CDK4、PTEN蛋白与子宫内膜癌浸润转移的关系

车力凡 孙钰 邵素芳

子宫内膜癌为女性生殖道常见恶性肿瘤之一，近年来，其发病率呈上升趋势，在欧美一些国家子宫内膜癌发病率已跃居妇科恶性肿瘤之首位，国内亦趋接近甚至超过子宫颈癌。虽然近年来采取了以手术为主的多学科综合治疗，但是由于局部复发或远处转移，子宫内膜癌的死亡率仍无明显下降。本研究采用免疫组化S-P法检测50例子宫内膜癌组织和12例不典型增生子宫内膜及10例正常子宫内膜组织中细胞周期素依赖性蛋白激酶(Cyclin dependent kinase-4，CDK4)和10号染色体丢失的与张力蛋白同源的磷酸酶基因(Phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten，PTEN)蛋白的表达情况，并与临床病理因素相联系，以探讨两者的表达与子宫内膜癌浸润转移的关系。为临床上寻找判断子宫内膜癌浸润转移的新的生物学标志物提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 标本来源 取潍坊市益都中心医院2000年5月～2005年6月手术切除的子宫内膜癌患者标本50例，不典型增生子宫内膜组织标本12例及正常子宫内膜标本10例。所有标本均经病理检查证实。其中子宫内膜癌患者平均年龄54.5岁，按FIGO(1989)临床分期Ⅰ期36例，Ⅱ期8例，Ⅲ期6例。病理分级按FIGO(1988年)分级标准G1 24例，G2 21例，G3 5例，所有患者术前均未作任何治疗。不典型增生子宫内膜患者年龄平均38.7岁。按ISGP(1987年)标准，轻度不典型增生3例，中度不典型增生3例，重度不典型增生6例。正常子宫内膜患者中平均年龄43.4岁，均为子宫肌瘤手术切除的子宫标本。

1.2 试剂 即用型兔抗人CDK4多克隆抗体，即用型兔抗人P T E N多克隆抗体，即用型免疫组化超敏UitraSensitiveTMS-P试剂盒，以上试剂均购自武汉博士德生物技术有限公司。

1.3 免疫组化染色及结果判定 染色步骤严格按照试剂盒说明进行，以PBS代替一抗作阴性对照，人乳腺癌组织作阳性对照。CDK4、PTEN蛋白阳性染色标准为细胞质出现棕黄色、棕褐色颗粒，染色强度高于背景非特异性染色为准，高倍镜下(40×10)取10个不同视野，并计算视野内阳性细胞百分率，阳性细胞＞25%为阳性，≤25%为阴性。见图1、图2。

1.4 统计学方法 应用SPSS11.5统计软件包进行分析，所得计数资料用x2检验比较组间的差异。显著检验水准α取0.05。

2 结果

2.1 第一阶段结果

2.1.1 CDK4蛋白在不同性质子宫内膜组织细胞中的表达CDK4在正常子宫内膜中的阳性表达率为30.0%，在不典型增生子宫内膜组织中的阳性表达率为66.7%，在子宫内膜癌组织中的阳性表达率为72.0%，见图1不典型增生子宫内膜和子宫内膜癌组织中的阳性表达率与正常子宫内膜两者相比，差异具有显著性(P＜0.05)。子宫内膜癌与不典型增生子宫内膜组织阳性表达率相比，差异无显著性(P＞0.05)。见表1。

2.1.2 CDK4蛋白在不同临床分期子宫内膜癌组织细胞核中的表达 CDK4蛋白表达随FIGO临床分期上升有增高趋势，子宫内膜癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期阳性表达率分别为58.3%、87.5%、100.0%。Ⅱ期及Ⅲ期阳性表达率为92.8%，与Ⅰ期比较，有显著性差异(P＜0.05)。见表1。

2.1.3 CDK4蛋白在不同组织学分级子宫内膜癌组织细胞核中的表达 CDK4蛋白在G1、G2、G3级的阳性表达率分别为62.5%、80.8%、80.0%，G2及G3组CDK4蛋白阳性表达率为80.7%，与G1比较，有显著性差异(P＜0.05)。见表1。

2.1.4 CDK4蛋白在不同肌层浸润深度子宫内膜癌组织细胞核中的表达 CDK4蛋白在无肌层浸润或浸润深度＜1/2组阳性表达率为56.0%，浸润肌层＞1/2或有淋巴结转移组阳性表达率为88.0%，两组相比，其阳性表达率有显著性差异(P＜0.05)。见表1，表2。

2.1.5 CDK4蛋白在复发子宫内膜癌组织细胞核中的表达 随访41例病人，26例无复发，其中CDK4阳性表达率为57.7%(15/26)，15例复发患者中阳性表达率为93.3%(14/15)，两者比较差异有显著性(P＜0.05)。

2.2 第二阶段结果

2.2.1 PTEN蛋白在不同性质子宫内膜组织细胞中的表达PTEN在正常子宫内膜中的阳性表达率为100.0%见图2。在12例不典型增生子宫内膜组织中的阳性表达率为91.0%，在子宫内膜癌组织中的阳性表达率为56.0%，子宫内膜癌组织中的阳性表达率与正常子宫内膜和不典型增生子宫内膜相比，差异具有显著性(P＜0.05)。正常子宫内膜和不典型增生子宫内膜组织阳性表达率相比，差异无显著性(P＞0.05)。见表2。

2.2.2 PTEN蛋白表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系PTEN蛋白在子宫内膜癌Ⅰ期中的阳性率高于Ⅱ-Ⅲ期，但差异无统计学意义(x2=0.28，P=0.594)；组织学分级中G1、G2、G3级的PTEN蛋白阳性表达率分别为54.2%、61.9%、40.0%。三者间比较，差异均无显著性(P＞0.05)；无浸润或肌层浸润＜1/2与肌层浸润＞1/2 组相比，差异有显著性(x2=8.2，P＜0.05)。见表2。

2.2.3 子宫内膜癌组织中CDK4、PTEN蛋白表达的相关性CDK4、PTEN蛋白在本组50例子宫内膜癌组织中的表达差异无显著性(P＞0.05)。即两者在子宫内膜癌组织中的表达无相关性。

表1 三种不同组织细胞中CDK4蛋白表达的比较

表2 子宫内膜癌中CDK4与PTEN蛋白表达的相关性

表3 三种不同组织细胞中PTEN蛋白表达的比较

图1 CDK4在子宫内膜癌中的阳性表达

图2 PTEN蛋白在正常子宫内膜中的阳性表达

3 讨论

细胞周期素依赖性蛋白激酶-4(Cyclin dependen的CDK4 cD t kinase-4，CDK4)基因位于12q 13染色体上，人NA长534bp，编码34个氨基酸的蛋白质[1]。作为周期蛋白激酶，它被Cyclin D激活形成复合物，而直接促进G1/S转换[2]。其作用机制主要是由Cyclin D与CDK4形成复合物，磷酸化其底物如Rb等，释放转录因子E2E使DNA合成得以进行，细胞由G1期进入S期。目前，在多种肿瘤细胞如黑色素瘤、神经胶质瘤、家族型肠息肉病、大肠癌等中均发现CDK4的基因扩增和蛋白表达失调[3-6]，认为CDK4异常表达可促进肿瘤的发展，并具有早期诊断和判断预后的价值[7-8]。本研究表明CDK4在子宫内膜癌中Ⅱ-Ⅲ期细胞核中过度表达率明显高于Ⅰ期，提示CDK4与子宫内膜癌的病程进展有关；而且CDK4在组织学分级G2-G3中的过度表达率明显高于G1者，推测其对肿瘤分化、发展有促进作用；与部分文献报道一致。Dong等[9]对CDK4在喉癌组织标本中免疫组化研究中发现，CDK4的表达异常与总生存率显著相关，具有很好的预后价值。即CDK4在浸润肌层＞1/2或有淋巴结转移组阳性表达率高于无肌层浸润或浸润深度＜1/2组阳性表达率。CDK4作为细胞周期正向调节因子，当其过度表达时，可加速细胞增殖，促进肿瘤细胞异常增生、浸润和肿瘤复发而导致预后不良。

PTEN基因是第一个被发现具有磷酸酶活性的抑癌基因，其所编码的PTEN蛋白是一种具有双特异去磷酸化作用的磷酸酶。PTEN蛋白在多种肿瘤中缺失或减低表达与肿瘤的发生、发展关系密切，也是某些肿瘤的独立预后因素。PTEN通过诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡等抑制肿瘤发生发展。最近研究发现，PTEN能多途径的抑制肿瘤浸润转移。动物模型研究也表明，腺病毒介导的PTEN表达不但能抑制肿瘤癌细胞的成瘤性及转移，以其处理原位移植瘤，也能抑制肿瘤的淋巴结转移。PTEN基因在子宫内膜癌中的突变率为34%～50%，是目前发现的子宫内膜癌中突变率最高的基因，而且子宫内膜癌也是迄今发现的PTEN基因突变率最高的肿瘤。

通过研究发现PTEN蛋白在子宫内膜癌中表达下降或缺失及CDK4在子宫内膜癌组织中的过度表达与子宫内膜癌的浸润转移密切相关，检测子宫内膜癌组织中CDK4及PTEN的表达可作为判断子宫内膜癌浸润转移情况的有用标志物，为临床上寻找判断子宫内膜癌浸润转移的新的生物学标志物提供理论依据。

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