原发性干燥综合征患者外周血CD4+CD25+high调节性T细胞的表达及意义

郑红霞 于健宁 陶筱娟 施华萍

(浙江省中西医结合医院,浙江 杭州 310003)

干燥综合征(sjogren's syndrome,SS)是一种以侵犯外分泌腺,尤其是唾液腺及泪腺为主的慢性自身免疫性疾病,该病可分为原发性和继发性。本研究针对原发性干燥综合征(PSS)患者,研究其外周血CD4+CD25+high调节性T细胞的表达,以探讨CD4+CD25+high调节性T细胞在PSS发病中的作用。目前已有很多实验证明CD4+CD25+调节性T细胞具有免疫调节功能,在自身免疫耐受维持中发挥重要作用。但对高表达的调节性 T细胞,即 CD4+CD25+high调节性T细胞在PSS中的表达及意义目前研究报道甚少,且结果没有统一定论。现对CD4+CD25+high调节性T细胞在自身免疫性疾病PSS的表达特点报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集本院风湿免疫科2007年1月至2008年1月期间初次诊断为PSS患者25例,均为女性,年龄30～55岁,平均(38.3±9.2)岁。同时收集20例本院自愿献血的健康女性职工作为健康人对照组,年龄30～55岁,平均(36.8±6.4)岁。健康人对照组性别、年龄与患者比较无显著性差异(P＞0.05)。

1.2 诊断标准 依据干燥综合征国际分类(诊断)标准(2002年修订)[1]。

1.3 检测方法

1.3.1 试剂及仪器:异硫氰荧光素(FITC)标记的鼠抗人CD4单克隆抗体,藻红蛋白(PE)标记的鼠抗人CD25单克隆抗体,同型对照鼠 IgG1-FITC,鼠IgG2a-PE,溶血素Optilyse C,均购自美国 BECKMAN COULTER公司。主要仪器EPICS XL流式细胞仪购自美国BECKMAN COULTER公司。

1.3.2 细胞检测:晨起抽取患者和健康人静脉血,肝素抗凝血 50μ L,加 CD4-FITC和 CD25-PE各10μ L,对照试管加 IgGl-FITC和 IgG2a-PE各10μ L,室温孵育 20 分钟,加溶血素 250μ L,室温孵育15分钟后加入磷酸盐缓冲液(PBS)250μ L,放置15分钟后,用 PBS洗涤 2次,再加 PBS500μ L上机检测。取CD25荧光强度大于6.7为CD25+high。

1.4 统计学处理 应用SPSS11.5软件进行统计分析,计量资料两组均数比较采用 t检验,用Pearson方法进行相关性分析。

2 结 果

2.1 两组外周血CD4+CD25+high调节性T细胞比较情况:PSS患者组外周血CD4+CD25+high调节性T细胞占CD4+百分比较健康人组低,两组比较有显著性差异(P＜0.05),详见表1及图1,图2。

表1 两组外周血CD4+CD25+hig调节性T细胞比较

表1 两组外周血CD4+CD25+hig调节性T细胞比较

与对照组比较*P＜0.05

组 别 n CD4+CD25+high调节性T细胞/CD4+(%)PSS患者 25 1.49±0.76*对照组 20 2.85±1.04

2.2 PSS患者外周血CD4+CD25+high调节性T细胞与C反应蛋白(CRP)及IgG相关性分析:PSS患者外周血CD4+CD25+high调节性T细胞与C反应蛋白,IgG水平呈负相关(r值分别为-0.767,-0.553,P值均小于0.05),详见表2。

健康人与SS患者CD4+CD25+high的表达

表2 PSS患者外周血CD4+CD25+high调节性T细胞与CRP,IgG相关性情况

3 讨 论

长期以来,人们一直认为CD25只表达在活化的T细胞表面,是T细胞激活的表面标志之一。而近年来,越来越多的研究发现体内有一类静息CD4+T细胞表面亦表达CD25分子,并且证明这类CD4+CD25+T细胞具有免疫调节功能,在自身免疫耐受维持中发挥重要作用,故称这类CD4+CD25+T细胞为CD4+CD25+调节性T细胞。这类CD4+CD25+调节性T细胞是由Sakaguchi等[2]于1995年首次报道,该作者发现正常小鼠的胸腺、脾和淋巴结中CD4+T细胞约有5%～10%表达CD25分子(即白细胞介素 IL-2受体β链),如果将除去CD25+的CD4单阳性T细胞(CD4+CD25-T细胞),过继转移给胸腺缺陷的小鼠能诱导自身免疫病的发生,而将CD4+CD25+T细胞与CD4+CD25-T细胞一同转移,则不引起自身免疫病。这一发现提示CD4+CD25+T细胞具有抑制自身免疫病的作用。

但高表达的CD4+CD25+T细胞即CD4+CD25+high调节性T细胞是CD4+CD25+T细胞中主要具有免疫调节或抑制活性的一群细胞。本研究结果显示PSS患者外周血CD4+CD25+high调节性T细胞占CD4+百分比较健康人低,且与活动性指标呈负相关,提示PSS外周血CD4+CD25+high调节性T细胞的表达水平下降不仅与PSS发病有关,与病情活动亦有相关性。目前对PSS患者外周血调节性T细胞的研究较少,调节性T细胞在PSS中的发病机制现在还没有统一定论[3],尚需要进行更多大样本试验反复的验证才可对调节性T细胞在PSS的作用机制作出准确的判断。

[1] Vitali C,Bombardieri S,Jonsson R,et al.Classication criteria for sjogren's syndrome:a revisedversion of the European criteria proposed by the American European Consensus Group.Ann Rheum Dis,2002,61:554

[2] Sakaguchi S,Sakaguchi N,Asano M,et al.Lmmunologic selftolerance maintained by activated T cells expressing IL-2 receptor alpha-chains(CD25).Breakdown of a single mechanism of self-tolerance causes various autoimmune diseases.J Immunol,1995,160:l151

[3] Jacques-Eric Gottenberg,Frederic Lavie,Karim Abbed,et al.CD4+CD25+highregulatory T cell are not impaired in patients with primary sjogren's syndrome.J autoimmunity,2005,24:235