中药复方肺泰胶囊的主要成分含量测定

余宗阳，欧阳学农，贺全山，戴西湖，刘志臻

（中国人民解放军南京军区福州总医院肿瘤科，福建 福州 350025）

中药复方肺泰胶囊（军内科研制剂注册号[（2002）南科02001号]）是多年来经临床反复筛选和提炼的中药复方口服制剂，主要由黄芪、半枝莲、莪术、肿节风、全蝎等8味中药组成[1]。异秦皮啶（7-羟基-6，8-二甲氧基香豆素）属于香豆素类，为方中主药肿节风的主要活性成分。为进一步提高对制剂的质量控制，笔者根据相关文献及药典等资料[1-3]，采用高效液相色谱（HPLC）法对异秦皮啶进行了含量测定，现报道如下。

1 仪器与试药

Beckman 125型高效液相色谱仪（美国Beckman）；FA1004型电子天平（上海天平仪器厂）；DK-S24型电热恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司）；星海旋转蒸发器（无锡市海王生化设备有限公司）；KQ-600DE型数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；YSEI综合药品稳定性试验箱（重庆市永生实验仪器厂）。异秦皮啶对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110837-200304）；肺泰胶囊（福州总医院自制，批号为 030612，030818，031221）；乙腈为色谱纯，甲醇、磷酸为分析纯，水为重蒸水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Hypersil ODS 柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈 -0.2%磷酸溶液（21∶79），梯度洗脱程序为 0min（20∶80）→20min（40 ∶60）→30 min（20 ∶80）；流速：1.0 mL/min；柱温：18 ℃ ；检测波长：344 nm；进样量：20 μL。此条件下色谱图见图1，理论塔板数按异秦皮啶峰计算不低于2 000。

2.2 溶液制备

精密称取经60℃减压干燥2 h的异秦皮啶对照品0.01 g，用甲醇配制成2.00 μg/mL的对照品溶液。将肺泰胶囊内容物研细，取约0.3 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加甲醇适量，置水浴上回流提取6 h，提取液旋转蒸发适当浓缩后过滤，置25 mL量瓶中，甲醇定容，摇匀，即得供试品溶液。按处方比例并以相同工艺制备缺异秦皮啶的阴性对照品，按供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液。精密称取异秦皮啶对照品0.010 8 g，置10 mL量瓶中，甲醇定容，作为贮备液，以流动相稀释得对照品溶液。

2.3 方法学考察

阴性干扰试验：精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各20 μL，分别注入液相色谱仪。结果处方中其他组分和辅料对异秦皮啶的测定无干扰（见图1）。

线性关系考察：取质量浓度为2.00，4.32，6.48，8.64，10.80 μg/mL的对照品溶液，按上述色谱条件进行含量测定。以质量浓度 C为横坐标、峰面积 Y为纵坐标进行线性回归，得回归方程 Y=69 427X+15 961，r=0.999 9（n=5）。结果表明异秦皮啶质量浓度在2.00～10.80 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取对照品溶液，依法连续进样。结果峰面积的RSD=1.76%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于 0，2，4，6，8，10 h 时取样测定。结果含量的 RSD=1.47%（n=6），表明供试品溶液在10 h内稳定。

重现性试验：取同一批样品，依法制备供试品溶液并测定含量。结果平均含量为0.148 mg/g，RSD=1.19%（n=6），表明方法的重现性良好。

加样回收试验：取3批样品，每批3份，每份约0.3 g，精密称定，加入质量浓度为46.0 μg/mL的对照品溶液0.8，1.0，1.2 mL各3份，依法测定含量，计算回收率。结果见表1。

图1 高效液相色谱图

表1 异秦皮啶加样回收试验结果（n=9）

2.4 样品含量测定

取3批样品，每批2份，共6份，每份约0.3 g，精密称定，加入纯净水各0.8，1.0，1.2 mL，制备成供试品溶液，量取20 μL注入液相色谱仪，照上述色谱条件测定。结果含量平均值为45.30 μg/mL。据相关文献[2-3]规定并考虑生产工艺，确定含量下限为85%，计算得38.51 μg/mL，故暂定本品以异秦皮啶计不得低于38.51 μg/mL。

3 讨论

本品组方较大，制备方法的选择非常关键。曾制定方案1采用水溶解，放置过夜后超声处理，过滤，再以氯仿萃取，提取液蒸干后用甲醇溶解；方案2参考2005年版《中国药典（二部）》用甲醇溶解并超声处理[1]；方案3用甲醇回流提取6 h。方案1在超声处理后过滤时，溶液由于黏滞性太大，难以抽滤，不易操作且提取液中所需成分易损失；方案2虽然操作简单易行，但其分离度及其测定的含量没有方案3好。因此选用方案3进行供试品溶液的制备。提取液是有色溶液，且具有一定的黏性，建议采取多次过滤或预柱的方法，避免色谱柱损坏。

在试验过程中，柱温的高低影响异秦皮啶峰的分离度，柱温升高，出峰时间加快，但后一个峰的出峰时间加快得更多，异秦皮啶峰与后一峰的分离度变小，部分重叠；柱温降低则出峰时间延长，异秦皮啶峰与前一峰分离度变小。经过试验比较，确定柱温为18℃最佳。

曾参考药典等文献，采用乙腈与0.1%磷酸溶液为流动相，但经过试验比较，其分离度及峰形不如用乙腈与0.2%磷酸溶液的流动相好。在试验过程中，乙腈与0.2%磷酸的比例也影响其分离度，当其比例为20∶80时主峰与前一峰部分重叠，而当其比例为23∶77时又与后一峰发生重叠。通过试验，确定其比例为21∶79最为适宜。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].北京:化学工业出版社，2005：502，附录ⅪⅩ C，176.

[2]黄增琼，蒋伟哲，黄兴振，等.高效液相色谱测定肿节风含片中异秦皮啶含量[J]. 中国药业，2007，16（5）:19-20.

[3]周国平，刘红宇，王汉章，等.肿节风中异秦皮啶含量的HPLC法测定[J]. 中国中药杂志，1999，24（8）:481-482.