山莨菪麝香膏质量标准研究

郭全兴， 刘亚蓉， 杨凤梅， 高占魁

（1.青海省药品检验所，青海西宁 810016;2.青海宝鉴堂国药有限公司，青海西宁 810016）

山莨菪麝香膏为青海宝鉴堂国药有限公司（前身为青海省海北制药厂）研制的新药。收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十三册中。具有活血镇痛，祛风除湿的功效。用于风湿痹痛，关节炎、类风湿关节炎，跌打损伤等症的疼痛［1］。原部颁标准中仅有唐古特瑞香的纸层析鉴别（祖师麻甲素）和膏剂的常规检查项。无含量测定内容。为了更全面的控制该产品的内在质量，本实验对方中君药唐古特瑞香进行了含量测定研究，对方中其他药味进行了鉴别研究，并对原标准中唐古特瑞香的纸层析鉴别方法进行了修订。试验证明，方法简便快捷，专属性强，结果满意。

1 仪器和试药

Agilent 1100高效液相色谱仪，Agilent G1314 VWD紫外检测器，HP化学工作站（美国Aglient公司）;CP-3800瓦里安气相色谱仪;CP-8410全自动进样器;FID检测器;CP-Wax毛细管柱;电子天平（Sartorius BT224S，北京赛多力斯仪器公司）;超声波清洗器（B2500s-MT，上海必能信超声波清洗仪有限公司）。

祖师麻甲素对照品（批号110900-200405，含量测定用）;樟脑对照品（747-2001060;供含测）;龙脑对照品（110881-200202，供含测）;水杨酸甲酯（110707-200107）均由中国药品生物制品检定所提供;甲醇、乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯;水为重蒸馏水。

山莨菪麝香膏 3批（批号:XJ630062、XJ630060、XJ630083）及有关阴性对照样品均由青海宝鉴堂国药有限公司提供。

2 定性鉴别

2.1 TLC法鉴别唐古特瑞香 取本品140 cm2，加乙酸乙酯30 mL，加热回流30 min，提取液转至分液漏斗中，用4%氢氧化钠溶液，提取3次，每次10 mL，合并提取液，以稀盐酸酸化至pH值1～2，再以乙酸乙酯提取3次，每次10 mL，合并提取液，浓缩至10 mL，作为供试品溶液。取祖师麻甲素对照品，加乙酸乙酯制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。另取缺唐古特瑞香的阴性对照样品，同供试品溶液制备法制得阴性对照溶液。吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于硅胶G薄层板 （青岛海洋化工厂）上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-乙醚（10∶1∶1∶3）为展开剂，展开，取出，晾干。喷以三氯化铁试液，日光下检视，3批供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。见图1。

图1 唐古特瑞香TLC鉴别图

2.2 GC法鉴别樟脑、冰片、水杨酸甲酯［2］色谱条件与系统适用性试验 色谱柱:CP-Wax 52 CB毛细管柱（长度30 m，内径:0.25 mm，膜厚0.25 μm），柱温:130 ℃，载气氮气:30 mL/min，检测器:FID。

2.2.1 供试品溶液的制备 取本品橡胶膏1片（约70 cm2），除去塑料，精密量取面积，剪成条状，置挥发油测定器中，自上端加水8 mL，再加乙酸乙酯2 mL，连接冷凝管，加热回流提取4 h，冷至室温，分取挥发油测定器中的乙酸乙酯层，置10 mL量瓶中，用乙酸乙酯洗涤挥发油测定器，洗液并入量瓶中，加乙酸乙酯稀释至刻度，作为供试品溶液。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取樟脑对照品0.051 00 g，置5 mL量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，作为樟脑贮备液;精密称取龙脑对照品0.066 85 g，置5 mL量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，作为龙脑贮备液;精密称取水杨酸甲酯对照品1.081 62 g，置100 mL量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，作为水杨酸甲酯贮备液。精密吸取樟脑、龙脑、水杨酸甲酯贮备液各1 mL，置10 mL量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，作为混合对照品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例称取除樟脑、龙脑、水杨酸甲酯以外的其他药材适量，依照山莨菪麝香膏的制备工艺和供试品溶液的制备方法，制得阴性对照溶液。

测定法分别精密吸取上述3种对照品贮备液、供试品溶液、阴性对照溶液各1 μL，注入气相色谱仪中，在上述色谱条件下测定。

结果:从图谱上分析，3种成分在毛细管柱上可得到很好的分离，专属性和重现性强，认为可作为山莨菪麝香膏中樟脑、冰片、水杨酸甲酯的定性鉴别方法。结果见图2。

图2 GC色谱图

3 含量测定

3.1 色谱条件 色谱柱 依利特Hypersil ODS2，5 μm 4.6 mm×250 mm柱;乙腈-0.4%磷酸溶液（22∶78）为流动相;检测波长为327 nm;理论塔板数按祖师麻甲素计算应不低于2 000。

3.2 对照品溶液的制备 精密称取祖师麻甲素对照品适量，加甲醇制成每1 mL含11.57 μg的溶液，即得。

3.3 供试品溶液的制备 取本品1 g（批号XJ630062），精密称定，置烧杯中，加水煎煮3次，每次80 mL，煎煮40 min，合并煎煮液，过滤，放冷，用石油醚（60～90℃）洗涤2次，每次30 mL，水液蒸干，残渣用甲醇溶解并转移到25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

3.4 阴性对照试验 按照处方组成，取除唐古特瑞香以外的其余药味，按制备工艺要求制成不含唐古特瑞香的制剂，按供试品溶液制备项下的方法制备阴性对照溶液。在本试验拟定的色谱条件下测定，结果表明，其他成分对祖师麻甲素的测定无干扰，HPLC色谱图见图3。

3.5 线性关系考察 分别精密吸取上述对照品溶液（11.57 μg/mL）4、8、12、16、20 μL，按上述条件分别注入色谱仪测定，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，作标准曲线，计算回归方程Y=39.694X+6.129 9，r=0.999 6（n=5），祖师麻甲素进样量在0.046 3 μg～0.231 4 μg范围内与峰面积呈线性关系。

3.6 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液10 μL，重复进样5次，按色谱条件操作进行，测峰面积，以峰面积计算RSD=1.4%，测定方法精密度良好。

3.7 稳定性试验 取上述供试品溶液（批号XJ630062）分别在 0、2、4、6、8 h 进行，进样量 10 μL，测定祖师麻甲素峰面积，以峰面积计算RSD=1.0%，说明供试品溶液在8 h内稳定。

图3HPLC色谱图

3.8 重复性试验 按照上述含量测定方法对相同批号样品（批号:XJ630062）制备5份供试液，分别进样10μL，测得峰面积，计算RSD=2.4%，说明本方法重现性良好。

3.9 回收率试验 取样品（批号XJ630062）9份，每份取约0.5 g，精密称定，分别精密加入祖师麻甲素对照品（0.112 4 mg/g）1.5、1.0、0.8 mL，按正文中供试品溶液的制备方法制备，依法测定，计算加样回收率，结果平均回收率95.4%，RSD=0.5%。结果表明本方法加样回收较好。见表1。

表1 祖师麻甲素加样回收试验结果

本品由于剂型限制，橡胶对提取造成较大困难，故加样回收率偏低，但考虑到本品为外用制剂，且此含量测定方法重现性较好、方法稳定，认为可以控制药品质量。

3.10 样品测定结果 按本实验含量测定方法，对10批样品进行含量测定，结果见表2。

表2 10批样品祖师麻甲素含测结果（n=4）

4 讨论

4.1 原标准中唐古特瑞香鉴别采用纸色谱法，结果色谱斑点大而散，背景干扰较严重。本实验对原方法进行了改进，采用薄层色谱法进行鉴别，斑点清晰，阴性无干扰。

4.2 方中唐古特瑞香为藏族民间用药，其祛风除湿、活血化瘀、抗炎镇痛的主要有效成分为瑞香素（daphnetin），即祖师麻甲素，又名瑞香内酯（7，8-二羟基香豆素）［3］。有文献报道用HPLC法测定唐古特瑞香中祖师麻甲素的含量［4］，本试验进行了参考，但本品为橡胶膏，由于剂型特点，提取难度较大，样品中祖师麻甲素不易提取完全，提取液中残留橡胶对色谱柱损伤较大，所以我们对供试品的提取进行了多方面的考察，最终确定采用水煎煮提取方法。

4.3 根据文献报道［5］，对方中人工麝香进行了GC定量研究，但由于方中人工麝香处方量极低，仅为处方量的0.195/100 0，且本品为外用贴膏剂，基质为天然橡胶，药材粉末及提取物最后加入基质共同入搅拌，制得。故从制剂中提取极为困难，GC几乎检测不到麝香酮的峰。显微鉴别也因基质影响而无法检测。

4.4 参照文献方法［6］对方中山莨菪进行了TLC鉴别研究，因为阴性干扰较大，无法收入正文。

4.5 对方中冰片、樟脑、水杨酸甲酯进行了气相色谱的含量测定研究。实验表明，样品中3种成分可以得到很好的分离，但同批样品中的冰片（以龙脑计）、樟脑、水杨酸甲酯含量不均一，差异大，无法做加样回收试验;样品的稳定性、精密度也差。分析原因，一是由于样品涂布不均匀导致;二是在生产过程中，烘干等工序使得樟脑、龙脑、水杨酸甲酯都有不同程度的损失。故只将上述3种成分进行GC法定性鉴别，含量测定暂不列入正文，我们今后将继续对这3种成分进行含量测定研究。

［1］卫生部药品标准中药成方制剂第十三册［S］.1997:22.

［2］江 生，张小松，毛 庆.GC同时测定消炎镇痛膏中的樟脑、薄荷脑、龙脑和水杨酸甲酯［J］.华西药学杂志，2008，23（6）:706-707.

［3］王明时，刘卫国，忻莉娟.唐古特瑞香化学成分的研究［J］.南京药学院学报，1984，15（2）:1-5.

［4］刘亚蓉.HPLC测定唐古特瑞香中祖师麻甲素的含量［J］.陕西中医，2009，30（1）:85-87.

［5］梁 颖，汪小根.GC-MS法初步分析天然麝香与人工麝香［J］.中药新药与临床药理［J］.2005，16（3）:204-205.

［6］王 环，张晓峰，陈桂琛，等.人工栽培山莨菪和野生山莨菪中4种托烷类生物碱含量的比较研究［J］.西北植物学报，2005，25（3）:575-577.