复方心安软胶囊质量标准研究

2010-05-22李华李明钟雪梅晁衍明第三军医大学军职干休所重庆市400038山东肥城市桃园中心卫生院肥城市7609

中国药房 2010年11期

李华，李明，钟雪梅，晁衍明（.第三军医大学军职干休所，重庆市 400038；.山东肥城市桃园中心卫生院，肥城市 7609）

复方心安软胶囊由丹参、三七、银杏叶、川芎、甘草等8味中药组成，具有活血化瘀、行气止痛、改善微循环等功效。可用于气滞血瘀引起的胸痹、胸闷、心悸及多种中风后遗症。该制剂为颗粒剂改剂型而来，原质控标准没有含量测定项目。为更好地控制该制剂质量，本研究对该制剂中丹参、三七、银杏叶等3味药进行薄层定性鉴别研究，以丹参有效成分丹参素钠为指标成分进行了含量测定研究[1，2]。结果表明，所建标准可用于本制剂的质量控制。

1 仪器与试药

1100型高效液相色谱（HPLC）仪，包括DAD检测器、ChemStation色谱工作站（美国Agilent公司）；LGJ-18型冷冻干燥机（北京四环科学仪器厂）；Laborota 4000型旋转蒸发仪（德国Heidolph公司）；SHB-95型循环水式真空泵（郑州华中仪器厂）；AE 163型十万分之一电子分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）；KQ-500B型超声波清洗器（江苏省昆山市超声仪器有限公司）。

复方心安软胶囊（中国人民解放军海军总医院制剂室提供，批号：080610、080727、080822、080923、081010）；丹参素钠、丹参酮ⅡA、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1、银杏内酯A、银杏内酯B对照品（中国药品生物制品检定所，批号分别为110855-200101、110766-200214、110704-200220、110745-200312、865-9601、0862-200004）；乙腈（色谱纯，美国Fisher公司）；水为超纯水（Milli-Q纯水仪制得），其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别

2.1.1 丹参的TLC鉴别[3]取本品内容物0.5 g、不含丹参的阴性样品0.5 g，分别加乙醚20 mL，超声5 min，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2 mL使溶解，作为供试品溶液及阴性对照溶液；另取丹参酮ⅡA加乙酸乙酯制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯（19∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热20 min。结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置，显相同颜色的斑点；阴性对照无干扰。丹参的TLC见图1。

2.1.2 三七的TLC鉴别取本品内容物0.5 g、不含三七的阴性样品0.5 g，分别加甲醇20 mL，加热回流20 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 mL，微热使溶解，加水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20 mL，合并正丁醇提取液，用氨试液提取2次，每次20 mL，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液及阴性对照溶液；另取人参皂苷Rb1和三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1 mL各含1 mg的混合溶液，作为混合对照品溶液。吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）10℃以下放置12 h的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷10%硫酸乙醇溶液，于110℃加热10 min，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果，供试品色谱中，在与混合对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性对照无干扰。三七的TLC见图2。

2.1.3 银杏叶的TLC鉴别取本品内容物0.5 g、不含银杏叶的阴性样品0.5 g，分别加乙酸乙酯超声提取2次，每次30 mL，蒸干，残渣加15%乙醇5 mL溶解，置已处理好的聚酰胺柱上，用5%乙醇40 mL洗脱，收集洗脱液，蒸去乙醇，残渣加1 mL丙酮溶解，作为供试品溶液及阴性对照溶液；另取银杏内酯A和银杏内酯B对照品，加丙酮制成每1 mL各含0.65 mg的混合溶液，作为混合对照品溶液。吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板（含4%醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂）上，以甲苯-乙酸乙酯-丙酮-甲醇（10∶5∶5∶0.6）为展开剂，15℃展开，取出，晾干，醋酐蒸汽中熏10 min，于140℃加热30 min，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果，供试品色谱中，在与混合对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性对照无干扰。银杏叶的TLC见图3。

图1 丹参的TLC1.供试品；2.阴性对照；3.丹参酮ⅡA对照品Fig 1 TLC of S.Miltiorrhiza1.samples；2.negative sample；3.tanshinone reference substance

图2 三七的TLC1.供试品；2.阴性对照；3.混合对照品Fig 2 TLC of P.notoginseng1.samples；2.negative sample；3.mixture control

图3 银杏叶的TLC1.供试品；2.阴性对照；3.混合对照品Fig 3 TLC of G.biloba1.samples；2.negative sample；3.mixture control

2.2 定量分析[2]

2.2.1 对照品溶液的制备取丹参素钠对照品适量，精密称定，加甲醇制成浓度为50.0 μg·mL-1的溶液，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备取样品约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，称重，超声处理30 min，放冷，再称重，用上述溶剂补足失重，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备按处方比例及工艺条件制备缺丹参的阴性样品，按“2.2.2”项下方法制备阴性对照溶液。

2.2.4 色谱条件与系统适用性试验色谱柱：Nova-pak ODS（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.5%磷酸二氢钾溶液（0.1%磷酸溶液调pH至4.0，15∶85）；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：280 nm；进样量：10 μL。理论塔板数按丹参素钠峰计算应不低于4000。在上述色谱条件下取丹参素钠对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 μL进样，结果表明样品中其它成分对丹参素钠的测定无干扰。色谱见图4。

图4 高效液相色谱图A.对照品；B.供试品；C.阴性对照；1.丹参素钠Fig 4 HPLC chromatogramsA.reference substance；B.sample；C.negative control；1.sodium danshensu

2.2.5 标准曲线的制备精密称取丹参素钠对照品5.0 mg，置25 mL量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度。精密吸取上述溶液0.5、1、1.5、2、3、5 mL，置10 mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀。按上述色谱条件取10 μL进样，记录色谱图。以检测浓度（X）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，制备标准曲线，得回归方程为Y＝12.126X－17.329（r＝0.9996）。结果表明，丹参素钠检测浓度在10.0～100.0 μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.2.6 精密度试验精密吸取对照品溶液，按照上述色谱条件连续进样5次，测定峰面积。结果，RSD＝0.88%，表明仪器精密度良好。

2.2.7 重复性试验取同批次样品，按照“2.2.2”项下方法制备6份供试品溶液，测定并计算其含量。结果，丹参素钠平均含量为每粒2.06 mg，RSD＝2.05%，表明方法重复性良好。

2.2.8 稳定性试验取同一供试品溶液，于室温下放置，在不同时间段（0、2、4、8、16、24、48 h）按上述色谱条件进样测定。结果，RSD＝1.95%，表明供试品溶液在48 h稳定性良好。

2.2.9 加样回收率试验精密称取已知含量的样品约0.5 g（含丹参素钠为每粒1.98 mg）6份，分别精密加入不同质量的丹参素钠对照品，每个质量平行2份，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，测定并计算其含量和加样回收率，结果见表1。