检测乳制品中蔗糖含量的同时检测乳糖的必要性

牛奶是人们日常生活中喜爱的食物之一，营养丰富，容易消化吸收，是理想的天然食品。众所周知，纯牛奶因为原料只有牛奶，所以是不含蔗糖的，但在实际的检测过程中，按GB5009.8-2016采用高效液相色谱法检测牛奶中的蔗糖含量时，在色谱图上，有时我们会看到疑似蔗糖的色谱峰，该色谱峰的出峰时间与蔗糖标液的出峰时间完全吻合，那么这到底是不是蔗糖？该如何确定与判断，我们做了大量的实验对比，确定了疑似蔗糖的色谱峰并不是蔗糖，而是乳糖。乳糖是牛奶本身就含有的物质，乳糖的存在往往会干扰蔗糖的检测，容易让检测者误将乳糖判为蔗糖，影响最终的检测结果，因此我们对蔗糖检测的研究对实际的检测检验工作有着重要意义。

实验部分

仪器：本实验使用岛津高效液相色谱仪LC-20A 与示差折光检测器RID-10A。具体配置为：LC-20A×2 输液泵，SIL-20A自动进样器，CTO-20A 柱温箱，CBM-20A 系统控制器， SHIMADZU LCsolution 色谱工作站。

试剂与材料：蔗糖、乳糖（国家标准物质，纯度均为99%）；乙腈（色谱纯）；亚铁氰化钾、乙酸锌（分析纯）；实验用水为一级水。实验样品：样品来源于当地超市购买的牛奶，包括样品1：三元天爱纯牛奶；样品2：蒙牛纯牛奶；样品3：百菲酪高钙水牛奶。

色谱条件：色谱柱：氨基色谱柱（250L×4.6，5μm）；流动相：乙腈+水；流速：1.0mL/min；进样体积：10μL；柱温：40℃

主要溶液配制：蔗糖标液（10mg/mL)：称取经96℃±2℃干燥过的蔗糖标物0.5g，加水溶解并定容至50mL。乳糖标液（10mg/mL)：称取经96℃±2℃干燥过的乳糖标物0.5g，加水溶解并定容至50mL。亚铁氰化钾溶液：称10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并定容至100mL。乙酸锌溶液：称21.9g乙酸锌，加冰乙酸3mL，加水溶解并定容至100mL。

样品制备：称取10.0g样品，加50mL水溶解，分别加5mL亚铁氰化钾和乙酸锌溶液，用水定容至100mL。超声30min，用滤纸过滤，滤液过0.45μm滤膜过滤至进样瓶，供液相色谱分析。

实验条件与结果讨论

实验一。蔗糖标准溶液：10mg/mL，流动相：乙腈：水=70:30，以此条件进样，对三元天爱和蒙牛两种纯牛奶进行检测，并做了加标实验，发现两种纯牛奶和加标实验都在蔗糖标液的出峰位置看到了相应的色谱峰，如图1所示：

由图1可以看出，样品1、样品2和样品1加标的出峰时间与蔗糖标准的出峰时间完全吻合，那究竟是不是蔗糖呢？从理论上来说，纯牛奶中是不含有蔗糖的，且由检测到的蔗糖浓度可以看出，浓度与牛奶中乳糖的含量极为相似，为了确保实验的准确性，于是又进行了实验二的验证。

实验二。配制一个乳糖标液（10mg/mL），采用“实验一”同样的条件进样，发现乳糖标准的出峰时间与蔗糖的出峰时间完全重合了（见图2），因此怀疑“实验一”中样品检测到的色谱峰极有可能是乳糖。为了验证这个猜测，我们对流动相进行了调整，将乙腈与水的配比调整为85：15，目的是把乳糖和蔗糖的色谱峰分开。经过再次对标液和“实验一”的样品进行重新检测，发现在蔗糖标准出峰的时间不再看到有色谱峰了，而在乳糖标准的出峰时间则看到了相应的色谱峰，如图3所示。

结论

由图3可见，实验一中检测到的色谱峰就是乳糖，而不是蔗糖。通过实验一和实验二可以看出，在检测牛奶中蔗糖含量时，同时对乳糖进行检测是非常有必要的，否则可能就会发生实验一的情况，容易造成假阳性的误判，影响最终的实验结果。