谱系统（日本岛津公司），包括LC-10ATVP型溶剂输送泵，SPD-10AVP型紫外检测器；N2000色谱软件（浙江大学）；BS210S型、BP211D型电子分析天平（赛多利斯公司）；SB2000型超声波振荡器。缬沙坦对照品（中国药品生物制品检定所，批号为100651-200401，含量为98.5%）；缬沙坦片（江苏常州第四制药厂，批号为 050301，050504，050702）；乙腈、磷酸二氢钾、盐酸、氢氧化钠、30%双氧水（色谱纯），注射用水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Waters Symmetry C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：磷酸盐缓冲液（0.01 mol/L磷酸二氢钾，pH=3.5）-乙腈（20 ∶80），检测波长：230 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：40 ℃ ；进样量 20 μL。在此条件下，色谱图见图1。可知，缬沙坦峰与相邻杂质峰分离度大于2.0，理论塔板数按缬沙坦峰计算大于3 000，拖尾因子不超过1.2，表明该系统适用性良好。

2.2 溶液制备

精密称取缬沙坦对照品50.0 mg，置 100 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液；取样品20片，精密称定，研细，取约10.0 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加适量流动相，超声溶解3 min，冷却，加流动相稀释至刻度，过滤，取续滤液作为供试品溶液。取不含缬沙坦的阴性样品，同法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

进样精密度试验：精密移取对照品贮备液2.0 mL至10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，依法连续进样6次。结果峰面积的 RSD为0.48%（n=6），表明进样精密度良好。

中间精密度试验：取批号为050301的样品，委托其他技术人员照供试品溶液制备方法制备溶液，用美国Waters 600高效液相色谱系统依法测定含量。结果平均含量为99.59%，RSD为0.31%（n=6），表明该色谱条件精密度良好。

重现性试验：取批号为050301的样品，依法制备供试品溶液并测定。结果平均含量为99.74%，RSD为0.33%（n=6）。

线性关系考察：分别精密移取对照品贮备液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL，置 10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积对溶液质量浓度作线性回归，得回归方程 A=78 145 653 C+254 359，r=0.999 9（n=6）。结果表明，缬沙坦进样质量浓度在0.05～0.3 g/L范围内与峰面积线性关系良好。

定量限与检测限确定：取线性关系考察项下质量浓度为50μg/mL的对照品溶液，继续稀释进样。质量浓度为50 ng/mL时，其基线信噪比约为10∶1，故定量限约为50 ng/mL；继续稀释进样，质量浓度为20 ng/mL时基线信噪比约为3∶1，故检测限约为20 ng/mL。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于 0，1，2，4，6，8 h 时依法测定。结果峰面积的 RSD为0.25%，杂质峰总峰面积的 RSD为0.98%（n=6），表明供试品溶液在8 h内基本稳定。

加样回收试验：取已知含量的样品，分别按80%，100%，120%的比例精密加入缬沙坦对照品适量，按供试品溶液制备方法制备溶液，依法测定含量，计算回收率。结果见表1。

2.4 样品含量测定

图1 高效液相色谱图

表1 缬沙坦加样回收试验结果（n=9）

精密称取样品适量（约相当于缬沙坦10 mg），置100 mL量瓶中，加入适量流动相，超声溶解3 min，冷却并稀释至刻度，作为供试品溶液；另取缬沙坦对照品适量，同法制成每1 mL含10 μg缬沙坦的溶液，作为对照品溶液。各取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。结果批号为050301，050504，050702的样品中缬沙坦的标示百分含量分别为99.76%，99.28%，99.61%。

3 讨论

有关文献的含量测定方法中，缬沙坦的HPLC法检测波长为270 nm，而其药品试行标准中检测波长为230 nm。在试验过程中，取样品含量测定项下对照品溶液，照分光光度法，于200～400 nm波长范围内测定，结果在230，250，270nm波长处均有吸收，但230nm波长处最大，故检测波长定为230 nm。

在不改变流动相组成成分的条件下，流速加大，主峰的出峰时间会提前；减少流速，主峰的出峰时间会延后，但主峰和其他杂质峰的分离度、理论塔板数、拖尾因子均符合规定。

换用其他型号的C18柱，如Waters Symmetry C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），Waters Novpak C18柱（150 mm ×3.9 mm，5 μm），Kromasil C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm），在流动相无改变的情况下，出峰时间仅与色谱柱的长度有关，长柱的出峰时间稍长，短柱出峰时间略快，且主峰和其他杂质峰的分离度、理论塔板数、拖尾因子均符合规定。结果表明，本方法的系统耐用性比较稳定。

[1]杨宝峰.药理学[M].第6版.北京：人民卫生出版社，2006：228-229.

[2]祝世法，顾 亮，王 雁，等.新型血管紧张素受体拮抗剂——缬沙坦[J]. 心脑血管病防治，2001（02）：37-39.

[3]曾运才 .缬沙坦的合成工艺研究[J].胶体与聚合物，2003，21（3）：43-44.

[4]贾庆忠，马桂林，黎文志，等.抗高血压药缬沙坦的合成[J].中国医药工业杂志，2001，32（9）:385.

[5]韩 俊，马宝玉，李 娟.缬沙坦分散片的制备及含量测定[J].时珍国医国药，2007，18（1）：145-146.

[6]WS-455（X-391）-2000，国家食品药品监督管理局国家药品试行标准·缬沙坦[S].

[7]WS1-（X-2339）-2003Z，国家食品药品监督管理局国家药品试行标准·缬沙坦[S].

[8]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].北京：化学工业出版社，2005：附录 172，附录 182.