复方维生素E霜中熊果苷和维生素E的含量测定

林 彩，刘松青，贺红军，赵映兰，吴玉晗

（第三军医大学西南医院，重庆 400038）

复方维生素E霜主要成分为维生素E、熊果苷、硅油等，具有保持水分、营养肌肤、消除皮肤色素沉着、防晒、延缓衰老的作用。熊果苷（对-羟基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷）是源于绿色植物的天然活性物质，对皮肤有增白作用，可通过抑制黑色素细胞的酪氨酸酶活性而有效抑制黑色素的生成，其毒性、刺激性、致敏性等不良反应均较小，在护肤品方面具有广泛的应用前景。笔者采用高效液相色谱（HPLC）法对方中维生素E和熊果苷的含量进行了测定，旨在为控制复方维生素E霜的质量提供可靠依据。

1 仪器与试药

Waters 810型液相色谱仪，包括510泵、484可变波长紫外检测器、7725-i进样器、Baseline 810计算机控制及处理系统；Beckman DU-650型紫外分光光度计（美国Beckman公司）；Milli-Q Plus超纯水器（美国 Waters Piuision of Millipore）；LN9527-25 型高速离心机 （德国 Abbott Laboratories Abbott Park）；BP221S型天平（德国Sartorius）。维生素E对照品（中国药品生物制品检定所，批号为10062-0007）；熊果苷对照品（南京青泽医药有限公司提供，批号为 070328）；复方维生素 E霜（自制，批号为 080428，080721，080910，081223，090303 ）；正己烷、醋酸乙酯、甲醇均为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 熊果苷含量测定

2.1.1 色谱条件

色谱柱：Machedey-Nagel Si柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：正己烷 -醋酸乙酯 - 甲醇（30 ∶10 ∶9）；流速：1.2 mL/min；检测波长：285 nm；柱温：35 ℃；进样量：10 μL。

2.1.2 溶液配制

取熊果苷对照品26 mg，精密称定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解，制成质量浓度为0.52 g/L的熊果苷对照品贮备液。取样品0.5 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解，超声处理10 min，放至室温，定容，过滤，混匀，离心，作为供试品溶液。精密称取不含熊果苷的复方维生素E霜空白基质0.5 g，置50 mL量瓶中，按供试品溶液的配制方法处理，即得阴性对照品溶液。

2.1.3 方法学考察

专属性试验：在拟订的色谱条件下，取2.1.2项下3种溶液，依法进样。结果供试品溶液中熊果苷与杂质峰分离较好，阴性对照无干扰（见图1）。

线性关系考察：取熊果苷对照品贮备液，用甲醇稀释，制得质量浓度分别为25.48，23.95，22.42，20.89，19.36，17.84，

14.78 μg/mL的对照品溶液，吸取上述溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以熊果苷质量浓度对峰面积进行线性回归，回归方程为Y=3 653 014X+7 800.4，r=0.999 8（ n=7）。结果表明，熊果苷质量浓度在14.78～25.48 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

图1 熊果苷含量测定的高效液相色谱图

精密度试验：取 3 种不同质量浓度（25.48，20.89，14.78 μg/mL）的对照品溶液各3份，在同日内和不同日内进行分析，平行操作3次。结果日内精密度的 RSD分别为0.85%，0.16%，0.24%，日间精密度的 RSD分别为0.78%，0.51%，0.96%。

加样回收试验：精密称取已知熊果苷含量的同一批号样品0.458 5 g，置50 mL量瓶中，照供试品溶液制备方法制备溶液，分别取0.5 mL到3只EP管中，再分别取3种不同质量浓度的熊果苷对照品溶液各0.5 mL，置上述3只EP管中，混匀，离心，注入液相色谱仪，每个质量浓度重复进样3次，测定峰面积，计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果（n=9）

检测限和定量限确定：采用信噪比法，将已知质量浓度的供试品溶液测出的信号与阴性对照品溶液测出的信号进行比较。结果以信噪比为2∶1时最低检测限为0.19 μg/mL，以信噪比为10∶1时最低定量限为0.97 μg/mL。

2.1.4 样品含量测定

精密称取5个不同批次的样品0.5 g，按供试品溶液的制备方法处理，注入高效液相色谱，测定峰面积，代入回归方程计算。结果5批样品中熊果苷的含量分别为 26.02，25.99，25.97，25.77，25.82 μg/mL（标示量为 25 μg/mL）。

2.2 维生素E含量测定

2.2.1 色谱条件

色谱柱：C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇；流速：1.5 mL/min；检测波长：285 nm；柱温：35 ℃；进样量：10 μL。

2.2.2 溶液配制

取维生素E对照品20.6 mg，精密称定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解，制成质量浓度为0.412 g/L的维生素E对照品贮备液。取复方维生素E霜样品0.5 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解，超声处理10 min，放至室温，定容，过滤，混匀，离心，作为供试品溶液。精密称取不含维生素E的复方维生素E霜空白基质0.5 g，置50 mL量瓶中，按供试品溶液的配制方法处理，即得阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

专属性试验：在拟订的色谱条件下，取2.2.2项下3种溶液，依法进样。结果供试品溶液中维生素E与杂质峰分离较好，阴性对照无干扰（见图2）。

线性关系考察：分别吸取维生素E对照品贮备液，加入甲醇，制得质量浓度分别为 14.42，16.48，18.54，20.6，22.66，24.72，26.78 μg/mL的对照品溶液。吸取上述溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以维生素E的质量浓度对峰面积进行线性回归，回归方程为 Y=1 615 675 X-925.21，r=0.999 7（ n=7）。结果表明，维生素E质量浓度在14.42～26.78 μg/mL 范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：在同一日内和不同日内对低、中、高3种质 量 浓 度（14.42，20.60，26.78 μg/mL）的对照品溶液进行分析，平行操作3次。结果日内精密度的 RSD分别为0.38%，1.53%，0.43%，日间精密度 RSD分别为1.00%，0.78%，0.42%。

加样回收试验：取已知维生素E含量的同一批号样品0.516 6 g，精密称定，置50 mL量瓶中，照供试品溶液制备方法制备溶液，分别取0.5 mL，置3只EP管中，再分别取3种不同质量浓度的维生素E对照品溶液各0.5 mL，置上述EP管中，混匀，离心，注入液相色谱仪，每个质量浓度重复进样3次，测定峰面积，计算回收率。结果见表1。

检测限和定量限确定：采用信噪比法。信噪比为2∶1时最低检测限为0.57 μg/mL，信噪比为 10∶1时最低定量限为4.53 μg/mL。

2.2.4 样品含量测定

精密称取3批样品0.5 g，按供试品溶液的制备方法处理，注入高效液相色谱，测定峰面积，代入回归方程计算。结果3批样品中维生素 E 的含量分别为 19.17，19.04，19.07 μg/mL（标示量为20.66 μg/mL）。

3 讨论

取熊果苷对照品适量，加甲醇溶解，在200～400 nm波长范围扫描，结果熊果苷在波长285 nm波长处有最大吸收。取维生素E对照品适量，加甲醇溶解，在200～400 nm波长范围扫描，结果维生素E在波长285 nm波长处有最大吸收。故选取285 nm为检测波长。

预试验中，拟用同一色谱条件同时测定复方维生素E霜中熊果苷和维生素E的含量，选用了不同流动相，虽然熊果苷与维生素E都能够分离，但熊果苷的出峰时间都太短，峰形也不好，因此采用不同的色谱条件分别测定。将熊果苷的测定方法改为正相高效液相色谱法[1]，结果熊果苷的出峰时间较前法延后，峰形变好。而维生素E仍采用反相高效液相色谱法[2]，用纯甲醇作流动相，维生素E的出峰时间和峰形都较好。

本品为霜剂，内含乳剂型基质，在处理样品时操作需小心，避免乳化现象。

图2 维生素E含量测定的高效液相色谱图

[1]卫莹芳，山森千彰，郭 力，等.高效液相色谱法测定六种川产鹿蹄草中熊果苷的含量[J]. 华西药学杂志，2002，17（6）：435-436.

[2]陈 亮，何凤慈，宁桂琴.高效液相色谱法测定维生素E霜中的维生素 E 的含量[J]. 中国药业，2001，10（9）：42.